eii-calprotectina fecal

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José Antonio Castellano del Toro FIR-1 Análisis Clínicos H.U.G.C.D.N. Abril 2014

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Page 1: EII-Calprotectina fecal

José Antonio Castellano del Toro FIR-1 Análisis Clínicos

H.U.G.C.D.N.Abril 2014

Page 2: EII-Calprotectina fecal

.

• EII: Enfermedad de Crohn (EC), Colitis Ulcerosa (CU) y Colitis Indeterminada.

• Edades tempranas (15-35 años), evolución crónica, brotes y tendencia a la NO CURACIÓN¡¡¡

• Etiología desconocida• Lesión asociada a respuesta inmunológica de

extensión variable.• Objetivo: Búsqueda de biomarcadores que

ayuden en el diagnóstico y monitorización de la enfermedad.

Page 3: EII-Calprotectina fecal

1. Incidencia en poblaciones occidentales:

5-10 casos/ 100.000 habitantes•Colitis Ulcerativa: 1/1000 habitantes

•Enfermedad de Cröhn: 1/1500 habitantes

•España: 8-16 casos / 100.000 habitantes

(CU > 2 veces EC)

2. Prevalencia:

-Distribución Norte > SUR

( Caucásicos y judíos > raza negra, asiática)

-Sexo: Sin predominio significativo

Ligeramente aumentado en mujeres

-Edad: 15-35 años y 60-80 años (CU)

-Predominio urbano: Dieta alta en grasas

y pobre en fibras sobretodo en CCR.

EPIDEMIOLOGÍA

Page 4: EII-Calprotectina fecal

EPIDEMIOLOGÍA

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FACTORES GENÉTICOSRESPUESTA INMUNOLÓGICA

(innata/adquirida)

FACTORES AMBIENTALES

MICROFLORA INTESTINAL

( patógena vs comensal)

EII (CU/EC)

ETIOPATOGENIA

Page 6: EII-Calprotectina fecal

• Fiebre 1er síntoma

• Enfermedad contínua

• Dolor abdominal contínuo, espontáneo (cuadrante inferior derecho) empeoramiento en la palpación

• Diarrea ( 3-4 movimientos intestinales / día ) consistencia semilíquida/acuosa y no sangre visible, aunque de sangre oculta es frecuente

• Alteración de la absorción sales biliares (esteatorrea)

En ocasiones fiebre y pérdida de peso (10-15 kg/casos grave)

Enfermedad intermitente.

Dolor abdominal tipo cólico , a veces grave

( no confundir con apendicitis ).

Diarrea recurrente ≠ nº de deposiciones/día, con o sin sangrado o con moco rectal.

Tenesmos

CLÍNICA

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Manifestaciones extradigestivas:

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Todo el Tubo Digestivo Sólo Colon

CLASIFICACIÓN

Page 9: EII-Calprotectina fecal

Colonoscopia+ biopsia (gold stándard)DIAGNÓSTICO

COLITIS ULCEROSA

ENFERMEDAD DE CRÖHN

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PRUEBAS COMPLEMENTARIASDIAGNÓSTICO

- Técnica de imagen : gammagrafía con leucocitos marcados

-“Marcadores Biológicos de Actividad” o Reactantes de FaseAguda : Anemia, leucocitosis, PCR, Velocidad de Sedimentación

Globular (VSG), Alfa-1-glicoproteína ácida (Orosomucoide), calprotectina fecal.

-Marcadores serológicos de autoinmunidad: pANCA (más frecuentes en CU 60%, 10-15% EC) y pASCA (más frecuente en EC 50-80%)

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OTROS MARCADORES

SEQC (Bioquímica de las heces) 2008

DIAGNÓSTICO

Page 12: EII-Calprotectina fecal

1. Aminosalicilatos:

- 5-ASA = mesalazina (inhibe la 5-Lipooxigenasa)

- Sulfasalazina (5-ASA+ sulfapiridina) “profármaco” (comprimidos, supositorios o enemas 500 mg)

2. Glucocorticoides:

- Prednisona, Budesonida, 6m-prednisona (comprimidos, enemas, espumas rectales, viales i.v.) 35-50 mg/24h. v.o.

3. Inmunosupresores:

- Azatioprina, 6-mercaptopurina, metotrexato, ciclosporina.

ADEMÁS: Metronidazol. (E. Cröhn ileal, EII severa)

¡OJO! No pautar antidiarreicos opiáceos o anti-Colinérgicos

MEGACOLON TÓXICO: deshidratación, hipotensión,shock, distensión y dolor abdominal, fiebre, taquicardia, leucocitosis…

Page 13: EII-Calprotectina fecal

Terapia Biológica y nuevos agentes:

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Page 15: EII-Calprotectina fecal

CALPROTECTINA FECAL

Page 16: EII-Calprotectina fecal

CALPROTECTINA • Proteína (S100A8) 36 Kda fijadora de Ca2+ y Zn2+.

• Citoplasma de neutrófilos (60%) y monocitos + macrófagos

reactivos.

• Propiedades bacteriostáticas y fungistáticas.

• Interviene en mecanismos de defensa e inflamación.

• Efecto antiproliferativo tumoral. (in vitro)

• Concentración en heces 6:1 frente a la plasmática ( saliva, orina y

LCR).

Ventajas:

a)Elevada resitencia a la degradación enzimática y bacteriana

(desarrollo del test)

b)Gran estabilidad en heces: hasta 7 días a temperatura ambiente.

Si almacenamiento > 7 días (congelar -20ºC)

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TIPOS DE ENSAYOS1- Enzimoinmunoanálisis (ELISA): “gold estándar”. -placas (96 pocillos de reacción) (Eurospital)R*-monotest (1-10 pocillos de reacción individual) (Alegría) T’= 2 horas.

2- Fluoroenzimoinmunoensayo(ELiA/FIA): (Thermofischer-Phadia)Fluorimetría aumenta “sensibilidad”. T’=2 horas.

3- Inmunocromatografía:(Quantum Blue- Bühlmann®)

Interpretación de los resultados:

Page 18: EII-Calprotectina fecal

+ -

ALGORITMO

Page 19: EII-Calprotectina fecal

RANGOS DE REFERENCIA

Determinación de Calprotectina

en heces

<50 µg/g 50-200 µg/g >200 µg/g

Enfermedad FuncionalSíndrome del Intestino o

Colon Irritable

Baja actividad InflamatoriaEII en remisión

Enfermedad Orgánica activaEII

Endoscopia, técnica de imagen, muestra histológica,

exclusión de CCR

Diferenciar CU/EC;Serología:ASCA

ORIENTACIÓN

Page 20: EII-Calprotectina fecal

RANGOS DE REFERENCIA

Concentraciones de CPF en los diferentes grupos (p < 0,001).

Maria del Valle Garcia Sanchez y colab. 2006

CPF media (DE), mg/kg

113,72 (113,15)

158,30 (155,81)

726,61 (533,18)

2.171,12 (2.133,61)

Page 21: EII-Calprotectina fecal

1. ELISA•En 1992 Roseth y cols. (2) primeros en determinar CF

10 μL

90 min = Resultado

LD=(15-1000 μg/g)LD=(15-500 μg/g)

Page 22: EII-Calprotectina fecal

2. Fluoroenzimoinmunoenzayo (ELiA/FIA)

LD=(15-3000 μg/g)

1. Antígenos de la FS únen anticuerpos CF de la muetra

2. Se eliminan AC no específicos y se unen AC marcados al AC diana formando un complejo.

3. Período de incubación:-Elimina AC marcados no unidos.-Complejo se incuba con agente de desarrollo.

4. Medimos Fluorescencia. A mayor Fluorescencia, mayor % de AC = Mayor concentración de CF

Page 23: EII-Calprotectina fecal

3. Inmunocromatografía

Resultados:

Cuantificación

LD=(30-300 μg/g)

Page 24: EII-Calprotectina fecal

RESULTADOS

Técnica BÜHLMANN ALEGRIA PHADIA Eurospital

Nº Muestras 33 21 37 ?

Sensibilidad 100% 100% 87,50% 95%

Especificidad 57,10% 92,30% 95,20% 93%

Concordancia (K) 0,492 0,901 0,834 -

Eficacia 72,70% 95,20% 91,90% -

VALORACIÓN DEL ÍNDICE KAPPA

Valor de K Fuerza de concordancia

< 0.20 Pobre

0.21 - 0.40 Débil

0.41 - 0.60 Moderada

0.61 - 0.80 Buena

0.81 - 1.00 Muy buena

(www.medcalc.org ) MedCalc Software- Belgium

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1. Diferenciar Síndrome de Intestino Irritable (SII) vs EII

Niveles superiores de CF en EII. (Sensibilidad= 81,7% y Especificidad = 83,5%) Tibble et al. 2002

Identificar EC con Sensibilidad= 100% y Especificidad =97% ( cut-off = 30 μg/g)

Inconveniente: Necesidad de estudios multicéntricos con gran volúmen poblacional ¡¡¡¡

2.Cáncer colorectal: cribado y vigilancia de sujetos de alto riesgo.

(Poco estudiado) Marcadores más empleados: CEA, CA 19.9 y Sangre Oculta en Heces.

3. Monitorización de fármacos (sintomatología, índices clínicos)

-Aminosalicilatos, prednisona y azatioprina (tras 8 semanas colonoscopia)

- Infliximab y Adalimumab (niveles TNF-α) Sipponen T et al. 2008

4. Enteropatías inducida por AINES (niveles anormales CF)

5. Enfermedad Celíaca (no existen estudios concluyentes)

6. Otras patologías: Fibrosis quística, enteritis infecciosas, quimioterapia,

inmunosupresión.

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CONCLUSIONES• La CF es un marcador fiable de inflamación de la mucosa

intestinal.• Económico y fácil de realizar (ELISA)• Permite discriminar pacientes en riesgo de presentar una EII.• Utilidad en la diferenciación de la EII del SII o SCI.• Buena correlación con método de referencia (colonoscopia)• Monitorización de la respuesta al tratamiento• Predicción del riesgo de recidivas.

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GRACIAS

En el hombre hay una serpiente: el intestino, que tienta, traiciona y castiga.

Victor Hugo

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