Capitolul 4 .Metode de Analiza a Extractului Din Seminte de Struguri

Download Capitolul 4 .Metode de Analiza a Extractului Din Seminte de Struguri

Post on 03-Jan-2016

178 views

Category:

Documents

0 download

Embed Size (px)

DESCRIPTION

Industrie alimentara, control si experiza

TRANSCRIPT

Activitatea antioxidanta si antibacteriana a extractului din seminte de struguri

Activitatea antioxidanta si antibacteriana a extractului din seminte de struguri2009

CAPITOLUL .Semintele folosite la obtinerea extractului Semintele de struguri folosite in producerea extractelor din seminte de struguri comerciale sunt derivate ale unei varietati de struguri pentru vin (Vitis vinifera).Acesti struguri pot avea un nivel de polifenoli de 12 ori mai mare decat cel gasit in varietatile fara seminte.In mod natural semintele din strugurii de vin contin 50-1000mg/kg(mai putin de 1 procent) monomer, 120-1400mg/kg oligomeri si 1250-1700mg/kg polimeri sau substante tanante cu masa moleculara mare.Sursa si soiul semintelor din struguri de vin utilizate la producerea extractului din seminte de struguri pot afecta compozitia extractului. Bourzeix a compara continutul de proantocianidine a unor soiuri de seminte de struguri iar continutul a variat de la 51mg/kg in semintele Carignan la 1100mg/kg in seminte de struguri Pinot Noir, Cabernet Sauvignon-ul avand 285mg/kg. Proantocianidinele oligomere au variat intre 114mg/kg in semintele Carignan pana la 1275 mg/kg in semintele Pinot Noir, in timp ce Cabernet Sauvignon-ul a avut 371mg/kg.Polimerii au variat de la 6-73 procente. Atat semintele din struguri rosii cat si albi sunt folosite in producerea extractului commercial din seminte de struguri.In general semintele din struguri rosii au un continut mai mare de polifenoli decat semintele albe de struguri;3500mg/kg pentru cei rosii in comparatie cu 2800mg/kg pentru cei albi. Semintele folosite in producerea extractului din seminte de struguri pot fi achizitionate din urma operatiilor de producere a sucului de struguri sau de la producatorii de vin. Semintele de struguri rosii obtinute dintr-o unitate producatoare de vin acompaniaza sucul de struguri si pielitele pe parcursul procesului de fermentatie si pierd aproxiamtiv 30-50% din continutul lor de polifenoli.In fapt continutul de polifenoli al vinului rosu (extras din seminte) este cel care confera vinului calitatea astringenta.Semintele din strugurii albi pe de alta parte sunt indepartate din suc inainte de fermentatie prin urmare retin o portie semnificativ mai mare de polifenoli. Un alt factor care afecteaza continutul polifenolic al semintelor este chiar procesul de obtinere a vinului numit vinificatie. Majoritatea vinurilor sunt obtinute prin proceduri conventionale, dar unele vinuri cum ar fi Nouveau se bazeaze pe maceratia carbonica. Termovinificarea este utilizata in zone unde vinul rosu este obtinut din struguri care sunt mai saraci din punct de vedere al culorii, de exemplu in zonele reci este dificil de obtinut struguri complet copti. In medie vinificatia conventional indeparteaza 30% mai multi polifenoli din seminte decat termovinificarea si macerarea carbonica.Cel mai important aspect al semintelor utilizate la obtinerea extractului este totusi uscarea, separarea si depozitarea, care pot avea un effect dramatic asupra potentei si viabilitatii semintelor precum si asupra produsului extras.Ideal ar fi ca semintele folosite la producerea extractului din seminte de struguri sa fie procesate imediat adica separate de pielitele macerate si supuse imediat la procesul de extractie dar in mod practice acest lucru nu este posibil. Pentru inceput strugurii de vin sunt o recolta sezoniera prin urmare cantitati mari de pielite si seminte macerate ( numite tescovina) trebuie sa fie achizitionate intr-o perioada scurta de timp.Aceasta perioada dureaza in mod obisnuit din August pana in Noiembrie in emisfera Nordica si din Februarie pana in Aprilie in emisfera sudica. Tescovina de struguri are un continut de umiditate mare si este puternic perisabila, semintele trebuind sa fie separate de pielite si conservate cat mai repede posibil.Mai multe metode de uscare sunt folosite incluzand si uscarea la soare sau cea mecanica folosind cuptoare.O alta metoda de conservare a semintelor este sa le separam de pielite si sa le supunem inghetului. Semintele trebuie sa fie depozitate in mod corespunzator pentru a preveni mucegairea sau oxidarea. Semintele depozitate impropriu isi pierd rapid proprietatile nemaifiind optime pentru supunerea la procesul de extractie.Proantocianidinele oligomere sunt prezente in stratul exterior al semintelor de struguri, puse acolo de mama natura pentru a proteja samanta si a ajuta la propagarea specie.Dupa indepartarea din vin proantocianidinele servesc ca linie principala de aparare a semintelor impotriva elementelor oxidante precum soarele (razele UV) si aer (oxigen), care pot distruge membranele celulare ale semintelor si sa deterioreze AND-ul in acelasi mod in care cauzeaza deteriorari celulare la oameni.Prin indepartarea umiditatii in exces si minimizarea expunerii lor la elementele oxidante, semintele din struguri pot fi depozitate perioade lungi in timp ce isi mentin potentialul.Procesarea semintelor:

Deosebirea primara intre varietatile de extracte din struguri disponibile pe piata consta in procesul de fabricare sau extractive. Fiecare din aceste procese prezinta avantaje si dezavantaje care pot afecta compozitia, potentialul,costul etc. Desi detaliile despre procese sunt informatii ce il privesc pe producator exista 2 abordari de baza: 1) extractia cu solvent 2) extractia cu etanol si apa. Extractia cu solvent foloseste unul sau mai multi solventi organici precum acetona, clorura de metil sau toluen pentru a indeparta si separa proantocianidinele oligomere din semintele de struguri. Solventii sunt apoi recuperati iar concentratul rezultat este apoi fie uscat prin pulverizare fie prin vacuum si macinat. Proceduri similare de fabricare sunt angajate si in unele procese cu apa si etanol in timp ce altele implica filtrare complexa, concetrare si pasi de purificare. Desi apa si etanolul pot fi folosite intr-un proces de extractie cu solvent, termenul extractie cu apa si etanol ar trebui sa fie rezervat pentru procese care folosesc doar apa si etanol si nu folosesc si alti solvent organici.Metode de analiza

Extractul din seminte de struguri este un ameste heterogen de acid galic, monomeri,dimeri,trimeri, tetramer, polimeri si alti oligomeri. Moleculele de baza sunt catehinele, epicatehinele, esterii acidului galic, glicozide si peptide. Datorita gradului mare de heterogenitate, sunt necesare mai multe tehnici analitice pentru a caratcteriza extractul din seminte de struguri.

Cromatografia in strat subtire: Ce este masurat: separaraea calitativa a fenolilor, folosita pentru a determina daca este extractul este din struguri Tipul metodei: Cromatografica, bazat pe marimea si polaritatea fenolilor Standard: acid galic, catehine, epicatehina si extract de seminte de struguri comercial

Dezavantaje: doar calitativ, nu poate distinge intre pielita de strugure si samanta de strugure

Comitetul Metodelor de Evaluare a semintelor de struguri a adoptat aceasta metoda industrial pentru a determina calitativ daca un extract este bazat pe strugure

Aceasta procedura include o separare prin cromatografie in strat subtire a extractelor sub forma de pudra preacetilate.

In 1998 trei laboratoare independente au validat metoda cromatografiei in strat subtire prin testarea a 14 extracte din seminte de struguri, ceai verde, picnogenol si merisor precum si a 13 produse in stare finala. Acesta este un teste calitativ facut pentru a identifica extractul din seminte de struguri si pentru a-l diferentia de alte extracte care ar putea avea componente similare.Valoarea procianidolica si Valoarea Porter Proba Procianidolica mai este denumita si proba Bate-Smith.

Ce este masurat:fenolii demeri si mai mari, valoarea calitativa ce indica prezenta relativa

Tipul metodei: spectrofotometrica, bazata pe hidroliza acida si formarea de culoare

Standard:nici unul

Dezavantaje: reproductibilitate slaba

Comitetul de Evaluare al semintelor din struguri nu recomanda aceste metode pentru cuantificarea continutului total de fenoli sau a proantocianidinelor oligomere in extractele din seminte de struguri.

Index-ul Procianidolic (denumit deasemenea Proba Bates-Smith) implica o metode de tetstare care masora schimbarea culorii atunci cand produsul este amestecat cu diverse chimicale, cu cat se schimba culoarea mai mult cu atat continutul de proantocinidine oligomere este mai mare. Totusi Index-ul Procianidolic este o valoare relativa ce poate fi mult peste 100. Analizele Porter si Procianodolic sunt teste colorimetrice bazate pe hidroliza acida. Dimerii si moleculele mai mari sunt transformate in antocianidine prin hidroliza acida.Un grafic standard nu este incorporat iar rezultatele pot fi raportate doar ca valori, nu ca si procentaje.Este de asemenea foarte greu sa obtii rezultate reproductibile cu proba Valoarea procianidolica, deoarece rezultatele depind foarte mult de condtitiile de testare iar cianidina (antocianidina formata in timpul hidrolizei acide) este relativ instabila. Trei laboratoare independente au desfasurat un studiu atat asupra Valorii Porter cat si asupra Valorii Procianodolic si au gasit variatii mari de la laborator la laborator in cazul valorii Procianodolic. Unele companii folosesc un test Bate-Smith modificat pentru a creste reproductibilitatea rezultatelor. Proba Assay contine sulfat feroso-amoniacal, care stabilizeaza reactia mai bine decat in proba Procianodolica si da rezultate mai putin dependente de conditii.Proba Procianodolica:

Proantocianidine (dimeri si mai mari) + HCl/izopropanol + caldura = cinidina, absorbtie la 550 nm Proba Porter:

Proantocianidine (dimeri si mai mari) + NH4Fe(SO4)2 12 H2O + HCl /n-butanol + caldura = cianidina, absorbtie la 550 nmReactia chimica din dreapta descrie atat valoarea Porter cat si valoarea Procianodolica.

Continutul total de fenoli (Folin-Ciocalteu) Ce este masurat: concentratia