cromatografia pasto.docx

Download CROMATOGRAFIA PASTO.docx

Post on 01-Dec-2015

144 views

Category:

Documents

0 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

INTRODUCCIONLa cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado a un soporte slido.b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionara, mientras que la mvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.Tipos de cromatografaDependiendo de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil se pueden distinguir distintos tipos de cromatografa:a) Cromatografa slido-lquido. La fase estacionaria es un slido y la mvil un lquido.b) Cromatografa lquido-lquido. La fase estacionaria es un lquido anclado a un soporte slido.c) Cromatografa lquido-gas. La fase estacionaria es un lquido no voltil impregnado en un slido y la fase mvil es un gas.d) Cromatografa slido-gas. La fase estacionaria es un slido y la mvil un gas.Segn el tipo de interaccin que se establece entre los componentes de la mezcla y la fase mvil y estacionaria podemos distinguir entre.a) Cromatografa de adsorcin. La fase estacionaria es un slido polar capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.b) Cromatografa de particin. La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y mvil, que son ambas lquidas.c) Cromatografa de intercambio inico. La fase estacionaria es un slido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos iones presentes en la fase mvil.Cromatografa en capa fina.La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa, uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. La fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La fase estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad sern los menos polares.La mezcla a analizar se deposita a una pequea distancia del borde inferior de la placa y se introduce en una cubeta que contiene la fase mvil, que asciende a lo largo de la placa por capilaridad, desplazando a los componentes de la mezcla a diferentes velocidades, lo que provoca su separacin. Cuando el frente del disolvente se encuentra prximo al extremo superior de la placa esta se saca y se visualiza.La relacin entre la distancia recorrida por un compuesto y por el disolvente desde el origen se conoce como Rf (rate factor).Rf= Distancia recorrida por el compuesto/ Distancia recorrida por el disolventeLa bsqueda del eluyente requiere probar con varios disolventes de diferente polaridad o con mezclas. Para compuestos poco polares, que se desplazan con mucha facilidad, se debe utilizar un disolvente apolar como el hexano y en el caso de compuestos de polaridad media, mezclas de hexano y acetato de etilo.La mayora de las placas de cromatografa llevan un indicador fluorescente que permite la visualizacin de los componentes activos a la luz ultravioleta (254 nm). En el caso de componentes que no absorban a la luz ultravioleta, la visualizacin requiere utilizar un agente revelador. El revelador reacciona con los productos proporcionando productos coloreados.Cromatografa en columna.Es el mtodo ms utilizado para la separacin de compuestos orgnico a escala preparativa. La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna de vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso y en un estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la parte superior de la fase estacionaria mientras que la fase mvil atraviesa el sistema. Los compuestos van saliendo por separado de la columna y se recogen en fracciones, los ms polares quedan ms retenidos y para que salgan generalmente hace falta aumentar la polaridad del disolvente. El tiempo necesario para eluir un compuesto de la columna se llama tiempo de retencin.El adsorbente ms utilizado para cromatografa de columna es gel de slice, aunque tambin se puede emplear almina y florisil. La elucin de la cromatografa puede realizarse por gravedad o mediante presin (Flash chromatography), la diferencia en ambos casos est en el tamao de las partculas de gel de slice (0,063-0,200 nm, slice de columna, 0,040-0,063 nm, slice flash). Debido a que la disminucin del tamao de las partculas de adsorbente conduce a una separacin ms eficaz, la cromatografa a media presin (flash) proporciona mejores resultados, adems de ser ms rpida.Las variables que ms influyen en la eficacia de la separacin en cromatografa de columna y utilizando gel de slice como adsorbente son las siguientes:a) Dimetro de la columna y cantidad de gel de slice. La altura del adsorbente est relacionada con la diferencia de Rf de los componentes de la mezcla. El dimetro de la columna con la cantidad de producto a separar.b) Eleccin del disolvente. El disolvente tiene que conducir a una buena separacin de los componentes de la mezcla en capa fina, utilizndose en muchos casos mezclas de disolventes y se realiza una elucin en gradiente. Una de las mezclas ms utilizadas es hexano/acetato de etilo.

Objetivos Extraer los pigmentos de un producto natural asignado por el profesor haciendo uso de la tcnica ms adecuada Elegir mediante cromatografa en capa delgada el eluyente o mezcla de eluyente para separar los diferentes pigmentos de un producto natural por cromatografa en columna Verificar en cromatografa en capa delgada que se logr la separacin de los pigmentos en cromatografa en columna HiptesisSi se selecciona un buen sistema de elucin a partir de la cromatografa en capa fina, por lo tanto se obtendrn los componentes vegetales (clorofila a y clorofila b) del pasto por medio de la cromatografa en columna.

Variables DependientesIndependientes

Adsorbente (seleccin del mejor adsorbente para el pasto)

Disolvente (sistema de elucin para el pasto)

Sustancia a cromatografar

MATERIAL Anillo metlico Mortero con pistilo Pipeta graduada 1/100 Gradilla Tubos de ensayo Embudo de separacin Probeta Soporte universal Pinzas de tres dedos

Reactivos Arena Gel de slice Hexano Benceno Metanol Cloroformo Acetona Etanol ter etlico ter de petrleo Diclorometano

TCNICAPrimeramente se determin el disolvente para el pasto, esto se realiz sometiendo pequeas cantidades de la muestra en los diferentes disolventes empleados, al obtener resultados conforme a lo anterior se pudo obtener el pigmento del pasto para que este fuera utilizado en cada placa de gelice.Se realizaron las cmaras con los diferentes aluyentes que se manejaron y as se someti placa por cmara, donde finalmente se observ la polaridad de cada eluyente , con base a esto se pudo realizar los posibles sistemas de elucin que se empleara en la cromatografa de columna.Obtenido el sistema de elucin adecuado se mont el sistema de cromatografa en columna donde obtuvo los compuestos vegetales del pasto.

Diagrama del procedimiento

Esquemas de los aparatos utilizados en la cromatografa

En el cuadro de arriba se observa cmo se llev acabo la cromatografa en capa fina, como primera parte de la prctica.

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

La imagen muestra el procedimiento y montado del sistema de una cromatografa en columna

RESultados

Maceracin del pastoEleccin de los disolventes

Disolventes

Hexanosi

bencenolevemente

metanolsi mayormente

cloroformono extrajo

acetonasi extrajo

etanolsi extrajo

eter etilicolevemente

eter de petroleono extrajo

diclorometanono extrajo

RESULTADOS DE LA CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

SISTEMAS DE ELUCION OBTENIDOS

ANALISIS Y DISCUSION DE LOS RESULTADOS

En la tabla de los disolventes podemos darnos cuenta que muy pocos extrajeron el pigmento, donde se utiliz una proporcin de tres diferentes disolventes, para extraer el producto vegetal, donde posteriormente se someti a un lavado que posiblemente pudo haber alterado la polaridad, ya que fue en el nico momento en que se tuvo contacto con otras sustancias externas a las utilizadas para la elucion, pero ms adelante se explicara detalladamente.En la cromatografa de capa fina se determin el sistema de eluyentes en base a la polaridad del arrastre que tiene con el pigmento del pasto.Se utiliz como se muestra en las placascromatograficas el ter de petrleo siendo el menos polar, el ter etlico que podemos definirlo con un trmino medio de polaridad y finalmente el de mayor polaridad que fue cloroformo o acetato de etilo, donde claramente se observa que al cambiar este ltimo eluyente modifica gran parte del arrastre del compuesto vegetal, por lo tanto podemos decir que nuestro compuesto vegetal era muy polar.ConclusionesSe puede concluir que se llev a cabo parte de los objetivos ya que al observar lo sistemas de elucin obtenidos en la cromatografa de capa fina,