FACULTAD DE ZOOTECNIADEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIA ANIMAL

COLORACIONES MICROSCOPICASCOLORACIONES MICROSCOPICAS

CURSO : BIOLOGIA GENERAL

DOCENTE : CHUQUILIN BUSTAMANTE, Edilberto.

ALUMNOS AREVALO GARCIA, Máx.

AREVALO DIAS, Diana del C.

ALDAVA PARDAVE, Uriel.

AQUINO VARA, Bananin.

BARRIOS SANTOS, Karen.

ALANIA GARCIA, Mishella.

CACHIQUE PUJAI, Alva.

BALDEON VALLES, Antonio.

BUSTILLOS BENANCIO, Romer A.

CANCHANYA LOAYSA, Carlos.

ASCENCIO MALPARTIDA, Gerson.

17 / 07 / 06

I. INTRODUCCION

Todas las actividades de la célula, tanto a nivel molecular como a nivel superior

están controladas y determinadas directa o indirectamente por una sola clase

de sustancias (ADN). Estas moléculas maestras son, por naturaleza, las

responsables de la transferencia e información de una generación de células a

otra (Herencia).

El tamaño de las células es muy variable algunas son grandes otras pequeñas,

el color que poseen y el contraste muchas veces impiden observarlas bien por

el microscopio óptico por lo cual el medio más simple de aumentar su contraste

es utilizando colorantes tiñendo así su morfología, para lo cual se emplean dos

métodos:

Preparados en fresco: para observar células vivas. En este método no se utiliza

ningún colorante. Las células que se observan se encuentran en su propio

medio u otro similar y el índice de refracción de estas es muy similar al medio

que lo rodea, al no existir un contraste suficiente que los haga claramente

visibles.

Preparados en seco: para observar células muertas y teñidas. Para la correcta

observación del material celular, mediante este método, requiere una serie de

pasos previos como extensión, fijación y tinción de este material. Este método

permite observar y diferenciar claramente tanto varios tipos morfológicos de

célula; los siguientes objetivos son:

Observar correctamente un preparado en fresco y en seco.

Conocer métodos de observación de las células y técnicas de coloración

más comunes.

Reconocer los microorganismos existentes en el agua estancada

Conocer las distintas formas y tipos de células que componen en los

tejidos animales.

II. REVISION DE LITERATURA

2.1. CELULALa célula es la unidad más pequeña de la materia viva, capaz de llevar a cabo

todas las actividades necesarias para el mantenimiento de una vida. Tiene

todos los componentes físicos y químicos necesario para su propio

mantenimiento, crecimiento y división, cuando cuentan con los nutrientes

necesarios y un medio adecuado. Ningún componente celular es capaz de

sobrevivir fuera de la célula. Según ville (1992).

2.1.1. Formas celularesLa forma de una célula se relaciona con la función y que está realiza, algunas

células como la ameba y los leucocitos pueden hacer variar su forma durante

su trayectoria, los espermatozoides tienen una cola larga, en forma de látigo

que ayuda en la locomoción, y las células nerviosas poseen extremos delgados

y largos que les permiten transmitir mensajes a través de grandes distancias,

otras células como las epiteliales asumen una forma casi rectangular y se unen

a otras como si fuesen ladrillos, hasta formar estructuras laminadas, célula

circulares, etc. (VILLE, 1992).

Los organismos pueden clasificarse en dos grupos fundamentalmente

diferentes, según la estructura y complejidad de sus células.

2.2. Células procariotasSon aquellos que carecen de núcleo y generalmente son más pequeñas que

los eucarióticas, el ADN de las células procarióticas esta confinado a una o

más regiones nucleares, que a veces se le denominan nucleoides, los

nucleoides no están limitados por una membrana independiente

2.3. Células eucariotasSon aquellos que contienen una estructura llamado núcleo, que se encuentran

limitado por una membrana nuclear y varios organelos membranosos

complejos, con las mitocondrias.

2.3.1 Estructura celular de las células eucariota.

Estructura celular Función Célula vegetal

Célula animal

Membrana celular

Contiene al citoplasma, regula el paso de materiales hacia adentro y fuera de la célula, ayuda a mantener la forma celular, comunica a la Célula con otras.

Presente Presente

Pared celular

Protección contra los agentes mecanismos, evita la dilatación excesiva provocada por la presión interna del citoplasma.

Presente: Contiene celulosa

Ausente

Lisosomas

Contiene enzimas que degradan material ingerido, las secreciones y desperdicios celulares

Generalmente ausente

Suelen estar presentes

Ribosomas Síntesis de polipéptidos Presente Presente

Aparato de GolgiModifica, empaca y distribuye proteínas a vacuolas y otras organelos

Presente Presente

VacuolasTransporta y almacena material ingerido, desperdicios y agua.

Generalmente presente

Pequeñas o ausente

Retículo endoplasma tico

Sitio de síntesis de lípidos y de proteínas de membrana Presente Presente

Plastidios

La clorofila captura energía luminosa, se producen ATP y otros compuestos energéticos que después se utilizan en la conversión de CO en glucosa

Presente Presente

Cromosomas

Contiene genes (unidades de información hereditaria que gobiernan la estructura y actividad celular)

Formados por ADN y proteínas lineales

Formados por ADN y proteínas lineales

Fuente: (ville, 1992)

2.4. TEJIDO

Es un conjunto de células especializadas de forma similar entre si, y de

sustancia intercelular, que se asocian para realizar una función especifica o un

grupo de funciones (VILLE, 1992).

2.5. Tejido animalUn tejido esta formado por varias células, estrechamente asociadas entre si, y

se clasificas en:

2.5.1. Tejido epitelialEstá formado por células acopladas, formando una capa o láminas continúas,

que cubren la superficie o algunas cavidades del cuerpo. Otra superficie de

esta capa se une al tejido subyacente, mediante una membrana basal,

compuesta por fibras muy delgadas, de un material formando por polisacáridos

producidos por las células epiteliales. Además de la capa externa de la piel, las

membranas de los sistemas digestivas y respiratorias, y tubulos renales, son

ejemplo de tejido epitelial.

Las funciones de los tejidos epiteliales son de protección, absorción, secreción

y sensación (VILLE, 1992).

Características Sus células están íntimamente unidas por uniones celulares.

Sus células adoptan formas geométricas.

Dichas células se apoyan sobre la membrana basal.

Presentan abundantes terminaciones nerviosas.

El tiempo de vida de las células epiteliales es limitada de modo que hay

procesos de renovación celular constante.

2.5.2. Tejido conectivoLa principal función de los tejidos conectivos es la unión de otras tejidos, pues

también dan soporte al cuerpo, sus estructuras y protegen a los órganos

subyacentes (VILLE, 1992).

2.5.3. Tejido cartilaginoso.

El esqueleto de soporte de los vertebrados consta de cartílagos. El cartílago

esta presente en el esqueleto de las fases embrionarias de todos los

vertebrados, aunque en adulto es reemplazado por huesos (excepto en el caso

de tiburones y rayas).

La estructura de sostén del pabellón de la oreja, los anillos de soporte de las

paredes de vías respiratorias y la punta de la nariz son ejemplo claros de

estructura cartilaginosa en el ser humano (VILLE, 1992).

2.5.4. Tejido muscular estriadoSon tejidos con células especializadas en la contracción, sus células se

denomina fibras musculares o miocitos. Este tejido es responsable del

movimiento del cuerpo.

Las fibras del músculo estriado pueden contraerse rápidamente pero no

pueden permanecer contraídas. Una fibra de músculo estriado debe relajarse y

descansar momentáneamente antes contraerse de nuevo las fibras del

músculo estriado por lo general se encuentra bajo control voluntario (VILLE,

1992).

2.5.5. Tejido nerviosoEl tejido nervioso está compuesto por neuronas, células especializadas en la

conducción de impulsos electroquímicos, y células líales, que dan soporte y

nutrición a las neuronas. Algunas neuronas reciben señales del medio interno y

externo y la transmisión a la medula espinal y al cerebro, otras prolongaciones

de las células nerviosas procesos y almacenan información. Esta es la base

celular en los complejos funciones de conciencia, memoria, pensamiento y

movimiento dirigido (VILLE, 1992).

El tamaño y forma de las neuronas es variable, pero generalmente cada una

posee un cuerpo celular, que contiene al núcleo del cual se proyectan dos

prolongaciones con forma de pelo.

Las dendritas son fibras especializadas para recibir impulsos de los estímulos

ambientales o de otras células (VILLE, 1992).

El axón sencillo se especializa en la conducción de impulsos fuera del cuerpo

de la célula. Los axones generalmente son largos y lisos, pero en ocasiones

pueden ramificarse (VILLE, 1992).

2.5.6. Tejido sanguíneoLa sangre, que el líquido que corre por las arterias y venas, esta formada por

glóbulos rojos, blancos y plaquetas, todos suspendidos en el plasma, que es la

parte a otra del cuerpo. Algunos de esas sustancias se disuelven simplemente

en el plasma, mientras que otras van fijas a proteínas como albúminas.

Casi todos los biólogos clasificas a la sangre entre los tejidos conectivos; sin

embargo, otros consideran que la sangre es un tipo especial de tejido ya que

las células del tejido conectivo secretan su matriz circundante y las células de

la sangre no secretan el plasma (VILLE, 1992).

2.6 Tejido vegetalClasifican a los tejidos vegetales, algunas células parecen en contraste en

situación intermedia entre los tipos celulares, asimismo, hay células que

cambian de aspecto durante su vida.

No obstante, en general los tejidos pueden ser asignados a una de los

categorías principales: tejidos meristemáticos formados por células inmaduros

en proceso de división celular y los tejidos permanentes, integrados por células

maduras diferenciadas (VILLE, 1992).

2.6.1. Clasificación de los tejidos vegetalesLos tejidos vegetales se clasifican en los siguientes tipos:

Meristemos.- Constituidos por células proliferantes que causan el crecimiento

y desarrollo de la planta.

Parénquima.- Formando por células más diferencias que realizan funciones

fotosintéticos o de almacén de sustancias nutritivas, como agua almidón, etc.

De sostén.- Tejidos de células especializadas, con paredes muy engrosadas

para cumplir esa misión lo constituyen la colénquima y esclerenquima. También

contribuyen la sostén de las plantas. Los vasos, sobre todos los leñosos.

Vasculares o conductores.- Constituyen el sistema circulatorio de la planta.

Son el leño o xilema y el liber o floema.

Protectoras.- Protegen de la perdida de agua y de la acción de

agentes externos son la epidermis y la peri dermis.

Secretoras.- Hay tejidos secretores formando parte de la epidermis, como

las glándulas, pelos, o coloraciones

Son compuestos, orgánicos y otros internos, como las células que forman los

conductos resiníferos que contienen radicales cromóforos esto es que

producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-

NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-

NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con

la fibra o tejido. (Ville, 1988).

3.1.COLORACIONESSon compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que

producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-

NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-

NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad

cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con

la fibra o tejido. (Ville, 1988).

3.1.1. Coloración BacterianaEntes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro

líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y

delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son

fijados por sustancias químicas o por el calor moderado. (Ville, 1988).

Tinciones: Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (No vivos);

en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de

microorganismos. (Ville, 1988).

3.2.TIPOS DE COLORANTES3.2.1 Colorantes básicos

Verde de metilo (verde).

Azul de metileno (azul).

Pironina G (rojo)

Azul de toluidina (azul)

Reaccionan con los grupos de aniónicos de los componentes estúrales

que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (DNA, RNA) los

grupos sulfato de los glucosaminoglucanos y los grupos carboxilo de las

proteínas. (Sherman, 1994)

Los tres grupos se ionizan y quedan disponibles para la reacción con el

colorante básico por medio de uniones electrostáticas; a un pH

ligeramente ácido o neutro. (Sherman, 1994)

Hematoxilina no es colorante básico en sentido estricto. (Sherman,

1994)

Hematoxilina se presta para aquellos procedimientos tintoriales no los

que a ella le sigue la eosina u otro colorante ácidos. (Sherman, 1994)

Los colorantes básicos verdaderos no suelen usarse en secuencias en

donde el colorante básico es seguido por un ácido por que la anilina

básica tiene a disociarse del tejido durante los lavados posteriores en

soluciones acuosas. (Sherman, 1994)

3.2.2 Colorantes Ácidos Fucsina ácida (rojo)

Azul de anilina (azul)

Eosina (rojo)

Naranja G (naranja)

Se unen primariamente a los componentes estúrales por medio de

enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los

colorantes básicos. (Otto, 1993).

Las anilinas ácidas reaccionan con grupos cationicos, como son los

grupos Aminos ionizados de las proteínas. Aunque el enlace

electrostático constituye el principal factor en la unión primaria del

colorante con el tejido. (Otto, 1993).

En la técnica de MALLORY se usan tres colorantes ácidos, azul de

anilina, fucsina ácida, y naranja G. Estos tiñen con selectividad el

colágeno, el citoplasma en general y los eritrocitos, respectivamente.

(Otto, 1993).

La fucsina ácida también tiñe los núcleos. (Otto, 1993).

En otras técnicas con anilinas ácidas múltiples se emplea la

hematoxilina para teñir los núcleos primero y luego se aplican los

colorantes ácidos con el fin de teñir selectivamente el citoplasma y las

fibras extracelulares. (Otto, 1993).

Los colorantes básicos también pueden emplearse combinados, pero

estas combinaciones no son de uso tan extendido como las de los

colorantes ácidos.

3.3. TINCION GRAMEs un extendido bacteriano fijado al calor sobre un portaobjetos se trata con el

colorante básico, violeta de cristal. Todos los organismos toman este colorante,

luego se cubre el extendido con la solución yodada de gram. Después de un

enjuague con agua y una decoloración con acetona, se lava el preparado

minuciosamente en agua y se contratiñe con un colorante rojo, generalmente

saframina. El preparado teñido se enjuaga entonces con agua, se seca y se

examina bajo el microscopio.

Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos, según lo

implementara a comienzo del siglo XVIII el bacteriólogo danés Cristian Gram.

a). Microorganismos Gram.-positivosEstos microorganismos se tiñen de color azul o violeta intensa

b). Microorganismos Gram.-negativosEstos microorganismos pierden el cristal violeta y se vuelven a teñir con la

saframina, apareciendo el color rojo.

3.4. NUEVO COLORANTE DE CÉLULASLa técnica de tinción celular o coloración de las células facilita el estudio de la

composición y estructura microscópica de tejidos orgánicos. El proceso

consiste en teñir una muestra del tejido a observar y cuando éste tiene contacto

con el colorante o pigmento, los núcleos y el citoplasma de las células resaltan,

con lo que se simplifica la localización de cualquier tipo de daño. (Sanboh,

1996).

En la estructura celular de los seres vivos es posible observar y detectar la

existencia de anomalías o patologías, que generalmente se relacionan con

enfermedades. Este método ha permitido a los científicos localizar

padecimientos múltiples

III. MATERIALES Y METEDOS.

3.3 Lugar y fecha de ejecución de la práctica.

Esta practica fue realizada el 19 junio y el 26de julio del 2004, en el laboratorio

de la UNAS, que se encuentra ubicado en el distrito de Rupa Rupa, provincia

de Leoncio Prado, Departamento de Huanuco, con una temperatura promedio

de 24 C, con una altitud de 660m.s.n.m.; con una precipitación anual de

3100mm, con una humedad relativa aproximada de 85% en promedio.

3.1. Materiales. Mucosa labial. Laminas de porta y cubre objetos. Eosina. Fucsina. Cristal violeta. Aceite de cedro.

Lugol. Mechero. Agua destilada. Azul de metileno. Microscopio compuesto,

Sangre humana.

Agua estancada.

Lamina porta y cubre objetos.

Gotero.

Bisturí.

2 laminas de frotis sanguineo.

3.2MetodologíaLa práctica fue visual-experimental, se empezó poniendo las muestras en los

portaobjetos, luego se tiñeron dichas muestras para ser observadas en el

microscopio.

.

3.4 Procedimiento.a). Coloración simple.-Muestra de mucosa labial

En este tipo de preparado se uso como muestra la mucosa labial, para

observar en el microscopio su morfología, y para ello se siguió los

siguientes pasos.

Se coloco la mucosa labial en una lámina porta objeto, luego con otra

lámina se hizo un frotis, para extenderla sobre la primera lamina.

Una vez extendida se hizo una fijación, flameándole sobre el fuego de

manera vaivén, para que la fijación sea uniforme y rápida para matar a

las células.

Después de la fijación pasamos a la coloración de la muestra, en

nuestra mesa usamos el colorante azul de metileno; también se puede

usar otros colorantes como son: Eosina, Fucsina, Cristal violeta, Verde

de metileno, etc.

Después de una pequeña tinción se paso al lavado para quitar el exceso

de colorante y para que se visualice, mejor en el microscopio.

Luego se observo al microscopio en 10X y 40X, dependiendo de la muestra,

para una mejor visualización de la mucosa labial..

Esquematizar resultados

Preparado de la cebolla Hacer un raspado con bisturí y sacar la catafila de la cebolla de

una a quince centímetros

Toma una pequeña porción de muestra y colocarla en el centro de

un portaobjeto limpio

Extender una muestra mediante movimiento concéntricos hasta

una capa fina y uniforme

Después echar una gota de alcohol con un gotero teñir la

extensión fijada cubriéndola con azul metileno

Después poner el cubreobjeto y ver en el microscopio 10x y 40x

Muestra de semen

Extraer con el gotero una gota de semen Colocar la gota del semen en el portaobjeto Hacer un frotis y luego agregar solución de salina para que este

emulsione Colocar el cubreobjeto y observar a 10x y 40x

6.4. Tejido sanguíneo Se limpio el brazo de una persona con alcohol.

Con una lancetilla se hizo una punción en el brazo, eliminándolo la

primera gota que salga.

Luego se coloco la sangre en la lámina portaobjeto y se coloreo con azul

metileno

Se lavo y se dejo secar a temperatura de ambiente

Luego se hecho aceite de cedro y se le puso el cubreobjeto

Colocar en la platina del microscopio una lámina con frotis sanguíneo

teñido (coloración Wright).

Observar.

Se observó que el tejido sanguíneo tenía pequeños círculos y alrededor

una coloración roja continua llamado plasma.

Muestra de agua estancada En este proceso se uso agua estancada o de charco para ello se siguió

los siguientes pasos:

Se saco con un gotero una gota y se puso la muestra, en una lamina de

porta objeto.

Luego se cubrió la muestra con una lamina de cubre objeto.

Luego se llevo al microscopio para observar, de manera directa, se

observo a 10X y a 40X,

6.1. Observación de tejido nervioso Colocar la platina del microscopio una lámina montada con corte

Histológico de medula.

Observar con el objetivo 40x.

Se observó que la forma de la célula era estrellada, habían abundantes

células estrelladas.

6.3. Tejido muscular estriado Colocar en la platina del microscopio una lámina montada un corte

histológico de músculo estriado (lengua).

Observar

Se observó que la forma de las células eran rectangulares y

alargaciones en abundante.

Se observó que las células estaban delimitadas por pequeños

espacios, por ende no estaban plegadas entre sí.

b) Coloración Doble.-

Se usa dos clases de colorantes (Coloración Gram.).

Azul de metileno.

Saframina (color rojo).

Se usa la misma muestra y procedimiento que el anterior

IV. RESULTADOS

Glóbulos rojos

Células nerviosas

Glóbulos blancos

V. DISCUSIÓNSegún Ville (1988) y Otto (1993), nos mencionan de que para realizar el tipo de

coloración o preparado en fresco cumple con lo que se realizo en la practica;

también menciona que para el preparado en seco, también cumple con lo

realizado a la practica, solo con la inferencia de algunos colorantes

En la muestra de tejido sanguíneo, según la guía nos dice que debemos usar

aceite de inmersión para el objetivo de 10 x y 100 x. por lo tanto no se usó este

material ya que de ello nos habría permitido una mayor visualización.

Según Vázquez Urday (1992), existe una pequeña comparación de la mucosa

labial y de la laga vista y existe cierta relación, por lo tanto la práctica realizada

fue un éxito.

Las laminas montadas, teñidas están lista para la observación, pero nosotros

no lo hemos visualizado como era el proceso de realizar una lamina montada y

como se realiza en tejido y también no pudimos observar tejidos vegetales.

En la observación de células del Lycopersicum esculentum en mayor aumento

objetivo 40x no se pudo observar claramente los pigmentos carotenoides.

Las muestras puestas en diferentes microscopios de igual aumento no se pudo

observar la uniformidad de células presentes en un mismo material

(Lycopersocum esculentum).

VI. CONCLUSIONES

Se pudo realizar los preparados en fresco y en seco, conforme a lo

establecido por la práctica.

Se conoció las técnicas más comunes de coloración que son

coloración simple y compuesto.

Se pudo observar los pigmentos carotenoides

Se pudo observar la morfología que presenta la célula.

Se realizo las muestras establecidas (Lycopersicum esculentum y

agua estancada) conforme lo establecido en la practica

Se observó los diferentes tejidos animales vegetales

Se observó el tejido muscular estriado con una claridad y se pudo

observar la forma de células que estaban ordenados.

VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

VILLE, C. 1988. Biología. 7ª edic. Edit. Interamericana. S.A. México.

875p.

OTTO, J.Y.A. TOWLE. 1993. Biología Moderna. 11ª edic. Edit

McGraw – Hill, S.A. México. 621p.

SANBOH LEE, H-Y Lee, I-F Lee, C-Y. 1996. Teeng. Ink diffusion in

Water. Eur. J. Phys. 25. (2004) pp. 331-336.

SHERMAN, I. Y V. SHERMAN. 1994. Biología. 3ra edic. Edit. Mc

Graw-Hill, S.A. México. 704p.

GERARD. J. Tortora. Introducción a la Microbiología. Editorial Acribia

S.A. Zaragoza - España. 792p

Botánica general I: Teoría y Práctica. Facultad de Recursos Naturales

renovables-UNAS. Tingo María.

NASON, A. 1968. Biología. 1ra Edición. Edit. Limusa S.A. México.

726p.

VILLE, C. 1992. Biología. 2da Edición. Edit. Interamericana. S.A.

México. 1404p.