El laboratorio en el estudio del paciente hemato-oncológico

Daniel Lagos

Tecnología Médica

Universidad de Chile

L e u c e m i a s

Linfática Sd. MieloproliferativosMieloides

Agudas Crónicas

M0-M7 Blastos Seg

Agudas Crónicas

L1-L3

LCC Tricoleucemias

Policitemia vera

Trombocitemia escencial

Mielofribrosis ideopática

crónica

F L U J O G R A M A D I A G N Ó S T I C O

Paciente

SíntomaFiebre

Médico general

Hemograma

Consulta especialista

Sospecha diagnóstica a través de características o manifestaciones clínicas

Exámenes de Laboratorio confirmación diagnóstica:

- Estudio de citomorfología- Estudio de inmunofenotipo- Estudio citogenético- Estudio de biología molecular

Diagnóstico de enfermedad hemato-oncológica

Tratamiento:- Quimioterapia- Radioterapia- Medicamentos- Trasplante de Médula osea

Seguimiento:- Citometría de flujo- FISH- PCR

L A B O R AT O R I O

Diagnóstico de enfermedades hematológicas

Mejor Caracterización

Inmunofenotipo(citometría de flujo)

Biología molecular(PCR)

Confirmatorios

Técnicas citogenéticas:- FISH- Cariograma

Morfológicas:- Mielograma- Hemograma- Tec. Citoquímicas

*El diagnóstico de las enfermedades hemato-

oncológicas sigue basándose en gran

medida en la clínica del paciente, la morfología y el análisis citoquímico de

las células.

E S T U D I O S C I T O M O R F O L Ó G I C O S

MIELOGRAMAEstudia cuantitativa y cualitativamente la composición medular de la médula ósea.

Imagen 1: Hiperplasia Mieloide de Médula ósea. Muestra de aspirado medular en la cual se observa una relación mieloide eritroide mayor a 1:3, que sugiere una pérdida de precursores eritrocíticos o una expansión de elementos mieloides.

CITOQUÍMICAEstudia la composición química de las células pudiendo detectar y precisar la localización de algunos principios inmediatos, enzimas y sustancias inorgánicas.

- Carbohidratos: reacción de ácido peryódico de Shiff o reacción de PAS.

- Ez. Oxidantes: Reacción de las peroxidasas.

- Ez. Hidrolíticas: fosfatasa alcalina, ácida, muramidasa, esterasas específicas.

- Componentes Inorgánicos: hierro azul de prusia o de Perls.

Enfermedad Perfil carácteristico

Leucemia aguda mieloblástica Peroxidasa +

Leucemia aguda linfoblástica Peroxidasa –Fosfatasa ácida + (estirpe T)

Leucemia mieloide crónica Fosfatasa alcalina granulocítica muy disminuida o indetectable.

Policitemia vera Fosfatasa alcalina granulocítica muy aumentada

Leucemia linfática crónica B Fosfatasa ácida y glucoronidasa muy disminuida

Leucemia linfática crónica T Fosfatasa ácida y glucoronidasa muy aumentada

TÉCNICAS CITOQUÍMICAS

E S T U D I O S C I T O G E N É T I C O S

Detección de alteraciones cromosomales ya sean numéricas o estructurales.

Leucemia Mieloide Crónica t(9;22)(q34;q11)

Imagen 2: Cromosoma Philadelphia marcador citogenético de la LMC, presente en un 95% de los casos. Determina la formación del gen de fusión BCR-ABL.

Leucemia Promielocítica Aguda t(15;17)

Imagen 3: traslocación entre los cromosomas 15 y 17, cuyo producto es el gen de fusión PML-RARa.

C I T O M E T R Í A D E F L U J O

La citometría de flujo a ayudado en el diagnóstico y clasificación de las enfermedades hemato-oncológicas en distintos tipos de acuerdo al linaje y estado madurativo de sus células, mediante el uso de marcadores y características de éstas.

Estudio Básico:- Linfoide B- Linfoide T- Mieloide- No específicos

CD19, citCD22, citCD79a, CD10citCD3, CD2, CD7, sCD3Anti-MPO, CD13, CD33, CD65, CD117TdT, CD34, HLA-DR, CD9, CD38

Estudio Ampliado:- Sí línea B- Sí línea T- Sí mieloide

Clgu, slg, kappa, lambda, CD20CD1a, sCD3, CD4, CD5, CD8, TcRα/β, TcRγ/δCD14, CD15, CD41, CD42, CD61, CD64, CD36, glicoforina A.

Panel de caracterización de Leucemias Agudas

Imagen 4. Diferenciación de poblaciones celulares mediante citometría de flujo. Medición de Side Scatter (complejidad) y Forward Scatter (tamaño).

Información que entrega la citometría de flujo, tamaño y complejidad.

B I O L O G Í A M O L E C U L A R

Usada en el diagnóstico, establecimiento de pronósticos y la monitorización de tratamiento en las enfermedades hemato-oncológicas.

Seguimiento por qPCR de paciente con LMCr en remisión.

Imagen 5. Disminución del número de copias, expresado en porcentaje , del gen de fusión BCR-ABL característico de la Leucemia Mieloide Crónica, en el tiempo de tratamiento en meses.

Detección de la mutación de mal pronóstico FLT3-ITD

Imagen 6. Detección de la mutación FLT3-ITD, que da un mal pronostico asociado a leucemias, por PCR convencional. La banda P3 muestra una banda adicional de mas de 365 pb.

>365 pb365 pbNormal