Diapositiva 1

Herpesvirus del ostinJorge Cceres-MartnezRebeca Vsquez-Yeomans

1Caractersticas morfolgicas del OsHV-1NCLEOCPSIDE (116 nm)ENVOLTURA

TEGUMENTO

Forma esfrica poligonal (icosadrica) 207.4 kpbADN lineal de doble cadenaFamilia Malacoherpesviridae

Entre las especies donde se ha encontrado tenemos:

Crassostrea virginicaCrassostrea gigasCrassostrea ariakensisOstrea edulisOstrea angasiTiostrea chilensisRuditapes philippinarumPecten maximusNodipecten subnodosus

Diferentes variedades genticas del virus de diferentes localidadesReece Lab-Moss et al. 2007 y Reece et al. datos no publicados; Reece, 2013

Estas variedades pueden tener diferente virulencia

Las variedades de herpesvirus en zonas endmicas pueden tener diferente virulencia como el caso del OsHV-1 Var, detectada en Francia

Se requiere de mapas de distribucin geogrfica de las variedades de herpesvirus y sus hospederos

Distribucin

Larvas de C. gigas, C. hongkongensis y C. ariakensis, expuestas a tejido infectado de C. gigasSe ha demostrado transmisin horizontalKimberly S. Reece, 2011

% sobrevivenciaDas

El periodo de tiempo ms largo para la deteccin de ADN en el OsHV-1 liberado a partir de larvas maceradas e inoculado en agua de mar fue de 22 das a 4C y de 12 das a 20C (Vigneron et al. 2004)

Sin embargo, la relacin entre la deteccin del ADN en la PCR y la infectividad del virus no se conoce

Mayo, 2013

Se ha detectado en tejidos de ostras adultas, incluido eltejido gonadal (Arzul et al. 2002; Lipart & Renault 2002)

Los adultos pueden ser un origen de la infeccin para las larvas

Sin embargo, lo que no est claro es si se trata de una verdadera transmisin vertical (transmisin por los gametos)

Mayo, 2013

Se ha detectado el ADN de OsHV-1 mediante PCR en tiempo real en el agua de alrededor de C. gigas enfermos (Sauvage et al. 2009)

La enfermedad inducida por la variante OsHV-1 Var puede ser transmitida experimentalmente a travs del agua (Schikorski et al. 2011)

Este es, presumiblemente, el principal modo natural de transmisin del OsHV-1

La transmisin a travs del agua ayuda a explicar episodios de mortalidad distribuidos en parches en zonas de produccin

Mayo, 2013

Reduccin en actividad de nado y alimentacin

Lesiones en manto y velo

Nado errtico en crculos, deposicin en el fondo

A nivel histolgico en ocasiones se ven ncleos anormales con cromatina marginal

Signos de la enfermedad en larvas y semilla

12Causa mortalidad de hasta 100 % en cultivos de larvas y juveniles de ostin

Eventos recurrentes, principalmente en verano

CAUSASCompleja interaccin de factores tales como, incremento de la temperatura, estrs fisiolgico, malas prcticas y contaminantes, entre otros

IFREMER

Impacto en la Industria ostrcola FrancesaFrancia produce 130,000 toneladas al ao, siendo el cuarto productor a nivel mundial despus de China, Japn y Corea del Sur

Problema de graves consecuencias en FranciaOsHV-1 Var2008-2011OsHV-1A herpes virus has decimated oysters along Frances 5,500- kilometer coast for a fourth season

Incremento en la tasa de mortalidad

Histopatologa, permite observar lesiones tpicas asociadas al virus y permite excluir otras posibles causas de mortalidad como protozoos parsitos

PCR se usa para vigilancia y para confirmacin de casos sospechosos

Se utilizan diferentes iniciadoresLa falta de estandarizacin representa un problema potencial

Los test actuales deben ser validados

Hibridacin in situ permite ubicar al virus en clulas y tejidos asocindolo con alteraciones e indicando su condicinDiagnosis

Mayo, 2013a = el mtodo es el recomendado por razones de disponibilidad, utilidad y especificidad y sensibilidad de diagnstico; b = el mtodo es estndar, con buena sensibilidad y especificidad de diagnstico; c = el mtodo tiene aplicacin en algunas situaciones, pero el costo, la precisin u otros factores limitan seriamente su aplicacin; y d = el mtodo no se recomienda actualmente para este fin

HospederoLugarTtuloAutorAoRevistaC. gigasDevelopment of a loop-mediated isothermal amplification assay for rapid and sensitive detection of ostreid herpesvirus 1 DNARen et al.2010Journal of Virological MethodsC. gigasFranciaExperimental ostreid herpesvirus 1 infection of the Pacific oyster Crassostrea gigas: Kinetics of virus DNA detection by q-PCR in seawater and in oyster samplesSchikorski et al.2011Virus ResearchC. gigasItaliaDetection of Type 1 Ostreid Herpes variant (OsHV-1 var) with no associated mortality in French-origin Pacific cupped oyster Crassostrea gigas farmed in ItalyDundon et al.2011AquacultureC. gigasFranciaSuppression substractive hybridisation (SSH) and real time PCR reveal differential gene expression in the Pacific cupped oyster, Crassostrea gigas, challenged with Ostreid herpesvirus 1Renault et al.2011Developmental & Comparative ImmunologyC. gigasFranciaEvidence of herpesvirus (OsHV-1) resistance in juvenile Crassostrea gigas selected for high resistance to the summer mortality phenomenonDegremont2011AquacultureC. gigasFranciaQuantification of ostreid herpesvirus 1 (OsHV-1) in Crassostrea gigas by real-time PCR: Determination of a viral load threshold to prevent summer mortalitiesOden et al.2011Aquaculture

HospederoLugarTtuloAutorAoRevistaC. gigasFrancia, Jersey e IrlandaDetection of different variants of Ostreid Herpesvirus 1 in the Pacific oyster, Crassostrea gigas between 2008 and 2010Martenot et al.2011Virus ResearchC. gigasEspaaFirst report of OsHV-1 microvar in Pacific oyster (Crassostrea gigas) cultured in SpainRoque et al.2012AquacultureC. gigasFranciaDetection of the OsHV-1 Var in the Pacific oyster Crassostrea gigas before 2008 in France and description of two new microvariants of the Ostreid Herpesvirus 1 (OsHV-1)Martenot et al.2012AquacultureC. gigasIrlandaInvestigation of mortality in Pacific oysters associated with Ostreid herpesvirus-1Var in the Republic of Ireland in 2009Peeler et al.2012Preventive Veterinary MedicineRuditapes decussatusEspaaDetection of herpes-like virus in Venerupis (=Ruditapes) decussatus from Huelva coast (SW SPAIN)Lpez-San Martn et al.2013Fish & Shellfish ImmunologyC. gigasPoly I:C induces a protective antiviral immune response in the Pacific oyster (Crassostrea gigas) against subsequent challenge with Ostreid herpesvirus (OsHV-1 var)Green y Montagnani2013Fish & Shellfish ImmunologyC. gigasFranciaIs horizontal transmission of the Ostreid herpesvirus OsHV-1 in Crassostrea gigas affected by unselected or selected survival status in adults to juveniles?Degremont et al.2013Aquaculture

HospederoLugarTtuloAutorAoRevistaC. gigasAustraliaInfluence of husbandry practices on OsHV-1 associated mortality of Pacific oysters Crassostrea gigasPaul-Pont et al.2013AquacultureC. gigasAustralia y FranciaOntogeny and water temperature influences the antiviral response of the Pacific oyster, Crassostrea gigasGreen et al.2013Fish & Shellfish ImmunologyC. gigasFranciaSize and genotype affect resistance to mortality caused by OsHV-1 in Crassostrea gigasDegremont2013AquacultureGenome exploration of six variants of the Ostreid Herpesvirus 1 and characterization of large deletion in OsHV-1Var specimensMartenot et al.2013Virus Research

Herpesvirus OsHV-1 en Mxico

Vsquez-Yeomans, R., A. M. Garca-Ortega y J. A. Cceres-Martnez. (2010) Gill erosion and herpesvirus in Crassostrea gigas cultured in Baja California, Mxico. Diseases of Aquatic Organisms. 89: 137-144 Vsquez-Yeomans, R., J. A. Caceres-Martinez y A. Figueras Huerta. (2004) Herpes-like virus associated with eroded gills of the Pacific oyster Crassostrea gigas in Mexico. Journal of Shellfish Research. 23(2): 417-419 Cceres-Martnez, J. A. y R. Vsquez-Yeomans. (2003) Presence of giant polymorphic cells in Crassostrea gigas cultured in Bahia Falsa, Baja California NW Mexico. Journal of Shellfish Research. 22(3): 711-714 Chvez Romero, Y. A., J. A. Cceres-Martnez, R. Vsquez-Yeomans y A. M. Garca -Ortega. (2011) Genetic characterization of ostreid herpesvirus associated with mortalities of Pacific oyster Crassostrea gigas in northwestern Mxico. En 2011 International Malacology Reunion Del 27 al 30 de junio. La Paz, Baja California Sur, Mxico. Western Society of Malacologists. Abstract.Estudios de herpes virus en MxicoCceres-Martnez, J. A. y R. Vsquez-Yeomans. (2010) Presence of epibionts and herpesvirus in the lion-paw scallop Nodipecten subnodosus. En Aquaculture 2010 Del 01 al 05 de marzo. San Diego, California, Estados Unidos. World Aquaculture Society. Abstract.

Grijalva-Chn, J. M., R. Castro-Longoria, J. Ramos-Paredes, T. L. Enrquez-Espinoza y F. Mendoza-Cano. (2013) Detection of a new OsHV-1 DNA strain in the healthy Pacific oyster, Crassostrea gigas Thunberg, from the Gulf of California. Journal of Fish Diseases. 36(11): 965-968.

Se han presentado episodios de mortalidades recurrentes de ostin en la regin asociados con el Herpesvirus, especialmente en semilla y juveniles

Al menos un episodio de mortalidades y bajo rendimiento de almeja mano de lenSonoraBaja California surBaja CaliforniaSinaloa

El primer registro se logr a travs deMETAfecta al ostin Crassostrea gigas y a la almeja Mano de Len

ABCD10 m100 m10 m10 mLo podemos encontrar activo o en degradacin dentro de las clulas de defensa de hospederos adultosLos adultos son menos susceptibles peropueden ser portadores asintomticos (Vsquez-Yeomans et al. 2010)

Dgremont (2013) encontr mayor resistencia a mortalidad causada por OsHV-1 en ostiones de mayor edad y talla, lo que sugiere una maduracin del sistema inmune en contra del virus.

1234Evidencias yvalidacin

?

b6MortalidadesLesionesAlteraciones histolgicasMETPCR- secuenciacinHIS

Presencia del OsHV en Baja CaliforniaAoMesLocalidadEstadio de desarrolloMortalidad2002AgostoBaha FalsaJuvenilSin datos2005AgostoBaha FalsaJuvenil Sin estimar2006AbrilSan QuintnSemilla (20-30 mm)Sin estimar2008SeptiembreSan QuintnAdulto (115-123 mm)No2008NoviembreBaha FalsaAdulto (83-110 mm)No2009JunioBaha de Todos SantosSemilla (3 mm)70%2009JulioBaha FalsaSemilla (2-3 mm)97%2009JulioBaha de Todos SantosSemilla (3 mm)40%2009JulioLaguna ManuelaSemilla (20-37 mm)85-95%2009AgostoBaha FalsaJuvenil (48-68 mm)Sin estimar2009AgostoBaha FalsaSemilla (11-20 mm)Sin estimar2009AgostoLaguna ManuelaJuvenil (26-52 mm)Sin estimar2009NoviembreLaguna ManuelaSemilla (5-10 mm)Sin estimar2009NoviembreLaguna ManuelaSemilla (5- 20 mm)Sin estimar2009DiciembreBaha FalsaJuvenil (30-45 mm)Sin datos2010EneroLaguna ManuelaSemilla (15-25 mm)70%2010MarzoGuerrero NegroSemilla (25-35 mm)50%2011JunioFlupsy EnsenadaSemilla (2-5 mm)100%2011JulioFlupsy EnsenadaSemilla (8-10 mm)79%

2 -37 mm 73% (40-97%) Verano

Presencia del OsHV en Baja California Sur.AOMESLOCALIDADESTADIO DE DESARROLLOMORTALIDAD2008NoviembreBaha TortugasJuvenil (50-60 mm)No2008NoviembreBaha TortugasJuvenil (43-60 mm)No 2008DiciembreBaha TortugasJuvenil (36- 52 mm)Sin estimar2008DiciembreBaha TortugasJuvenil (35-55 mm)Sin estimar2009MarzoBaha TortugasAdulto (55-80 mm)Sin estimar2009MarzoBaha TortugasAdulto (82-134)No2009AbrilBaha TortugasSemilla (5-10 mm)Sin estimar

5 -55 mm.

Presencia del OsHV en Sonora.AOMESLOCALIDADESTADO DE DESARROLLOMORTALIDAD2007EneroEl RitoAdulto (74-90 mm)No2007EneroEstero MoraAdulto (82-113 mm)No2007MarzoBaha del TobariJuvenil (36-55 mm) 80%2007MarzoEstero MoraAdulto (82-13 mm)No2007MarzoBaha de KinoAdulto (83-90 mm) No2007MarzoBaha de KinoSemilla (5-15 mm) 75%2007MayoEstero MoraAdulto (80-100 mm)No2007NoviembreEstero MoraAdulto (85-115 mm)No2008MarzoBaha San JorgeAdulto (65-92 mm)No2008MarzoBaha de KinoJuvenil (27-40 mm) 60-70%2008MarzoBaha de KinoSemilla (15-20 mm) 70%2009AbrilBaha de KinoSemilla (15-20 mm)100%2009AbrilEl RitoAdulto (90-130 mm) 50%2009MayoEl RitoAdulto (85-105 mm)Sin estimar2009NoviembreEstero Los MlagosSemilla (10-15 mm)Sin estimar2009NoviembreEstero La CinitaJuvenil (30-47 mm)No

5-55 mm 80% (60-100%) Primavera

Presencia del OsHV en Sonora

AOMESLOCALIDADESTADO DE DESARROLLOMORTALIDAD2011MarzoEstero La CinaJuvenil (40-53 mm)Sin estimar2011MarzoEstero La Santa CruzJuvenil (38-50 mm)Sin estimar

AOMESLOCALIDADESTADO DE DESARROLLOMORTALIDAD2005MarzoBaha de AltataJuvenil (30-47 mm) 70-80%Sinaloa30 a 47 mm 75% (70-80%)Presencia del OsHV en Sinaloa

Sinaloa

Cinco o ms variedades Mexicanas de OsHV-1Detection of Oyster herpesvirus (OsHV) using PCR: M) 100bp Molecular marker (Invitrogen); Line 1) Positive control (Genomic viral DNA, 100 ng per reaction); Lines 2, 8) Negative control (Sterile water); Lines 3 to 7) tissue samples.100 pb600 pb

M12345678MTesis de Maestra de Yosef Amin Chvez Romero

Los resultados de secuenciacin indican que las variedades encontradas en EUA y Mxico, son ms similares al OsHV-1 que al OsHV Var

Qu sabemos del herpesvirus?1.- Se tienen evidencias de transmisin vertical de Herpesvirus en moluscos.

2.- Se ha demostrado transmisin horizontal en moluscos.

3.- Se ha encontrado que el Herpesvirus puede infectar diversas especies de moluscos.

4.- El Herpesvirus puede permanecer latente despus de la primera infeccin.

5.- El Herpesvirus puede activarse en condiciones de estrs.

Posible ciclo de accin viral en el ambienteSemillaNoSiZona de cultivoOSTINportadorOSTINsanoESTRSMORTALIDADResistenciaSiNoMERCADOSiNoHERPESVIRUSInfeccin?Infectada?Se mantiene en el ecosistema?SiNoSe mantiene en el ecosistema?SiNo

Prcticas generales de manejo

La bioseguridad puede aplicarse con xito en laboratorios de produccin de larvay semilla (hatcheries)

Los herpesvirus son frgiles fuera de sus hospederos. La temperatura elevada, las sustancias qumicas o la luz solar (UV) pueden destruir su cubierta de contenido lipdico

Sin embargo, se ha demostrado que cada especie individual de virus herpes puede tener una estabilidad diferente frente al tratamiento de inactivacin y que las sales inorgnicas como el Na2SO4 presentes en el agua de mar pueden estabilizar los virus herpes (Wallis & Melnick, 1965)

Mayo, 2013

En laboratorios, los brotes de OsHV-1 pueden controlarse mediante una cuarentena y medidas de higiene como la inactivacin del virus mediante el uso de tratamientos, como la irradiacin ultravioleta del agua de recirculacin y las tecnologas de filtracin del agua

Sin embargo, es necesario tener presente que la reduccin de la carga vrica depende del ttulo inicial y de la capacidad de reduccin del virus que tengan las tcnicas utilizadas para la inactivacin.

El equipo utilizado en una zona infectada no debe ser enviado y utilizado en una zona no afectada sin una limpieza y desinfeccin adecuadas

36RECOMENDACIONES

Evitar la introduccin de moluscos bivalvos provenientes de zonas con antecedentes de mortalidad asociadas al OsHV-1 y OsHV-1 Var y evitar la exportacin de organismos provenientes de zonas con antecedentes de mortalidad asociadas al OsHV-1 y OsHV-1 Var hacia zonas libres de herpesvirus para evitar su propagacin

Despus de la aparicin del OsHV-1 Var, nuevas variantes siguen emergiendo. El nmero de mutaciones depende del nmero de ciclos de replicacin durante la fase infectiva del virus, por lo tanto, es sumamente importante controlar los eventos de mortalidad ya que estos favorecen la aparicin de mutantes

Monitoreo ambiental (alerta temprana)

Exigir y presentar certificados de sanidad en la comercializacin de moluscos bivalvos

Vigilar el cumplimiento de las buenas prcticas de produccin acucola

Evitar la introduccin de especies exticas sin un estudio previo de carga parasitaria

Crear un programa de seleccin gentica de organismos resistentes al OsHV-1 y OsHV Var

Planificar pocas de siembra y manejo (desdoble)

RENAMOARED MAREOGRFICA REGIONAL

RED NACIONAL DE MONITOREO ACUCOLA AMBIENTAL (RENAMOA)

TemperaturaSalinidadOxgenopHConductividadMareasCorrientesNitritosNitratosAmonioClorofilasTurbidezVientoSalud del sedimentoSalud del aguaSalud delorganismo

RENAMOA

RED MAREOGRFICA REGIONAL

RED NACIONAL DE MONITOREO ACUCOLA AMBIENTAL (RENAMOA)

RENAMOA

RENAMOA

RENAMOA

RENAMOA

RED MAREOGRFICA NACIONAL

RED NACIONAL DE MONITOREO ACUCOLA AMBIENTAL

RENAMOA

RENAMOA

RENAMOA

Base de datosAnlisis de informacinRENAMOA

HospederoParsitoAmbienteNENENENENENEEINTERACCIN PARSITO-HOSPEDERO-AMBIENTEEstudio del hospederoEstudio del parsito-patgenoEstudio del ambienteTrada de la enfermedadTrada de la enfermedad

ParsitoAmbienteINTERACCIN PARSITO-HOSPEDERO-AMBIENTE-MANEJOTtrada de la enfermedadHospederoManejoENENENENEEstudio:

Apoyo de:Dr. Miguel ngel del Ro Portilla (CICESE)Dra. Carmen Paniagua Chvez (CICESE)M.C. Mauricio Garca Ortega (ISA)

Dr. Antonio Figueras (CSIC)Dr. Tristan Renault (IFREMER)Dra. Kimbery Reece (VIMS)Dra. Collen Burgen (Washington University)Dra. Carolyn Friedman (Washington University)Dr. James Moore (UC Davis)

Tesistas:

M.C. Yosef Amn Chvez Romero (CICESE)M.C. Jenniffer Villalva Vega (CICESE)

43AGRADECIMIENTOS

SUBNARGENA del CICESE

La investigacin continua

Gracias!