ESPERIENZA N°4

CROMATOGRAFIA

NN

N N

Mg

O

COOH

CH2-CH2C-O-fitile

O

CH3CH2-CH3

CH3

R

CH3

CH2=CH

R= CH3 clorofilla aCHO clorof illa b

Fitile: -CH2-CH=C-CH2-(CH2-CH2-CH-CH2)2-CH2-CH-CH-CH3

clorof illa

CH3 CH3 CH3

CH3 CH3 CH3

CH3 CH3 CH3CH3CH3

CH3

CH3

Il termine CROMATOGRAFIA indica una serie di metodi analitici in grado di: ²  SEPARARE, ²  RICONOSCERE QUALITATIVAMENTE, ²  QUANTIFICARE SINGOLARMENTE

una miscela, anche molto complessa, nei suoi componenti in base alle loro proprietà chimiche e fisiche.

Questi metodi si basano sulla DISTRIBUZIONE DIFFERENZIALE dei vari componenti tra due fasi: la FASE FISSA (o FASE STAZIONARIA) e la FASE MOBILE (o ELUENTE, che fluisce in continuo attraverso la fase fissa)

CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA

Il termine CROMATOGRAFIA deriva dal greco CHROMA: colore e GRAPHEIN: scrivere ed è legato al suo inventore, un botan i co russo d i nome Micha i l Semenovich Tswett che all’inizio del XX secolo intendeva separare le sostanza coloranti della clorofilla.

Tswett fece un estratto di foglie verdi in etere di petrolio, lo depositò in testa ad una colonna di vetro impaccata con carbonato di calcio ed eluì (cioè versò di continuo) con solfuro di carbonio. I pigmenti si separarono in singole bande colorate lungo la colonna.

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Egli intuì che la separazione era dovuta alla differente AFFINITÀ che i vari pigmenti avevano per la polvere calcarea

❉ STATO FISICO DELLA FASE MOBILE

CLASSIFICAZIONE DELLE TECNICHE CROMATOGRAFICHE

Le Tecniche Cromatografiche possono essere classificate in base:

CROMATOGRAFIA LIQUIDA (LC): la fase mobile è un liquido nel quale siano solubili i componenti della miscela da separare; la fase stazionaria deve essere insolubile nella fase mobile. GASCROMATOGRAFIA (GC): la fase mobile è un gas che funge da carrier per i componenti della miscela.

❉ FORMA DEL LETTO CROMATOGRAFICO CROMATOGRAFIA SU COLONNA: la FS è contenuta all’interno di una colonna cilindrica, che può riempire completamente (COLONNA IMPACCATA) oppure rivestirne la superficie interna (COLONNA TUBULARE)

CROMATOGRAFIA PLANARE: la FS è distribuita su una superficie piana, che può essere un supporto cartaceo (CROMATOGRAFIA SU CARTA, PC) o una lastrina in vetro o altri materiali (CROMATOGRAFIA SU STRATO SOTTILE, TLC)

❉ MECCANISMO DI SEPARAZIONE ADSORBIMENTO RIPARTIZIONE SCAMBIO IONICO

ESCLUSIONE AFFINITÀ

❉ ELUIZIONE DEGLI ANALITI CAPILLARITÀ GRAVITÀ PRESSIONE

POTENZIALE ELETTRICO

CROMATOGRAFIA SU COLONNA CLASSICA Le COLONNE impiegate sono generalmente di vetro e possono essere di varie dimensioni.

Battente di liquido

Il RIEMPIMENTO DELLA COLONNA può essere di: •  materiale solido adsorbente,

finemente suddiviso, asciutto e scelto opportunamente (LSC);

•  supporto granulare inerte, successivamente impregnato con un solvente opportuno che costituirà la FS (LLC).

Il SOLVENTE scelto viene fatto fluire attraverso la colonna.

Separazione bande

Recupero Soluto 1

Recupero Soluto 2

I componenti trattenuti nella FS si muoveranno più lentamente di quelli che rimangono nella FM. è Si realizzerà una MIGRAZIONE DIFFERENZIALE CON SEPARAZIONE DEI COMPONENTI IN BANDE.

CROMATOGRAFIA SU COLONNA CLASSICA

FASE STAZIONARIA

La FS, gel di silice (70-230 mesh) è contenuta all’interno di una colonna cilindrica di vetro, (COLONNA IMPACCATA)

FASE MOBILE

Miscela di:

Etere di petrolio 40°-70°C/ Acetone Per impaccare è 8/2

Per eluire è7/3