COMPATIBILIDAD DONANTE RECEPTOR COMPATIBILIDAD DONANTE RECEPTOR

EN LOS PROGRAMAS DE TRASPLANTEEN LOS PROGRAMAS DE TRASPLANTE LABORATORIO DE INMUNOGENETICA E LABORATORIO DE INMUNOGENETICA E

HISTOCOMPATIBILIDAD DEL INSTITUTO NACIONAL HISTOCOMPATIBILIDAD DEL INSTITUTO NACIONAL

DE DONACION Y TRASPLANTE DE CELULAS, DE DONACION Y TRASPLANTE DE CELULAS,

TEJIDOS Y ORGANOS(INDT).TEJIDOS Y ORGANOS(INDT).

FACULTAD DE MEDICINA, MINISTERIO DE SALUD FACULTAD DE MEDICINA, MINISTERIO DE SALUD

PUBLICA, HOSPITAL DE CLINICAS, URUGUAYPUBLICA, HOSPITAL DE CLINICAS, URUGUAY

EXPOSITOR: DR. ROBERTO TOLEDO PROF. AGREGADO LAB. INDTEXPOSITOR: DR. ROBERTO TOLEDO PROF. AGREGADO LAB. INDT

INDTINDT““ Organización nacional destinada a brindar atención Organización nacional destinada a brindar atención

integral en materia de trasplantes e implantes a toda integral en materia de trasplantes e implantes a toda la población uruguaya, de conformidad a los principios la población uruguaya, de conformidad a los principios éticos y de equidad, promoviendo la donación éticos y de equidad, promoviendo la donación ....”....”

BASES :BASES :

---LEYES---LEYES

---PROGRAMAS---PROGRAMAS

----INFRAESTRUCTURA----INFRAESTRUCTURA

----EQUIPOS DE TX: PERSONAL CALIFICADO----EQUIPOS DE TX: PERSONAL CALIFICADO

----PRESUPUESTO PERMANENTE----PRESUPUESTO PERMANENTE

Actividades del Laboratorio de Inmunogenética e Actividades del Laboratorio de Inmunogenética e Histocompatibilidad del INDTHistocompatibilidad del INDT

A) TRASPLANTE DE ÓRGANOS SÓLIDOS Y MÉDULA ÓSEA:A) TRASPLANTE DE ÓRGANOS SÓLIDOS Y MÉDULA ÓSEA:

- Tipificacion ABO y HLA - Tipificacion ABO y HLA

- Estudios de sensibilización pre y postrasplante. - Estudios de sensibilización pre y postrasplante.

- Control postrasplante .- Control postrasplante .

- Listas de espera , serotecas y adjudicación.- Listas de espera , serotecas y adjudicación.

-Registro Nacional de donantes de Médula Osea -Registro Nacional de donantes de Médula Osea no no

emparentados.emparentados.

B) DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES A TRAVES DEL S. B) DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES A TRAVES DEL S. HLAHLA

C) ESTUDIOS DE POBLACIÓN.C) ESTUDIOS DE POBLACIÓN.

D) ESTUDIOS DE FILIACIÓN.D) ESTUDIOS DE FILIACIÓN.

PROGRAMAS DE TRASPLANTEI) Donante Cadavérico:

Órganos sólidos :Corazón Pulmón Riñón Hígado Reno-páncreas Reno-hepático

II)Donante Vivo:

Órgano sólido: Riñón Células: Médula Ósea

LISTAS DE ESPERA

Órgano Sólido PersonasÓrgano Sólido Personas Corazón 22Corazón 22 Riñón 408Riñón 408 Pulmón 3Pulmón 3 Hígado 21Hígado 21 Reno-Páncreas 25Reno-Páncreas 25 Hepato-Renal 2Hepato-Renal 2 CardiorenalCardiorenal IntestinoIntestino CombinacionesCombinaciones

Médula ÓseaMédula Ósea

QUE SE ESTUDIA EN EL LABORATORIO DEL INDT PARA REALIZAR UN TRASPLANTE?

Estudios pre-trasplanteEstudios pre-trasplante

1)DONANTE Y RECEPTOR:1)DONANTE Y RECEPTOR:

a)Sistemas de Histocompatibilidad Mayores:a)Sistemas de Histocompatibilidad Mayores: -- Sistema ABO-- Sistema ABO -- Sistema HLA-- Sistema HLA b)Prueba Cruzada Linfocitaria HLA Donante b)Prueba Cruzada Linfocitaria HLA Donante

EspecificaEspecifica

2)RECEPTOR:2)RECEPTOR: Sensibilización contra sistema HLA:Sensibilización contra sistema HLA: --P.R.A (Anticuerpos Reactivos contra panel)--P.R.A (Anticuerpos Reactivos contra panel) --Anticuerpos HLA clase I y II--Anticuerpos HLA clase I y II

ESTUDIOS PESTUDIOS POSTOST TRASPLANTE TRASPLANTE

--Pruebas cruzadas post Tx --Pruebas cruzadas post Tx

--Análisis de especificidad de --Análisis de especificidad de AnticuerposAnticuerpos

--Análisis de Quimerismo --Análisis de Quimerismo

--Genotipificación de Citoquinas--Genotipificación de Citoquinas

ÓRGANO SÓLIDOCRITERIOS GENERALES DE TRASPLANTABILIDAD

Debe existir : Debe existir : 1) Compatibilidad ABO entre donante y receptor 1) Compatibilidad ABO entre donante y receptor 2) Prueba Cruzada Linfocitaria HLA Donante Específica 2) Prueba Cruzada Linfocitaria HLA Donante Específica

Negativa (favorable)Negativa (favorable) 3) Un nivel aceptable de Compatibilidad HLA3) Un nivel aceptable de Compatibilidad HLA 4) Criterios A4) Criterios Antropométricosntropométricos acordes entre donante y acordes entre donante y Receptor Receptor

QUE CARACTERISTICAS PRINCIPALES DEBEN COMPATIBILIZARSE EN CADA TIPO DE TRASPLANTE?

Corazón Pulmón Hígado Riñòn Reno-páncreas

Reno-hepatico

Tx MO

ABO SI SI SI SI SI SI SI/NO

PC SI SI SI/NO SI SI SI SI

HLA ----- ----- ------ SI SI***

PESO SI SI SI

TALLA SI SI SI

PERIM.

XIFOIDEO SI SI SI

Que es necesario estudiar?

1)Sistema ABO1)Sistema ABO 2)Sistema HLA2)Sistema HLA a- Moléculas HLA (Antígenos)a- Moléculas HLA (Antígenos) b- Anticuerpos HLAb- Anticuerpos HLA

-- -- Prueba cruzada donante receptorPrueba cruzada donante receptor -- P.R.A-- P.R.A

-- Especificidades privadas-- Especificidades privadas

1)SISTEMA ABO

Fue descubierto por Landsteiner en 1901Fue descubierto por Landsteiner en 1901 LOCALIZACION: LOCALIZACION: Está presente en casi todas las células Está presente en casi todas las células

corporales (especialmente en endotelios)corporales (especialmente en endotelios) IMPORTANCIA:IMPORTANCIA: Si se trasplanta un órgano sólido Si se trasplanta un órgano sólido

(riñón,corazón,pulmón,intestino,páncreas), con (riñón,corazón,pulmón,intestino,páncreas), con incompatibilidad de grupo ABO, se produce un incompatibilidad de grupo ABO, se produce un rechazo hiperagudo (por anticuerpos naturales rechazo hiperagudo (por anticuerpos naturales regulares)regulares)

TRASPLANTE ISOGRUPO ABO

Es mejor porque :Es mejor porque : --es mayor la sobrevida del injerto a largo --es mayor la sobrevida del injerto a largo plazo plazo --no provoca desbalances en la lista de --no provoca desbalances en la lista de espera espera

LA DETERMINACION DE GRUPO

SANGUINEO ABO Se hace tomando en cuenta las propiedades del glóbulo Se hace tomando en cuenta las propiedades del glóbulo

rojo y del suero del individuorojo y del suero del individuo

Se estudian estas 2 cualidades por ser las mas Se estudian estas 2 cualidades por ser las mas

accesibles y de fácil interpretación a través de una sencilla accesibles y de fácil interpretación a través de una sencilla extracción de sangre extracción de sangre

ANTIGENOS Y ANTICUERPOS NATURALES DEL GRUPO ABO

GLOBULOROJO

REACCION BASICA:AGLUTINACION

AGLUTINACIONES ERITROCITARIAS

REACTIVO

COMERCIAL

ANTI A+GR

REACTIVO

COMERCIAL

ANTIB+GR

SUERO

MAS

GR A

SUERO

MAS

GRB

SUERO

MAS

GR O

A + -------- --------- + -----

B --------- + + --------- -----

AB + + ---- ----- -----

0 --------- -------- + + -----

GENÉTICA DE GRUPO ABO

GRUPO SANGUINEO ABOPAUTAS TRANSFUSIONALESY DE TX DE ORGANO SOLIDO

RE CEP TOR

O A B AB

DO O SI SI SI SI

NAN A SI SI

TE B SI SI

AB SI

SISTEMA HLA Y TRASPLANTE

La importancia de la compatibilidad La importancia de la compatibilidad HLAHLA depende entre otros factores del órgano o depende entre otros factores del órgano o tejido trasplantado.tejido trasplantado.

Es máxima en el trasplante de médula Es máxima en el trasplante de médula óseaósea

En el trasplante renal diversos estudios En el trasplante renal diversos estudios multicéntricos señalan el efecto multicéntricos señalan el efecto "beneficioso" del "beneficioso" del matcheomatcheo HLA.HLA.

((fundamentalmente fundamentalmente HLAHLA DR, DR, HLAHLA B, B, HLAHLA A). A).

SISTEMA HLASISTEMA HLA (Human Leucocyte Antigens)(Human Leucocyte Antigens)

Moléculas de superficie celular, Moléculas de superficie celular, estudiadas inicialmente por su papel en la estudiadas inicialmente por su papel en la sobrevida de algunos injertos de tejidos o sobrevida de algunos injertos de tejidos o trasplantes de órganostrasplantes de órganos

Glicoproteínas de membrana de la Glicoproteínas de membrana de la superfamilia de las inmunoglobulinassuperfamilia de las inmunoglobulinas

Sus genes se localizan en el brazo corto Sus genes se localizan en el brazo corto del cromosoma 6del cromosoma 6

Conocido por la presencia de Conocido por la presencia de aloanticuerpos en suero de multíparas o aloanticuerpos en suero de multíparas o politransfundidos (Dausset)politransfundidos (Dausset)

a)MOLÉCULAS DEL SISTEMA HLA: ANTIGENOS

AA BBCC DD

HLA AHLA A COMPLEMENTOCOMPLEMENTO

HLA DRHLA DR

HLA DQHLA DQ

HLA DPHLA DP

HLA BHLA BHLA CHLA C

HLA AHLA A HLA CHLA C HLA BHLA B

HLA DRHLA DR

HLA DQHLA DQ

HLA DPHLA DP

NUCLEONUCLEO

MEMBRANAMEMBRANACELULARCELULAR

CROMOSOMA 6CROMOSOMA 6

HERENCIA DEL SISTEMA HLA

• SimpleSimple• Cada hijo hereda un haplotipo Cada hijo hereda un haplotipo de sus progenitoresde sus progenitores• Hay 2 productos de cada locus uno proveniente del padre y Hay 2 productos de cada locus uno proveniente del padre y

uno de la madreuno de la madre• CodominanteCodominante

Funciones del sistema HLA

Interviene en la Respuesta inmune:Interviene en la Respuesta inmune: -- Reconocimiento de antígenos -- Reconocimiento de antígenos --Presentación de péptidos antigénicos a --Presentación de péptidos antigénicos a linfocitos T promoviendo respuestas linfocitos T promoviendo respuestas inmunológicas celulares y humoralesinmunológicas celulares y humorales Su importancia en el Tx de órganos deriva Su importancia en el Tx de órganos deriva de su función en la respuesta inmune de su función en la respuesta inmune

HLA HLA TRASPLANTE TRASPLANTE

La importancia de la compatibilidad HLA La importancia de la compatibilidad HLA depende entre otros factores del órgano o tejido depende entre otros factores del órgano o tejido trasplantado: trasplantado:

Es máxima en el trasplante de médula ósea. Es máxima en el trasplante de médula ósea.

En trasplante renal- estudios multicéntricos En trasplante renal- estudios multicéntricos señalan el efecto del matcheo HLAseñalan el efecto del matcheo HLA

( HLA DR, HLA B, HLA A, HLA C).( HLA DR, HLA B, HLA A, HLA C).

1974 1974

Se describe fenómeno de restricción por CMHSe describe fenómeno de restricción por CMH

--- fenómeno de presentación y reconocimiento de --- fenómeno de presentación y reconocimiento de antigenos por linfocitos Tantigenos por linfocitos T

---- Característica de las moléculas CMH es su ---- Característica de las moléculas CMH es su capacidad de unir péptidoscapacidad de unir péptidos

CMHCMH PRESENTACIÓN PRESENTACIÓN

ANTIGÉNICAANTIGÉNICA

MOLECULAS HLA CLASE I Y II

PRESENTACION ANTIGENICAPRESENTACION ANTIGENICA

MOLECULAS HLA CLASE IMOLECULAS HLA CLASE I

Presentes en todas las células nucleadas

Presentan péptidos intracelulares a los linfocitos T CD8+, gatillando la respuesta citotóxica

HLA- A , HLA –B, HLA -C

MOLECULAS HLA CLASE IIMOLECULAS HLA CLASE IIHLA- DR, HLA- DQ, HLA- DP

Presentes en células especializadas de la respuesta inmune (CPA)

Presentan péptidos extracelulares a los linfocitos CD4+, Gatillan respuestas de ayuda a otras celulas

REGION GÉNICA DEL CMHREGION GÉNICA DEL CMH

Está presente en el cromosoma 6 humano,en la Está presente en el cromosoma 6 humano,en la región 6p21.1-21.3 conuna longitud de aprox 4 kb región 6p21.1-21.3 conuna longitud de aprox 4 kb

Es un complejo poligénico de gran diversidad Es un complejo poligénico de gran diversidad que comprende por lo menos :que comprende por lo menos :

- 240 genes y pseudogenes- 240 genes y pseudogenes

- 21 genes polimórficos - 21 genes polimórficos

- más de 2900 alelos HLA.- más de 2900 alelos HLA.

Está dividido en diferentes locus que se heredan Está dividido en diferentes locus que se heredan en bloques: haplotiposen bloques: haplotipos

CMH - región génicaCMH - región génica

• El polimorfismo génico está en exón 2 y 3El polimorfismo génico está en exón 2 y 3

• Radica en dominios alfa 1 y 2. Determinan Radica en dominios alfa 1 y 2. Determinan la estructura en canal en la que ancla el la estructura en canal en la que ancla el péptido a ser presentado al linfocito T péptido a ser presentado al linfocito T CD8CD8

• Homología global AA superior al 75%Homología global AA superior al 75%

POLIMORFISMO HLA CLASE IPOLIMORFISMO HLA CLASE I

POLIMORFISMO HLA CLASE IIPOLIMORFISMO HLA CLASE II

• Polimorfismo en exón 2Polimorfismo en exón 2

• Ambas cadenas polimórficas: dominios Ambas cadenas polimórficas: dominios beta 1 y alfa 1beta 1 y alfa 1

• Homología de cadenas alfa y beta - Homología de cadenas alfa y beta - menor al 65%menor al 65%

POLIMORFISMO HLAPOLIMORFISMO HLA DETECCIÓN CRECIENTE DETECCIÓN CRECIENTE

•

Clase I =5468 Clase II=1591 1729 HLA - A 7 HLA - DRA

2329 HLA - B 1150 HLA - DRB

1291 HLA - C 160 HLA - DQB1

10 HLA - E 33 HLA - DPA1

22 HLA – F 150 HLA - DPB1

47 HLA - G 7 HLA - DMA

13 HLA - DMB

12 HLA - DOA

13 HLA - DOB

JULIO 2011 JULIO 2011 IMGT/HLA Sequence DatabaseIMGT/HLA Sequence Database-- 7059 alelos 7059 alelos

POLIMORFISMO REGIÓN MHC POLIMORFISMO REGIÓN MHC NUMERO DE ALELOSNUMERO DE ALELOS

GENES DRB

DRB1 1051DRB1 1051 DRB2 1(SG)DRB2 1(SG)

DRB3 57DRB3 57DRB4 15DRB4 15DRB5 19DRB5 19

DRB6 3(SG)DRB6 3(SG) DRB7 2(SG)DRB7 2(SG) DRB8 1(SG)DRB8 1(SG) DRB9 1(SG)DRB9 1(SG)

NOMENCLATURA SEROLOGICA DEL MHC

Denominación basada en la identificación Denominación basada en la identificación serológica de las especificidadesserológica de las especificidades

La letra identifica al locus.La letra identifica al locus. El número indica la especificidad de El número indica la especificidad de

AntígenoHLAAntígenoHLA El paréntesis y un número adentro identifica al El paréntesis y un número adentro identifica al

antígeno madreantígeno madre El número fuera del paréntesis identifica al El número fuera del paréntesis identifica al

splitsplit Ejemplo: A25(10), A23(9), Ejemplo: A25(10), A23(9), B38(16), B57(17),B38(16), B57(17), DR15(2), DR17(3) DR15(2), DR17(3)

PRINCIPALES SPECIFICIDADES SEROLOGICAS LOCUS A

A1 A11 A1 A11 A43 A43

A2 A68(28)A2 A68(28) A3 A69(28)A3 A69(28)

A23(9) A29(19) A23(9) A29(19) A24(9) A30(19)A24(9) A30(19)A25(10) A31(19)A25(10) A31(19)A26(10) A32(19)A26(10) A32(19)A34(10) A33(19)A34(10) A33(19)A66(10) A74(19)A66(10) A74(19)

A36A36

PRINCIPALES SPECIFICIDADES SEROLOGICAS LOCUS B

B51(5) B62(15) B49(21) B61(40)B51(5) B62(15) B49(21) B61(40)B52(5) B63(15) B50(21) B71(70)B52(5) B63(15) B50(21) B71(70)B7 B75(15) B54(22) B72(70)B7 B75(15) B54(22) B72(70)B8 B76(15) B55(22) BW4B8 B76(15) B55(22) BW4B44(12) B77(15) B56(22)B44(12) B77(15) B56(22)B45(12) B38(16) B27 BW6B45(12) B38(16) B27 BW6B13 B39(16) B35B13 B39(16) B35B64(14) B57(17) B37B64(14) B57(17) B37B65(14) B58(17) B53B65(14) B58(17) B53 B60(40)B60(40)

ESPECIFICIDADES SEROLOGICAS MAS COMUNES DEL LOCUS C

CW1CW1CW2CW2CW3CW3CW4CW4CW5CW5CW6CW6CW7CW7

PRINCIPALES SPECIFICIDADES SEROLOGICAS LOCUS DR

DR1 DR13(6)DR1 DR13(6)DR15(2) DR14(6)DR15(2) DR14(6)DR16(2) DR7DR16(2) DR7DR17(3) DR8DR17(3) DR8DR18(3) DR9DR18(3) DR9DR4 DR10DR4 DR10DR11(5)DR11(5)DR12(5)DR12(5)

EJEMPLO DE TIPIFICACIONESSEROLOGICAS DONANTE- RECEPTORES

EN TX DE ORGANO SÓLIDO

A A B B DR DR GS

DON.1 24(9) 25(10) 44(12) 62(15) 4 13(6) AB

R1 2 25(10) 44(12) 62(15) 4 13(6) AB

R2 11 25(10) 42 62(15) 4 13(6) AB

R3 24(9) 36 44(12) 55(22) 7 13(6) AB

R4 3 31(19) 60(40) 46 11(5) 8 AB

LOCUS

NOMENCLATURA GENICA

DEL MHC :OMS

Denominación basada en la identificación génica Denominación basada en la identificación génica de las de las

especificidadesespecificidades

Letra : corresponde al LocusLetra : corresponde al Locus Número: corresponde al GenNúmero: corresponde al Gen

* : Indica si fue secuenciado* : Indica si fue secuenciado Número de 4 digitos xx yyNúmero de 4 digitos xx yy

Especificidad numero de Especificidad numero de serologica variante alelicaserologica variante alelica

NOMENCLATURA ACTUAL DE ALELOS HLA

NOMENCLATURA DEL MHC :OMS

HLA-B*27:01 Primera variante delHLA-B*27:01 Primera variante del

alelo HLA-B27alelo HLA-B27

HLA-B27 20 subtipos (*)HLA-B27 20 subtipos (*)

B*27:01 AL B*27:20B*27:01 AL B*27:20

(*) Difieren entre ellos en 1 a 7 AA(*) Difieren entre ellos en 1 a 7 AA..

Nomenclatura del MHC: OMS

HLA-DRB1*04:03HLA-DRB1*04:03

Alelo codificado por gen B1 del DR (DRB1)Alelo codificado por gen B1 del DR (DRB1)

04 Grupo alelico04 Grupo alelico

03 Variante nucleotidica 03 Variante nucleotidica específicaespecífica

de ese alelo en particularde ese alelo en particular

EJEMPLO DE TIPIFICACIONES MOLECULARES DE DONANTES – RECEPTORES EN TMO

A A B B DR DR DQ DQ DP DP

R1 24:09 25:08 44:11 35:06 04:01 13:07 01:03 02:02 01:01 03:01

D1 24:09 25:08 44:11 35:06 04:01 13:07 01:03 02:02 01:01 03:01

D2 24:02 25:08 44:10 35:06 04:05 13:07 01:05 02:02 01:02 03:01

D3 24:08 25:03 44:01 35:04 04:02 13:02 01:02 02:01 01:03 03:04

D4 03:01 31:10 40:03 46:01 11:03 08:01 01:04 02:03 01:11 02:02

Tipificación HLATipificación HLA

Productos : HLA- MicrolinfocitotoxicidadProductos : HLA- Microlinfocitotoxicidad

Genes HLA- PCR SSOGenes HLA- PCR SSO PCR SSPPCR SSP PCR SBT- SecuenciaciónPCR SBT- Secuenciación

TECNICA DE MICROLINFOCITOTOXICIDAD

SEPARACION LINFOCITOS TOTALES POR SEPARACION LINFOCITOS TOTALES POR GRADIENTE DE DENSIDAD FICOLL HYPAQUEGRADIENTE DE DENSIDAD FICOLL HYPAQUE

GRADIENTE DE FICOLL HYPAQUE

TECNICA A UTILIZAR PARA LA MLCT

TIPIFICACION SEROLOGICATIPIFICACION SEROLOGICA

MICROLINFOCITOTOXICIDADMICROLINFOCITOTOXICIDADCOMPLEMENTO DEPENDIENTECOMPLEMENTO DEPENDIENTE

Resolución intermedia SSO

Alta resolución SSP

TIPIFICACION MOLECULAR TIPIFICACION MOLECULAR HLA CLASE I. HLA CLASE I.

A, B, C.A, B, C.

TIPIFICACION MOLECULAR TIPIFICACION MOLECULAR HLA CLASE II.HLA CLASE II.

DRB1 DRB3, DRB4, DRB5, DQB1DRB1 DRB3, DRB4, DRB5, DQB1..

• Resolución intermediaResolución intermedia SSOSSO

• Alta resoluciónAlta resolución SSPSSP SBTSBT

TIPIFICACIÓN ALÉLICATIPIFICACIÓN ALÉLICA HLAHLA(ADN)(ADN)

PCR - SSO PCR - SSP PCR - SBTPCR - SSO PCR - SSP PCR - SBT

SSP - HLASSP - HLA

SBTSBT

b)ESTUDIO DE ANTICUERPOS HLA b)ESTUDIO DE ANTICUERPOS HLA PRE Y POST-TRASPLANTEPRE Y POST-TRASPLANTE

1.1.Prueba Cruzada- Detecta Ac. HLA donante específicosPrueba Cruzada- Detecta Ac. HLA donante específicos

- MICROLINFOCITOTOXICIDAD

- CITOMETRIA DE FLUJO

2.2.Screening de Ac. HLA pre y post-trasplante.Screening de Ac. HLA pre y post-trasplante. Detecta anticuerpos reactivos contra panel / P.R.A- se Detecta anticuerpos reactivos contra panel / P.R.A- se expresa en %expresa en %

I)_ MICROLINFOCITOTOXICIDAD II)_E.L.I.S.A III)_CITOMETRIA DE FLUJO

3.Análisis de especificidad de Anticuerpos-3.Análisis de especificidad de Anticuerpos-

B)ANTICUERPOS HLA EN TRASPLANTEB)ANTICUERPOS HLA EN TRASPLANTE

a)Naturaleza e importancia.a)Naturaleza e importancia.

b)Mecanismo de aparición.b)Mecanismo de aparición.

c)Métodos de detección.c)Métodos de detección.

Veremos sustancialmente 3 puntos básicos:Veremos sustancialmente 3 puntos básicos:

a)EN CUANTO A SU NATURALEZA a)EN CUANTO A SU NATURALEZA LOS ANTICUERPOS HLA. LOS ANTICUERPOS HLA.

Son inmunoglobulinas de tipo Ig G, IgM, Ig A. Son inmunoglobulinas de tipo Ig G, IgM, Ig A.

Se unen al antígeno y promueven acciones nocivas Se unen al antígeno y promueven acciones nocivas sobre organismo (citolisis).sobre organismo (citolisis).

Pueden estar dirigidos contra especificidades Pueden estar dirigidos contra especificidades pertenecientes al locus HLA clase I, Locus HLA clase II o pertenecientes al locus HLA clase I, Locus HLA clase II o contra ambos.contra ambos.

Pueden ser monoespecÍficos o poliespecÍficos. Pueden ser monoespecÍficos o poliespecÍficos.

Pueden ser direccionados contra grupos Cregs del Pueden ser direccionados contra grupos Cregs del sistema HLA clase I. sistema HLA clase I.

Estos son conjuntos de antÍgenos que tienen en común Estos son conjuntos de antÍgenos que tienen en común ciertos epítopes contra los cuales se generan ciertos epítopes contra los cuales se generan anticuerpos lo cual permite clasificarlos en un grupo anticuerpos lo cual permite clasificarlos en un grupo común.común.

TIPOS DE INMUNOGLOBULINASTIPOS DE INMUNOGLOBULINAS

MOLECULAS DE ANTICUERPOSMOLECULAS DE ANTICUERPOS

EN CUANTO A SU IMPORTANCIA LOS EN CUANTO A SU IMPORTANCIA LOS ANTICUERPOS HLAANTICUERPOS HLA..

• Son responsables en buena medida de la fisiopatología Son responsables en buena medida de la fisiopatología de rechazos renales hiperagudos, agudos y cronicos.de rechazos renales hiperagudos, agudos y cronicos.

• Es por ello de buena práctica tener un programa de Es por ello de buena práctica tener un programa de deteccion de anticuerpos que sea eficiente, deteccion de anticuerpos que sea eficiente, prospectivo y económicamente viable.prospectivo y económicamente viable.

MECANISMO DE APARICIONMECANISMO DE APARICION

1 Transfusiones sanguineas o de componentes Transfusiones sanguineas o de componentes (sobretodo leucocitos y o plaquetas).(sobretodo leucocitos y o plaquetas).

2 Trasplante de órganos.Trasplante de órganos.

3 Embarazos (sobre todo en multíparas).Embarazos (sobre todo en multíparas).

4 Inmunizacióon voluntaria (histórica - rara Inmunizacióon voluntaria (histórica - rara actualmente).actualmente).

HAY 4 FORMAS BASICAS:HAY 4 FORMAS BASICAS:

P.R.A.(Anticuerpos reactivos contra panel)

Revela la existencia de anticuerpos Revela la existencia de anticuerpos dirigidos contra el sistema HLA presentes dirigidos contra el sistema HLA presentes en el suero del receptor.en el suero del receptor. Oscila entre 0 y 100%.Oscila entre 0 y 100%. La probabilidad de trasplantarse es La probabilidad de trasplantarse es inversamente proporcional al valor del inversamente proporcional al valor del

P.R.A.P.R.A.

P.R.A Y PROB. DE TX

IMPORTANCIA DEL P.R.A

Si se trasplantara con anticuerpos específicos anti-Si se trasplantara con anticuerpos específicos anti-donante el resultado es la presencia inmediata de un donante el resultado es la presencia inmediata de un rechazo hiperagudorechazo hiperagudo

Un P.R.A de 80% presente en un receptor nos esta Un P.R.A de 80% presente en un receptor nos esta informando que un 80% de los donantes muy informando que un 80% de los donantes muy probablemente no le servirán a este receptorprobablemente no le servirán a este receptor

PRA (+) EN EL PRE TRASPLANTEPRA (+) EN EL PRE TRASPLANTE

• Menor probabilidad de trasplante. Menor probabilidad de trasplante.

• La presencia de anticuerpos permite predecir la La presencia de anticuerpos permite predecir la positividad en la prueba cruzada donante específica.positividad en la prueba cruzada donante específica.

• Mayor probabilidad de respuesta alogénica Mayor probabilidad de respuesta alogénica postrasplante humoral y celular. postrasplante humoral y celular.

• % P.R.A tiene correlación con rechazo agudo y % P.R.A tiene correlación con rechazo agudo y crónico crónico

• Permite identificar pacientes con factores de riesgo Permite identificar pacientes con factores de riesgo para RECHAZO AGUDO Y O CRONICO. para RECHAZO AGUDO Y O CRONICO.

PRA (+) EN EL POST TRASPLANTEPRA (+) EN EL POST TRASPLANTE Se mencionan en la Literatura varios hechos:Se mencionan en la Literatura varios hechos:

--Menor sobrevida del implante al año--Menor sobrevida del implante al año

-- Mayor frecuencia de rechazo cronico-- Mayor frecuencia de rechazo cronico

--Aumento del P.R.A. mayor a 20% en los 3 a 4 --Aumento del P.R.A. mayor a 20% en los 3 a 4 meses previos al diagnóstico de rechazo crónico.meses previos al diagnóstico de rechazo crónico.

--Asociación entre la producción de Ac HLA --Asociación entre la producción de Ac HLA donante - especificos y rechazo.donante - especificos y rechazo.

El monitoreo de Ac anti IgG HLA puede servir El monitoreo de Ac anti IgG HLA puede servir para identificar los pacientes de riesgo de para identificar los pacientes de riesgo de rechazo agudo y o crónico.rechazo agudo y o crónico.

MÉTODOS DE DETECCIÓN DE MÉTODOS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS HLAANTICUERPOS HLA

Es de buena practica el screening periódico de Es de buena practica el screening periódico de Ac HLA tanto en el pre- trasplante como en el Ac HLA tanto en el pre- trasplante como en el post-trasplante.post-trasplante.

El monitoreo de detección ha ido El monitoreo de detección ha ido

desarrollándose a través del tiempo en 3 desarrollándose a través del tiempo en 3 metodologías básicas:metodologías básicas:

I) Microlinfocitotoxicidad.I) Microlinfocitotoxicidad.

II) E.L.I.S.A.II) E.L.I.S.A.

III) Citometría de Flujo.III) Citometría de Flujo.

I) I) PRUEBA CRUZADA DONANTE ESPECIFICA PRUEBA CRUZADA DONANTE ESPECIFICA POR MICROLINFOCITOTOXICIDADPOR MICROLINFOCITOTOXICIDAD

TEST DE ELISATEST DE ELISA

FUNDAMENTO:FUNDAMENTO:

Se enfrenta el suero a un panel comercial de antigenos Se enfrenta el suero a un panel comercial de antigenos HLA clase I y II purificados (en vez de panel celular).HLA clase I y II purificados (en vez de panel celular).

Una vez formado el complejo ag-ac, se agrega un Una vez formado el complejo ag-ac, se agrega un segundo anticuerpo (anti-Ig G humana conjugada con segundo anticuerpo (anti-Ig G humana conjugada con fosfatasa alcalina), y luego de incubacion y lavados, se fosfatasa alcalina), y luego de incubacion y lavados, se adiciona un sustrato coloreado sobre el que actua la adiciona un sustrato coloreado sobre el que actua la fosfatasa alcalina produciendose un incremento de color fosfatasa alcalina produciendose un incremento de color proporcional a la concentracion de anticuerpo presente.proporcional a la concentracion de anticuerpo presente.

En sintesis:En sintesis: Reacción positiva color azulado creciente.Reacción positiva color azulado creciente. Reacción negativa. IncoloraReacción negativa. Incolora

TEST DE ELISATEST DE ELISA

CITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJO

La luz laser detecta Ac unidos a colorantes fluorescentesLa luz laser detecta Ac unidos a colorantes fluorescentes

---Células o perlas revestidos de antigenos HLA se unen directamente al Ac HLA sérico y este a un segundo anticuerpo anti-inmunoglobulina, marcado con fluoresceina.----Estas Celulas o perlas con el Ac fuorescente pegado, son impactadas por el laser y emiten una fluorescencia de mayor intensidad que las celulas sin el Ac. ---Cuanto mayor sea la intensidad de fluorescencia ello indica mayor cantidad del Ac unido a la celula o perla.

PRUEBA CRUZADA PRUEBA CRUZADA POR POR

CITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJO

• La interpretación de un cross match por citometría de La interpretación de un cross match por citometría de flujo se hace comparando la intensidad de la flujo se hace comparando la intensidad de la fluorescencia de la población celular:fluorescencia de la población celular:Las Las células del donante tratadas con suero del células del donante tratadas con suero del paciente se las compara con:paciente se las compara con:

• La intensidad de fluorescencia de las celulas del La intensidad de fluorescencia de las celulas del donante incubadas con suero control negativo.donante incubadas con suero control negativo.

• La intensidad de fluorescencia de las celulas del La intensidad de fluorescencia de las celulas del donante incubadas con suero control positivo. donante incubadas con suero control positivo.

Se muestran áreas negativas en el centro y positivas a derecha.A mayor fluorescencia, mayor corrimiento de las perlas hacia la derecha del protocolo, con mayor cantidad de AC unido: Prueba Cruzada positiva : AC HLA PRESENTE

IMPORTANCIA DE LA ESPECIFICIDAD DE AC

Es trascendente averiguar la especificidad Es trascendente averiguar la especificidad de los Ac sericos sobretodo en los pacientes de los Ac sericos sobretodo en los pacientes con niveles altos de P.R.A con niveles altos de P.R.A

Da una información valiosa para cotejarla Da una información valiosa para cotejarla con la tipificación HLA del donantecon la tipificación HLA del donante

Sirve para conocer los antígenos contra Sirve para conocer los antígenos contra los cuales no debería trasplantarse el los cuales no debería trasplantarse el paciente paciente

HAY METODOLOGIA AUTOMATIZADA

VentajaVentaja - Permite realizar múltiples tipificaciones - Permite realizar múltiples tipificaciones de antígenos y anticuerpos en donantes y de antígenos y anticuerpos en donantes y

receptoresreceptores -De gran exactitud y de alta velocidad-De gran exactitud y de alta velocidad DesventajaDesventaja -Es dependiente de aparatos -Es dependiente de aparatos y de firmas comerciales concretas vendedoras y de firmas comerciales concretas vendedoras del mismo, del software y de los reactivos del mismo, del software y de los reactivos

correspondientes. correspondientes.

La carencia de metodología automatizada origina La carencia de metodología automatizada origina

brechas que se van acentuando entre los países que brechas que se van acentuando entre los países que pueden y los que no pueden invertir en pueden y los que no pueden invertir en automatizaciónautomatización

INVERSION EN SALUD

--La salud no tiene precio--La salud no tiene precio--Invertir en salud no es un gasto, más bien debe --Invertir en salud no es un gasto, más bien debe

ser una una obligación de los países y de las ser una una obligación de los países y de las instituciones que representan áreas concretas instituciones que representan áreas concretas de la misma.de la misma.

--No puede determinarse cuanto es el ahorro de --No puede determinarse cuanto es el ahorro de devolverle la salud a una persona concreta.devolverle la salud a una persona concreta.

--La inversión en salud nunca genera pérdida,es --La inversión en salud nunca genera pérdida,es altamente rentable promoverla ya que es lo altamente rentable promoverla ya que es lo único que tenemos de patrimonio real individual único que tenemos de patrimonio real individual y colectivoy colectivo

---Para invertir en salud hay que invertir en ---Para invertir en salud hay que invertir en tecnología única forma de poder achicar la tecnología única forma de poder achicar la distancia entre naciones ricas y pobresdistancia entre naciones ricas y pobres

FUTUROFUTURO

MAYOR PODER DE DISCRIMINACIONMAYOR PODER DE DISCRIMINACION,,

MAYOR SENSIBILIDAD, MAYOR SENSIBILIDAD,

MAYOR MAYOR PPRACTICIDAD,RACTICIDAD,

MENOR COSTOMENOR COSTO

DESARROLLO DE NUEVAS TECNICAS

www.indt.edu.uy

INSTITUTO NACIONAL DE INSTITUTO NACIONAL DE DONACION Y TRASPLANTEDONACION Y TRASPLANTE

GRACIAS

INDT