EUCAST

lappdiffusionsmetod

Avläsningsguide

Version 5.0

Juni 2017

Ändringar från tidigare version (v 4.0)

Bild Ändring

3 Förtydligande om automatiska zonavläsare.

17 Förtydligande om avläsning av trimetoprim-sulfametoxazol för

Stenotrophomonas maltophilia.

18 Ampicillin-sulbaktam och amoxicillin-klavulansyra tillagt.

20 Avläsningsinstruktioner tillagt för fosfomycin och Escherichia coli.

21 Information tillagt om avläsning av vankomycin och enterokocker.

2

• Följande instruktioner för avläsning är en del av EUCAST

lappdiffusionsmetod.

• Ta hänsyn till all växt som syns med blotta ögat när

plattan hålls på ca 30 cm avstånd och läs zonerna där

växten slutar. (se bild 15-24 för särskilda

avläsningsinstruktioner).

• Mät zondiametern till närmsta millimeter med skjutmått

eller linjal. Om en automatisk zonavläsare används måste

denna kalibreras mot manuell avläsning.

Avläsning

3

Avläsning

• MH

Mät zoner från baksidan

mot en mörk bakgrund

med belysning mot

plattan.

• MH-F

Mät zoner från

ovansidan utan lock med

belysning mot plattan.

4

Inväxt i zon

• Om det finns enskilda kolonier i zonen, undersök om det

är en kontamination och gör om resistensbestämningen

vid behov.

• Om det inte är en kontamination, ta hänsyn till kolonier i

zon vid avläsning.

6 mm

Avläsning vid inväxt i zon.

eller 6 mm

5

Inväxt i zon

• Om det finns enskilda kolonier i zonen, undersök om det

är en kontamination och gör om resistensbestämningen

vid behov.

• Om det inte är en kontamination, ta hänsyn till kolonier i

zon vid avläsning.

Avläsning vid inväxt i zon.

6 mm 6 mm

E. coli med

ESBL

H. Influenzae med

PBP-mutationer

6

Svärmning

• För Proteus spp., bortse från svärmning och läs

zonen där växten slutar.

7

Dubbla zoner

• Kontrollera renhet och upprepa resistensbestämningen

vid behov.

• Om inväxten inte är en kontamination, mät den inre

zonen.

Avläsning vid förekomst av dubbla zoner.

8

Otydliga zonkanter Enterobacteriaceae

• Håll plattan mot en mörk bakgrund på ca 30 cm avstånd

och skapa en bild av var zongränsen går. Ta hänsyn till

det som ser ut som växt vid första anblicken, utan att

hålla upp plattan mot ljuset eller använda förstoringsglas.

Avläsning av otydliga zonkanter för Enterobacteriaceae. 9

Otydliga zonkanter Stafylokocker

Avläsning av otydliga zonkanter för stafylokocker.

• Håll plattan mot en mörk bakgrund på ca 30 cm avstånd

och skapa en bild av var zongränsen går. Ta hänsyn till

det som ser ut som växt vid första anblicken, utan att

hålla upp plattan mot ljuset eller använda förstoringsglas.

10

• Ta hänsyn till inväxt av små kolonier som är synliga

med blotta ögat när plattan hålls på ca 30 cm avstånd.

• Förekomst av små kolonier i zonkanten kan bero på

fuktiga MH-F plattor, och kan i vissa fall minskas genom

torkning av plattorna före inokulering.

Otydliga zonkanter S. pneumoniae

11

Växt eller hemolys?

• Läs zonen där växten slutar och inte där hemolysen

slutar.

• Ibland kan det vara svårt att skilja hemolys från växt.

– β-Hemolysiner diffunderar ut i agarn. β-hemolys är därför

ofta fri från växt.

– α-Hemolysiner diffunderar inte ut i agarn. Det är ofta växt i

områden med α-hemolys.

– Zoner med α-hemolys ses vanligen med pneumokocker

och β-laktamantibiotika.

12

β-hemolys

• Vicka på plattan för att se skillnad på växt och hemolys.

β-hemolys är ofta fri från växt.

S. pyogenes Streptococcus grupp C 13

α-hemolys • Vicka på plattan för att se skillnad på växt och hemolys.

Det är ofta växt i hela området

med α-hemolys.

För vissa organismer syns

ytterligare α-hemolys utan växt.

Vicka på plattan för att skilja

mellan växt och hemolys!

14

Särskilda

avläsningsinstruktioner • Trimetoprim och trimetoprim-sulfametoxazol allmänt

• Stenotrophomonas maltophilia och trimetoprim-

sulfametoxazol

• Enterobacteriaceae och ampicillin, ampicillin-sulbaktam

samt amoxicillin-klavulansyra

• E. coli och mecillinam

• E. coli och fosfomycin

• Enterokocker och vankomycin

• S. aureus och bensylpenicillin

• Detektion av inducerbar klindamycinresistens hos

stafylokocker och streptokocker

15

Trimetoprim och trimetoprim-

sulfametoxazol

• Följ instruktionerna för avläsning och mät den inre zonen

då dubbla zoner förekommer.

• Bortse från en tunn hinna av växt in till lappen i en i övrigt

tydlig zon.

Moraxella Haemophilus E. coli KNS 16

Tjock växt in till

lappen = Resistent

Stenotrophomonas maltophilia och

trimetoprim-sulfametoxazol

• Bortse från inväxt i zonen om en yttre zon kan urskiljas

och rapportera isolatet som känsligt om zonen är ≥ S-

brytpunkten. Observera att det kan vara kraftig inväxt i

zonen.

Om en yttre zon kan urskiljas, mät den yttre zonen.

= Känslig om zonen ≥ 16 mm

6 mm

17

Enterobacteriaceae och ampicillin,

ampicillin-sulbaktam samt amoxicillin-

klavulansyra

• Bortse från tunn inväxt i form av en inre zon som kan

förekomma med viss Mueller Hintonagar. Den inre

zonen förekommer inte med vissa batcher av agar och

när yttre zonen läses ses ingen skillnad mellan batcher.

18

E. coli och mecillinam

• Bortse från isolerade kolonier i zonen.

6 mm

19

E. coli och fosfomycin

• Bortse från isolerade kolonier i zonen och läs den yttre

zonen.

20

6 mm

Enterokocker och vankomycin

• Håll upp plattan mot ljuset och undersök zonen.

– Otydlig zonkant och kolonier i zonen indikerar

vankomycinresistens. Om zonen är ≥ 12 mm och

zonkanten är otydlig, utför konfirmatoriska tester.

21

E. faecalis

Ej VRE

E. faecium

VRE

S. aureus och bensylpenicillin

• Håll upp plattan mot ljuset och undersök zonkanten.

– För att detektera penicillinasproduktion hos stafylokocker

krävs att zondiametern mäts OCH att zonkanten

undersöks noggrant.

S. aureus med

skarp zonkant och

zondiameter ≥ 26 mm

= Resistent

S. aureus med

otydlig zonkant och

zondiameter ≥ 26 mm

= Känslig 22

Detektion av inducerbar

klindamycinresistens hos stafylokocker

• Inducerbar klindamycinresistens kan detekteras genom

antagonism mellan klindamycin och en makrolid.

• Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med 12-20

mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell

antagonism (D-fenomen).

23 Exempel på D-fenomen hos stafylokocker.

• Inducerbar klindamycinresistens kan detekteras genom

antagonism mellan klindamycin och en makrolid.

• Placera erytromycin- och klindamycinlapparna med 12-16

mm mellanrum (kant till kant) för att upptäcka eventuell

antagonism (D-fenomen).

24 Exempel på D-fenomen hos streptokocker.

Detektion av inducerbar

klindamycinresistens hos streptokocker