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Consejos para el mantenimiento de su LC

Agilent Crosslab

Zacarías León

Agilent-ASP, PhD

LC-U(H)PLC-MS-MS/MS

OBJETIVOS

Recomendaciones

generales para el

mantenimiento de su

LC:

Elementos más

importantes y

consejos

Conocer

- Su aplicación y su

método

- Su sistema LC

- Su muestra

Planificar

Mantenimiento

- Menor

(diario/semanal)

- Mayor

(6 meses o anual)

Nano LC

LC Capilar

LC AnalíticoLC Prep

Chip LC

¿Donde están las parte móviles?

¿Dónde puede obstruirse el flujo?

¿Dónde están los consumibles que

necesitan ser reemplazados

frecuentemente (PM)?

¿Dónde pueden aparecer fugas?

¿Qué puedo hacer para eliminar,

reducir o anticipar problemas

potenciales en el LC ?

CONOCER SU LC

Sistema 1100/1200 Infinity

Bomba

Automuestreador

Horno

Detector

Desgasificador

Bomba

CONOCER SU LC

Sistema 1290 Infinity

Bomba con

desgasificador

incorporado

Automuestreador

Compartimento de

columnas

Detector

Cabina de

solventes

CONFIGURACIÓN

DE UNA TORRE:

Esta configuración

optimiza

el paso de flujo y

garantiza un

volumen de

retardo mínimo.

La bomba Agilent

1290 Infinity se

debe instalar

siempre en la base

de la torre de

módulos.

CONOCER SU LC

Sistema 1290 Infinity

Bomba con

desgasificador

incorporado

Termostato

ALS

TCC (horno)

Detector

• CONFIGURACIÓN DE DOS

TORRES:

• En caso de que el termostato del

inyector automático esté

incorporado en el sistema, se

recomienda una configuración

de dos torres de módulos.

• De esta forma, los dos módulos

pesados (la bomba 1290 Infinity y

el termostato) se colocan en la

base de cada torre y se evita

crear una torre alta.

• Algunos usuarios prefieren la

menor altura de esta

distribución, incluso sin el

termostato del inyector

automático.

ALS

CONOCER SU LC

CONOCER FLUJOS,

MINIMIZAR OBSTRUCCIONES

FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!

FASE MÓVIL MUESTRA

EVITAR CRECIMIENTO

BACTERIANO EN BOTELLAS

EVITAR MAYOR DESGASTE DE

COMPONENTES DE LC (SELLOS,

ROTORES DE VÁLVULAS…)

PROPONER MEDIDAS QUE

ABARATEN LA PIEZA A

REEMPLAZAR

(P.E., FILTROS EN LÍNEA VS

COLUMNAS)

IMPORTANCIA DEL

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

CONOCER FLUJOS,



FASE MÓVIL: DTES Y TAMPONES

RAZÓNDIÁMETROS INTERNOS DE CAPILARES DE CONEXIÓN

PARTÍCULAS Y TAMAÑO DE LOS POROS DE LAS COLUMNAS:

CADA VEZ MÁS PEQUEÑOS

FILTRAR ES MÁS IMPORTANTE PARA EVITAR OBSTRUCCIONES

EN VÁLVULAS, CAPILARES Y FILTROS

Color I.D.

Red 0.12 mm (0.005 inches)

Green 0.17 mm (0.007 inches)

Blue 0.25 mm (0.01 inches)

Orange 0.50 mm (0.02 inches)

PUREZA DE LOS DISOLVENTES:

INFLUENCIA EN LÍNEA BASE

CONOCER FLUJOS,




¿CÓMO? HPLC:

0.45 um ó

0.20 um

UPLC:

0.20 um

PN: 3150-0577 (250 mL)

5067-0215 (1.000 mL)

CONSECUENCIAS DE

NO FILTRAR

OBSTRUCCIÓN FILTROS ENTRADA DISOLVENTE:

DISMINUYE RENDIMIENTO DE LA BOMBA

TIEMPOS DE RETENCIÓN IRREPRODUCIBLES

SE EVITAN POSIBLES PICOS FANTASMAS EN DETECTOR

PERTURBACIONES PERIÓDICAS DE LA LÍNEA BASE

FLUJO INESTABLE, PUDIENDO LLEGAR A FALLAR LA BOMBA

(DESGASIFICADOR!)

CONOCER FLUJOS,




CONSIDERACIONES:

pHINTERVALO ACEPTADO EN MÓDULOS HPLC: 1-12.5

PRECAUCIONES

SELLOS ROTOR: TEFZEL O PEEK (1-14) MEJOR QUE VESPEL

DISOLVENTES CON pH < 2.3

NO DEBERÍA CONTENER ÁCIDOS QUE ATAQUEN EL ACERO

INOXIDABLE (P.E., HCl)

DISOLVENTES CON pH > 9.5

FILTROS ENTRADA DTE: ACERO INOX MEJOR QUE VIDRIO

CELDAS FLUJO: CUIDADO CON CUARZO, NO DEJAR TIEMPO

CONOCER FLUJOS,




CONSIDERACIONES:

ABSORBANCIAMÍNIMAS LONGITUDES DE ONDA DE TRABAJO

PRECAUCIONES

DISMINUYE SENSIBILIDAD Y RANGO DE LINEALIDAD

AL ACERCARSE A LA λ DE CUT-OFF

AUMENTA RUIDO Y DERIVA DE LA LÍNEA BASE EN GRADIENTE

Wavelength (nm)190 200 210 220 230 240 250 260

Absorbance (

AU

)

0

0.2

0.4

0.6

0.8 Espectros UV/VIS

Metanol y

Acetonitrilo

200 210 220 230 240 250 nmmin5 10 15 20 25

mAU

0

50

100

150

200

250

300

350

DAD1 A, Sig=210,10 Ref=360,100 (GRAD0801\NV--1402.D) DAD1 A, Sig=210,10 Ref=360,100 (GRAD0801\NV--0301.D)

Metanol

350mUA

Acetonitrilo

16mUA

Blanco gradiente a 1ml/min de

Orgánico /Agua 5 a 100% en 20 min.Columna 125 x 4mm 5μ C18

400mUA

CONOCER FLUJOS,




CONSIDERACIONES:

ABSORBANCIAMÍNIMAS LONGITUDES DE ONDA DE TRABAJO

PRECAUCIONES

AL AUMENTAR LA DIFERENCIA DE ABSORBANCIA ENTRE DTES

AUMENTA RUIDO DE LA MEZCLA OBTENIDA POR LA BOMBA

200 220 240 260 280 300 320 340nmWavelength (nm)200 220 240 260 280 300 320

Absorb

ance (

AU

)

0

0.2

0.4

0.6

0.8

n-Hexano

iso-OH

CH2Cl2

THF

Agua + 100ppm Azida Sódica

Acetona

1 UAEspectros UV/VIS

CONOCER FLUJOS,



MUESTRA

EVITAR MAYOR DESGASTE DE

COMPONENTES DE LC (SELLOS,

ROTORES DE VÁLVULAS…)

MEJORES RESULTADOS

ANALÍTICOS

¿CÓMO?

Los Viales UniPrep llevan

un filtro integrado de

0.20µm o 0.45µm de

porosidad, de materiales

como PTFE, PP, Nylon o

Celulosa Regenerada.

FILTROS DE JERINGA

VIALES MINI-UNIPREP

CONOCER FLUJOS,



MUESTRA

¿EN QUÉ MEDIO RECONSTITUIR O PREPARAR LA MUESTRA?

RELACIÓN ENTRE EL VOLUMEN DE INYECCIÓN Y EL PODER ELUOTRÓPICO DE DTE DE MUESTRA

50µl

560

mUA

5µl

25µl

50µl

5µl

50µl240

mUA

5µl

MUESTRA:

H2O: MeOH (50:50, v/v)

FASE MÓVIL:

H2O: MeOH (20:80, v/v)

TS

MUESTRA:

H2O: MeOH (0:100, v/v)

FASE MÓVIL:

H2O: MeOH (20:80, v/v)

HARDWARE

DESGASIFICADOR

HARDWARE

DESGASIFICADOR

CAUDAL

G1322A G1379B G4225A

BOMBA

MODO TRABAJO

VOLUMEN MUERTO

DETECTOR

>10 mL/min

QUAT

INTERMIT

12 mL

UV

>5 mL/min

BINARIA

(CAP, NANO)

CONTÍNUO

1 mL

UV/FLD/MS

HARDWARE

DESGASIFICADOR

EVITAR

OBSTRUCCIONES

FILTROS ENTRADA DE DISOLVENTE

LAVADOS O REEMPLAZOS DE FILTROS, CUIDADO CON TAMPONES

SUMERGIR EN HNO3 35%, 1 HORA

ENJUAGAR BIEN CON H2O

REINSTALAR, NO UTILIZAR SISTEMA NUNCA SIN FILTROS!

NO SONICAR!

HARDWARE

DESGASIFICADOR

EVITAR CRECIMIENTO

BACTERIANO

FILTROS ENTRADA DE DISOLVENTE

PRECAUCIONES

USO DE BOTELLAS ESTÉRILES (ÁMBAR)

EVITAR EXPOSICIÓN DIRECTA DE LUZ SOLAR (PAPEL Al, VENTANAS)

REEMPLAZAR FASE MÓVIL CADA 2 DÍAS SIN REFILTRAR

SI ES POSIBLE, AÑADIR 5% ORGÁNICO A FASE A O

0.1-1 mM AZIDA SÓDICA

HARDWARE

DESGASIFICADOR

G1322A

PURGA O CEBADO

JERINGA

EN INSTALACIÓN O SI ESTÁN TUBOS TOTALMENTE SECOS

ASPIRAR SOBRE 30 mL IPA

CAMBIO ENTRE DISOLVENTES INMISCIBLES

ASPIRAR SOBRE 15 ML DTE 1

ASPIRAR SOBRE 30 ML IPA (O BIEN H2O/IPA, PARA BUFFERS)

ASPIRAR SOBRE 15 ML DTE 2

BOMBEAR CON BOMBA DURANTE 10 MIN

HARDWARE

DESGASIFICADOR

G1322A

PURGA O CEBADO

BOMBA

AL ENCENDER EL EQUIPO AL DÍA SIGUIENTE

CAMBIO ENTRE DISOLVENTES MISCIBLES

BOMBEAR CON BOMBA 30 ML A 3-5 ML/MIN

BOMBEAR CON BOMBA DURANTE 10 MIN A FLUJO DE MÉTODO,

CON COLUMNA

HARDWARE

DESGASIFICADOR

G1322A

PURGA O CEBADO

BOMBA

AL ENCENDER EL EQUIPO AL DÍA SIGUIENTE

CAMBIO ENTRE DISOLVENTES MISCIBLES

BOMBEAR CON BOMBA 30 ML A 3-5 ML/MIN

BOMBEAR CON BOMBA DURANTE 10 MIN A FLUJO DE MÉTODO,

CON COLUMNA

G1379B O G4225A BOMBA, A FLUJO MODERADO

JERINGA, CUANDO FALLE LA BOMBA, A BAJA VELOCIDAD

HARDWARE

DESGASIFICADOR

MANTENIMIENTO

LIMPIAR LÍNEAS CON IPA (CON H2O E IPA, CASO DE BUFFERS)

COMPROBAR APARICIÓN DE BURBUJAS EN LÍNEAS DE SALIDA

VERIFICAR LA COMPATIBILIDAD DE DISOLVENTES

CANALES NO UTILIZADOS: IPA O MeOH

PROBLEMAS MÁS HABITUALES

FLUCTUACIONES DE PRESIÓN, DESGASIFICADOR DEFECTUOSO?

RUIDO EN LÍNEA BASE, DESGASIFICADOR DEFECTUOSO?

HARDWARE

BOMBA

Autosampler

Pump

Bomba

Automuestreador

Detector UV

HARDWARE

BOMBA

ISOCRÁTICACUATERNARI

ABINARIA

HARDWARE

BOMBA

CABEZAL: COMPONENTES PPALES

Bloque del émbolo

Cabezal de la Bomba

´Válvula de Bola

De salida

Válvula de Purga

Fritay

sello

Válvula de Entrada Activa

HARDWARE

BOMBA

MANTENIMIENTO

CABEZAL

QUITAR

DESMONTAR

PISTONES

SELLOS

JUNTAS

LIMPIAR CON H2O, QUE NO ESTÉN RALLADOS!

REEMPLAZAR

LIMPIAR CON H2O

MONTAR

AJUSTE SELLOS

ADEMÁS DE PM, CAMBIAR SI:

- FLUCTUACIÓN DE PRESIÓN INESTABLE

- TPOS RET NO COHERENTES

- FUGAS EN PARTE INFERIOR

HARDWARE

BOMBA

MANTENIMIENTO

VÁLVULA PURGA

QUITAR

DESMONTARFILTRO

PTFEREEMPLAZAR

REEMPLAZAR

PTFE frit.

Gold Seal.

Plastic cap.

MONTAR

SELLO

HARDWARE

BOMBA

MANTENIMIENTO

VÁLVULA

ENTRADA, IAV

QUITAR CABLE

DESMONTAR

CARTUCHO

MONTAR

Cartridge.

CONECTAR

CABLE

SONICAR CON H2O

HARDWARE

BOMBA

MANTENIMIENTO

VÁLVULA SALIDA,

OBV

QUITAR

DESMONTAR

OBV SONICAR CON H2O

Valve housing.

Gold Seal.

Plastic cap.

MONTARSELLO REEMPLAZAR

HARDWARE

BOMBA

MANTENIMIENTO

SENSOR FUGAS

LIMPIAR

ASEGURAR

POSICIÓN

TUBO DESECHO

PRESIÓN

TESTS

FUGAS

HARDWARE

BOMBA

LAVADO DE SELLOS

CUÁNDO SE RECOMIENDA?

Opción lavado

de sellos

Solvente

de lavado

Solvente

de lavado

Bomba

peristáltica

Cabezal de la bomba

Solvente de lavado

SI SE UTILIZAN TAMPONES O DSONES SALINAS > O.1M

EVITA DESGASTE EXCESIVO DE PISTONES Y SELLOS

H2O:IPA, (90:10, V/V)

HARDWARE

BOMBA

PROBLEMAS HABITUALES

HARDWARE

INYECTOR

Autosampler

Pump

Bomba

Automuestreador

Detector UV

HARDWARE

INYECTOR

G1329A, viales

Tarjeta ASM

Fuente de

alimentación Válv.de Inyección

Asiento de la Aguja

Aguja

Pistones(Metering device)

Transportador de la muestra

HARDWARE

INYECTOR

Toma de Muestra

Válvula en Posición Bypass

Inyección y Analisis

Válvula en posición Mainpass

PRINCIPIO DE OPERACIÓN

FLUJO CONTÍNUO,

MINIMIZA CARRY-OVER

LAVADO PARTE EXTERNA

AGUJA

HARDWARE

MANTENIMIENTO

INYECTOR

Válvula de

inyección

PistonesAguja/asiento de

la aguja

Gripper (finger caps)

HARDWARE

MANTENIMIENTO

VÁLVULA

INYECCIÓN

QUITAR

DESMONTARSELLO

ROTORREEMPLAZAR

MONTAR

INYECTOR

7

65

32

1

41. Tornillos del Estator

2. Cabezal del Estator

3. Cara del Estator

4. Arandela del Estator

5. Sello del Rotor (Vespel or Tefzel )

6. Sello de Aislamiento

7. Cuerpo de la Válvula


- PRESENCIA DE PICOS DOBLES

- DISMINUYE LA PRECISIÓN DEL VOL INYECC

- GOTA PERMANECE EN AGUJA PRE-

INYECTAR

HARDWARE

MANTENIMIENTO

AGUJA Y ASIENTO

DE AGUJA

PREPARAR SW

INYECTOR

Lab Advisor:Instant Pilot:

HARDWARE

MANTENIMIENTO

AGUJA

INYECTOR

1. SW:

SELECCIONAR

NEEDLE DOWN

2.DESCONECTA

EL LOOP DE

INYECCIÓN

3.DESCONECTA

LA AGUJA A

CAMBIAR

4.INSTALAR LA

NUEVA AGUJA

HARDWARE

MANTENIMIENTO

ASIENTO DE

AGUJA

INYECTOR


- AGUJA DOBLADA O CON REBABAS

- ASIENTO CON EVIDENCIA DE FUGAS O

BLOQUEOS (SALES)

1.DESCONECTA

PUERTO 5 DE

VÁLV INYECC

2.SACAR EL

ASIENTO

3.INSERTAR EL

NUEVO ASIENTO

AGUJA Y ASIENTO

DE AGUJA

HARDWARE

MANTENIMIENTO

SELLO METERING

DEVICE

INYECTOR

1. Tornillos

2. Pistón (émbolo)

3. Anillo del soporte del sello

4. Sello

5. Cuerpo del cabezal

HARDWARE

MANTENIMIENTO

INYECTOR

SENSOR FUGAS

LIMPIAR

ASEGURAR

POSICIÓN

TUBO DESECHO

LIMPIAR CON IPA

RODILLO

TRANSPORTE

PRESIÓN

TESTS

HARDWARE

INYECTOR


SOBREPRESIÓN, VÁLVULA O ASIENTO DEFECTUOSOS?

IRREPRODUCIBILIDAD ÁREA/ALTURA PICOS,

VÁLVULA O ASIENTO DEFECTUOSOS?

HARDWARE

FLUJO DE LA FASE MÓVIL:

POSIBLES OBSTRUCCIONES

FILTROS ENTRADA DISOLVENTE EN BOTELLA

SOBREPRESIÓN?

(>10 BAR, @5ML/MIN H2O)BOMBA: AIV, OBV, VÁLVULA PURGA

FILTROS EN LÍNEA

PRE-COLUMNA

COLUMNA

CAPAS NEGRAS

EN FRITA

SELECCIONAR LA FRITA CORRECTA

(2 um VS 3-5 um COLUMNA; 0.5 um VS < 2um)

PREFERIBLE CAMBIAR FILTROS EN LÍNEA O PRECOLUMNAS QUE COLUMNAS!!!

IMPORTANCIA DE LOS PM

HARDWARE

DETECTOR

Autosampler

Pump

Bomba

Automuestrador

Detector UV

HARDWARE

DETECTOR

Lámpara de DeuterioCelda del Detector

Lámpara de

Tungsteno

DAD O MWL,

1200

HARDWARE

MANTENIMIENTO

DETECTOR

SENSOR FUGAS

LIMPIAR

ASEGURAR

POSICIÓN

TUBO DESECHO

INTENSIDAD

TESTS

FILTRO

ÓXIDO HOLMIO

CELDA? VENTANAS?

LÁMPARA?

MOTOR FILTRO?

EXACTITUD λ CALIBRACIÓN λ

HARDWARE

LÁMPARAS

DETECTOR

DURACIÓN

DEUTERIO LARGA

DURACIÓN

> 2000 H

REEMPLAZAR

1.SACAR

TORNILLOS DE

SUJECIÓN

2.INSTALAR

LÁMPARA

NUEVA

3. REALIZAR TESTS:

- CALIBRACIÓN λ

- INTENSIDAD (REFERENCIA)

HARDWARE

CELDAS FLUJO

DETECTOR

CUIDADOS

EVITAR USO DSONES pH > 9.5 ATACAN AL CUARZO

EVITAR CRISTALIZACIÓN TAMPONES BLOQUEO O DAÑO

EVITAR DEJAR EN DTES ACUOSOS CRECIM BACTERIANO

RESPETAR LÍMITES PRESIÓNCUIDADO CON

VÁLVULAS…

HARDWARE

DETECTOR


HARDWARE

LC

RESUMEN MANTENIMIENTO

CAMBIA

R

BOMBA INYECTOR COLCOM

TESTS

CHECK

FILTRO PTFE,

SELLO PURGA

SELLOS

BOMBA

SELLO OBV

PRESIÓN,

FUGAS

CARTUCHO

AIV

AGUJA

ASIENTO

AGUJA

SELLO ROTOR

PRESIÓN

DETECTOR

SELLO ROTOR

PRESIÓN,

TERMOSTATO

LÁMPARA

VENTANAS

INTENSIDAD,

ÓXIDO HOLM...

CELDA FLUJO

ENTRADA DTE

FILTRO

(LIMPIAR)

PISTONES

ARANDELAS

SUJECIÓN

SOFTWARE

SISTEMA DE DATOS

MANTENIMIENTO OPENLAB

DESFRAGMENTAR DISCO DURO

USO ANTIVIRUS

USO UTILIDAD DISK-CLEANUP (BORRAR ARCHIVOS TEMPORALES)

REALIZAR BACK-UP (DATOS, MÉTODOS, SECUENCIAS…)

COPIA PARÁMETROS DE CONFIG EDITOR, NÚMEROS DE LICENCIA..

RECURSOS AGILENT

Hay muchas fuentes disponibles de información, incluyendo:

•Manual de Referencia– incluido con cada módulo, .pdf’s en la web

•Guía de Mantenimiento del 1200 LC – incluido con el sistema, .pdf en la web,

•Videos de Mantenimiento 1200 LC– disponibles en la web,

•Lista de comprobación del 1200 LC PM (Mantenimiento Preventivo) – proporcionadoen el momento del PM

•Cursos de Mantenimiento y Resolución de Problemas Agilent 1100/1200 Series HPLC (H8969A, 3 días), registro en la web

•Software de diagnóstico 1200, con Early Maintenance Feedback (EMF)

•Su Ingeniero de Mantenimiento Local

•www. agilent.com/chem

• Centro de atención al cliente, 901-116890 ó [email protected]

Gracias!

Soporte Técnico de Agilent: 901- 116890

www.agilent.com/chem

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