1. 1. Estudio comparativo del efecto de estradiol y etinilestradiol sobre factores de la coagulacin en rata macho
2. 2. Evaluacin del efecto de estrgenos de uso clnico sobre la hemostasia, la fibrinlisis y la respuesta inflamatoria in vivo e in vitro Laboratorio de Estrgenos y Hemostasia UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO
3. 3. mportancia fisiolgica de los estrgenos
4. 4. Antiinflamatorios Disminucin en la expresin de molculas de adhesin y quimiocinas Incremento de PCR Modulacin del tono vascular Prostaglandinas, eNOS Aumento de NO vasodilatacin Disminucin de endotelina-1 Proinflamatorios Artritis reumatoide Lpus sitmico Esclerosis mltiple Aumento de factores procoagulantes Efectos antiproliferativos del MLV Estrgenos Disminucin de factores fibrinolticos
5. 5. Mecanismos de accin Genmico: receptores y . Citoplasmtico o nuclear No genmico
6. 6. Principales usos de los estrgenos Terapia hormonal de reemplazo Anticonceptivos Amenorrea, endometriosis, disgenesia gonadal (S.Turner 44X), atrofia urogenital. Cancer de mama, osteoporosis Estrgenos
7. 7. Estrgenos Estradiol micronizado (1 mg) Estrgenos conjugados (0.3-1.25 mg-0.625 mg) Etinilestradiol (15-50 g) Mestranol Vas de administracin: Oral, i.m., transdrmica.
8. 8. Combination Trade Name Estrogen (g/pill) Progestin (mg/pill) Ortho-Novum 1/35 35, ethynyl estradiol 1, norethindrone Ortho-Novum 1/50 50, mestranol 1, norethindrone Loestrin 1/20 20 ethinyl estradiol 1, norethindrone acetate Lo/Ovral 30, ethinyl estradiol 0.3, norgestrel Ovral 50, ethinyl estradiol 0.5 norgestrel Demulen 1/35 35, ethinyl estradiol 1, ethynodiol diacetate
9. 9. Sequential (10 days first set, 11 days second set or 5 to 10 days each for triphasic) Trade Name Estrogen (g/pill) Progestin (mg/pill) Ortho- Novum 7/7/7 35, ethinyl estradiol 0.5, 0.75, 1.0 norethindone Ortho- Novum 10/11 35, ethinyl estradiol 0.5, 1.0 norethindone
10. 10. Otros estrgenos Tamoxifen (20-40 mg) Raloxifen (60- 120mg) Fitoestrgenos MSRE SERM
11. 11. Uso de estrgenos 100 millones de mujeres utilizan anticonceptivos (93 millones por va oral) 1. Lemaitre et al. Hormone replacement therapy and associated risk or stroke in postmenopausal women. Arch Intern Med 2002; 162:1954-60. 2. Pradhan et al. Inflammatory biomarkers, hormone replacement therapy, and incident coronary heart disease: prospective analysis from the Womens Health Initiative obervacional study. JAMA 2002; 288:980-7. 3. Million Women Study Collaborators. Patterns of use of hormone replacement therapy in one million women in Britain, 1996-2000. BJOG 2002; 109:1319-30. World Health Organization. Cardiovascular Disease and Steroid Hormone Contraception. Report of a WHO Scientific group. WHO Technical Report Series 877. Geneva: World Health Organization, 1998. Estados Unidos 30-40% y Reino Unido 33% reciben terapia hormonal de reemplazo
12. 12. Efectos adversos Carcinoma mamario y crvico-uterino Trombosis venosa, enf arterial perifrica, accidente cerebro-vascular
13. 13. Efectos adversos. Anticonceptivos Embolismo pulmonar (1961). Mestranol 100g + Noretinodrel 2.5 mg. Endometriosis1 . Accidente cerebro-vascular (1962). Enavid2 Infarto al miocardio (1963). Conovid 3 1.-Jordan WM. Pulmonary embolism. Lancet 1961; ii:1146-7. 2.-Lorentz I. Parietal lesions and Enavid. BMJ 1962; ii 1191. 3.-Boyce et al. Coronary thrombosis and Conovid. Lancet 1963; 1:111.
14. 14. Efectos adversos. THR Trombosis venosa Embolismo pulmonar -Daly, et al. Risk of venous thromboembolism in users of hormone replacement therapy. Lancet 1996; 348:977-80. -Jick et al. Risk of hospital admission for idiopathic venous thromboembolism among users of postmenopausal oestrogens. Lancet 1996; 348:981-3 - Grodstein, et al. Prospective estudy of exogenous hormones and risk of pulmonary embolism in women. Lancet 1996; 348:983-7.
15. 15. Frmaco-vigilancia Observacional es Prospectivos Retrospectivos Cohorte Casos y controles Casos clnicos Meta-anlisis
16. 16. Framingham Study. KEEPS. Kronos early estrogen prevention study. Lipid Research Clinics Program. F Nurses Health Study. HERS. Heart and estrogen/progestin replacement study. C MORE. Multiple outcomes of raloxifene evaluation. RUTH. Raloxifene use for the heart. PEPI trial. Postmenopausal estrogen/progestin interventions. F WHI. Womens health initiative. C
17. 17. Investigacin en diferentes especies animales y lneas celulares
18. 18. Garca-Manzano et. al., Steroids 67 (2002):1129-1135. Estradiol=3mg/100g
19. 19. Mtodos coagulomtricos, ELISA, PCR tiempo real, ratn knockout o . EE (1 g), ICI-182780 (100 g).
20. 20. Biosntesis del Factor XII Transcripcin Elementos de respuesta a estrgenos (ERE) AGG TCA NNN TGA ACC Fase de contacto: Va intrnseca, activacin de plaquetas -Citarella F, Misiti S, Felici A, Aiuti A, La Porta C, Fantoni A. The 5 sequence of human factor XII gene contains transcription regulatory elements typical of liver specific, estrogen-modulated genes. Biochim Biophys Acta. 1993 Feb 20;1172(1-2):197-9. -Farsetti A, Misiti S, Citarella F, Felici A, Andreoli M, Fantoni A, Sacchi A, Pontecorvi A. Molecular basis of estrogen regulation of Hageman factor XII gene expression. Endocrinology. 1995 Nov;136(11):5076-83. -Citarella F, Misiti S, Felici A, Farsetti A, Pontecorvi A, Fantoni A. Estrogen induction and contact phase activation of human factor XII. Steroids. 1996 Apr;61(4):270-6. Review.
21. 21. Movrare et al., Estrogen increases coagulation factor V mRNA levels via both estrogen receptor- and in murine bone marrow/bone. Eur J Endocrinol 2004; 151:259-263. Erdmann D and Heim J. Orphan nuclear receptor HNF-4 binds to the human coagulation factor VII promoter. JBC 1995; 270(39):22988-22996. Kapiotis et al., Plasma levels of activated factor VII decrease during the menstrual cycle. Thromb Haemost 1998; 80:588- 91. Bitondo R et al., Oestrogenic repression of human coagulation factor VII expression mediated through an oestrogen response element sequence motif in the promoter region. Hum Mol Gen 2002; 11(7):723-731. Fossum et al; Contact factors in plasma from women on oral contraception significance of factor XI for measured activity of factor XII. Thromb Res; 1994.
22. 22. Justificacin Existen escasos trabajos enfocados a la comprensin de los mecanismos celulares y moleculares implicados en la patognesis de la trombosis por administracin de frmacos con actividad estrognica. La mayora de los trabajos se basan solamente en un modelo animal o celular y evalan principalmente la actividad del estradiol.
23. 23. Hiptesis Los estrgenos de uso clnico aumentan la incidencia de eventos tromboemblicos a travs de diversos mecanismos que estn relacionados con cambios en la coagulacin, la fibrinlisis y la respuesta inflamatoria.
24. 24. Objetivo General Realizar un estudio integral y comparativo de los efectos de estrgenos de uso clnico, sobre el sistema hemosttico, el sistema fibrinoltico y la respuesta inflamatoria in vivo e in vitro. Determinar la va de sealizacin de estos compuestos y su interaccin con receptores especficos de estrgenos.
25. 25. Objetivos especficos Determinar el efecto del estradiol, etinilestradiol, mestranol, equilina, equilenina y tamoxifen sobre marcadores especficos de: El sistema de la coagulacin In vivo (ratas macho adultas) e in vitro (clulas de hepatoma humano Hep-G2). El sistema fibrinoltico In vivo (ratas macho adultas) e in vitro (clulas de hepatoma humano Hep-G2). La respuesta inflamatoria In vitro (clulas de hepatoma humano Hep-G2 y clulas de endotelio vascular HUVEC). Mecanismo de accin In vitro (clulas de hepatoma humano Hep-G2 transfectadas con el receptor alfa o beta de estrgenos).
26. 26. Marcadores biolgicos Funcin Marcador Coagulacin TP, TTPa, Fibringeno, fibrina soluble Von Willebrand, dmero D factores, factor tisular Fibrinlisis Activador del plasmingeno tisular Inhibidor del activador del plasmingeno tisular-1 Inflamacin Protena C reactiva E-selectina, TNF- Fibringeno Interleucina-1, 6, VCAMs, ICAMs Anticoagulantes Protena C, protena S, 2- antiplasmina Antitrombina
27. 27. Rata Wistar macho adulto de 250 g Bioterio de la Facultad de Medicina Clulas humanas de hepatoma (Hep-G2). Dra. Erika Rendn Clulas endoteliales vasculares de cordn umbilical (HUVEC)
28. 28. Rata Wistar macho adulto de 250 g Bioterio de la Facultad de Medicina Distribucin en lotes de acuerdo a su peso Tratamiento por va subcutnea Durante tres das consecutivos Estradiol, etinilestradiol, mestranol, equilina, equilenina, tamoxifen. Disueltos en 0.3 ml de propilenglicol Dosis: 1, 3, 10 y 30 mg/Kg Toma de muestras de arteria ilaca, bajo anestesia, avertin Obtencin de plasmas y sueros Procesamiento
29. 29. Determinacin del tiempo de protrombina (TP). Va extrnseca Plasma 50 l Adicionar 100 l de tromboplastina de cerebro de conejo con calcio a 37C Tiempo de formacin del cogulo (seg) Determinacin del tiempo tromboplastina parcial activada (TTPA). Va intrnseca Adicionar 50 l de fosfolpidos de soya Adicionar 50 l de CaCl2 a 37 C Incubar 50 l de Plasma a 37 C Incubar 120 seg a 37 C Tiempo de formacin del cogulo (seg)
30. 30. A Log doses (mg/kg) 1 3 10 30 Prothrombintime (%ofresponses.e.m.) 0 90 100 110 120 B Log doses (mg/kg) 1 3 10 30 Activatedpartialthromboplastin time(%ofresponses.e.m.) 0 80 90 100 110 120 130 140 Ethinylestradiol Estradiol Vehicle * * * * * * * *p