DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFLAMATIEI

REACTANTI (PROTEINE) DE FAZA ACUTA (I)Definitie: proteine hepatocitare, cresterea / scaderea concentratiei cu > 25 % in inflamatieApar in inflamatii acute, dar si cronice (in evolutie)Sunt nespecifici: NU indica etiologia !

REACTANTI (PROTEINE) DE FAZA ACUTA (II) POZITIVI ()a) cu 50%: ceruloplasmina, fractii complementb) de cateva ori: fibrinogen, 1-antitripsina, haptoglobina, feritinac) de sute-1000 ori :CRP, SAA! dinamica rapidaNEGATIVI ()albumina transferina transthyretina

PRACTIC

VSH FIBRINOGENCRPELECTROFOREZA PROTEINELOR SERICE

De testat toate! (asincronism, discrepanta)

VSHMasoara indirect modificarile reactantilor de faza acuta si imunoglobulinelorTub Westergren (200 mm, =2,5 mm)Normal

Dezavantaje:

Influentat de multi factori (eritrocite, constituenti plasmatici, medicamente)Se modifica lentAmplitudine de variatie mai micaDepinde de varsta, sex, rasa, obezitate, sarcinaVSH b = v/2, VSH f = (v+10)/2

VSH interpretare nuantataCresteri fals pozitive dependente de tehnicaModificari in conditii non-inflamatoare ( in IRC, Sd.N, CH, DZ, anemie, etc sau in ICC, poliglobulie, a/h/dis glob, fibrinogen) Exceptii ( boli sistemice reumatice active, dar cu teste de inflamatie normale) : PR, LES, PM/DM, vasculite Horton, Takayasu

CRPProteina pentamerica, produsa de hepatocitReactioneaza si precipita polizaharidul C al pneumococuluiActiveaza complementul pe cale clasicaModuleaza comportamentul celulelor fagocitareTehnici: ELISA, nefelometrie

ValoriNormal 10 15-20 mg/dl( septicemie, vasculite sistemice, trauma majora)

Avantaje si dezavantajeDinamica rapidaNu este influentata de multi factori ce afecteaza VSHMai costisitoarePoate fi crescuta in conditii non-inflamatoare (IRC) sau normala in BSR active, IH severa

Electroforeza proteinelor sericeCea mai costisitoare Cuantifica direct reactantii de faza acuta Ig = /-globuline (inflamatie cronica)CRP: Fibrinogen: / C3: 1-globuline si 2-globuline (inflamatie acuta) 1 AT Hp albumina, transthyretina (prealbumina), transferina:

ComplementBalanta intre crestere (reactant de faza acuta) si scadere (consum de catre CIC; deficiente genetice, insuficienta hepatica severa)3 probe uzuale: C3, C4 (nefelometrie, ELISA), CH50 ptr. integritatea caii clasiceDeterminari utile in bolile cu consum crescut: LES, vasculita crioglobulinemica si urticariana, GN postStr., EB subac

CrioglobulineDefinitie: Ig care precipita spontan la rece si se resolubilizeaza la cald ( criofibrinogen)Tehnica riguroasa: recoltare, coagulare, centrifugare la 37C, apoi precipitare la 4C si imunoelectroforezaClasificare- tip I: monoclonal IgM (gamapatii monoclon)- tip II: mixt mono IgM si poli IgG (VHC / B)- tip III: poli IgG si M (LES, SSj, PR)

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL AUTOIMUNITATII

Factorul reumatoidDefinitie: Ig M (G, A, D, E) anti Ig G (Fc)

Determinare: aglutinare (Waaler-Rose, Latex) ELISA Nefelometrie

Situatii asociate cu FRBoli reumatice: PR, SSj, BMTC, CME, LES, PM/DMBoli nereumatice:- infectii cronice-boli pulmonare-neoplaziiNormal! (>70 ani: 10-25%)

Utilitatea Test screening prost (Sp ); Sb in PR: 60-80%RP, polimialgie reumatica cu FR+: evolutie spre PR Titru (IgM si IgA) in PR semnifica: 1. boala eroziva2. boala severa3. progresie mai rapida a bolii 4. manifestari extraarticulare (vasculita, NR)5. mortalitate

Anticorpii anti CCP / ACPA = peptide ciclice citrulinate (I)Epitop comun -filagrina (AFA)-keratohialina (APF)-keratina (AKA)-vimentina (anti-Sa)-fibrina/fibrinogenCitrulina = deiminarea argininei: proces nespecific ce apare in apoptoza celulara indusa de inflamatieSp ptr. PR (>90%): prezentarea CCP de catre HLA DR asociate PRSb 50 85% (~ FR)

Anticorpii anti CCP (II)Determinare: ELISA- anti CCP 1 = anticitrulina- anti CCP2 = anti peptide ciclice citrulinateUtilitate:- diagnostica (cel mai Sp test)- preced debutul bolii: test dg precoce- discrimineaza bine poliartritele nediferentiate- prognostica (boala eroziva si agresiva)- NU se coreleaza cu manif. Extraartic.- NU se utilizeaza ptr. monitorizarea bolii

Anticorpii antinucleariDefinitie: anticorpi impotriva acizilor nucleici, proteinelor nucleare, complexelor acizi nucleici-proteine, enzime nucleare

Detectare: -imunofluorescenta indirecta (standard de aur) SI- ELISA sau alte metode imune in faza solida

Boli asociate cu anticorpi antinucleariBoli reumatice sistemice: LES, SSj, BMTC, SS, PM/DM, PR, etc.Boli hepatice autoimuneBoli tiroidiene autoimuneDiverse: medicamente, infectii, neoplaziiNormal!

Substraturi IFIFicat sau rinichi de rozatoare LES ANA negativ

HEp-2: substrat standardizat, cu nucleoli mari, bogat in Ro, sensibilitate crescuta pt. anticorpi nucleari si citoplasmatici

Interpretare rezultateTitru semnificativ 1/80 impreuna cu anamneza si examen clinic sugestivLipsa manifestari suspiciune de boala autoimuna doar la titruri foarte mariRezultate fals pozitive: Normal 1/160: 5% 1/320: 3%1 LES.....1000 N..50 ANA

Tipuri de imagini IFI pe substraturi de rozatoare Omogen (difuz) Inelar (periferic) Patat Nucleolar

Tipuri de imagini IFI pe HEp-2Nucleara- omogena: Ac anti ADNdc, anti histone, etc- omogena / fin patata: anti SCL 70- membranoasa - matriceala- patat grosier: anti spliceozom (U1-RNP/Sm, U2, U4/U6-RNP)- patat fin: anti Ro, La, etc- punctatiiNucleolara- omogena (PM/Scl, Th/To)- in gramajoare (U3-RNP)- patata (ARN pol I)Dependenta de ciclul celular (ex. centromeric , PCNA, etc)Citoplasmatica - patat (ex. ribozomal, ARNt-sintetaze, mitocondrial, etc) - fibrilar (ex. antiactina, tropomiozina, etc)

Omogen ADN dcHistone Nucleozom

Patat grosierSm/U1RNPU2RNPRNPnh

Patat finSSA/RoSSB/LaMi-2Ku, KiARN pol II, III

NucleolarU3RNP ( in gramajoare)ARN pol IPM/Scletc

CentromericCENP-ACENP-BCENP-C

Citoplasmatic patatProteine ribozomale (fin, dens granular, omogen)SRPARNt sintetazeMitocondrieetc

Anticorpi anticitoplasma neutrofilDefinitie: anticorpi anti PRO3 = cANCA anticorpi anti MPO si alte enzime = pANCADetectare: imunofluorescenta, ELISA

Boli asociate cANCAGranulomatoza WegenerPoliangiita microscopicaSd. Churg-StraussPANetc

Boli asociate pANCAPoliangiita microscopicaSd. Churg-StraussSd. GoopastureGWPANLES, PR, SSjMedicamenteetc

Anticorpi antifosfolipidiciTeste serologice fals pozitive pt. luesAnticoagulantul lupic: prelungirea timpilor de coagulare (APTT, etc)Anticorpi anticardiolipina, fosfatidilserina, etcAnticorpi anti 2-GP I

Sindromul antifosfolipidic - clinicTromboze arteriale si venoaseTrombopenieEvenimente obstetricale (avort spontan, moarte in utero, etc )Alte manifestari

Sindromul antifosfolipidicPrimarSecundar:-LES-SSj-APs-PR-SS-Behet-infectii, medicamente, etc