Cromatografia Líquida de Alta

Eficiência – CLAE (HPLC)

Cromatografia: ClassificaçãoCromatografia: Classificação

Forma física do suporte

•Cromatografia planar: CP e CCD

•Cromatografia em coluna CG e CL• -diâmetro interno do tubo(preparativa/ analítica)• -estado físico da F.M.(gas/líquido/supercrítico)• -tipo de coluna (aberta/fechada)• -fase estacionária (líquido/sólido)

•2.Mecanismo de separação (processos físico-químicos ou mecânico)

•3.Polaridade das fases utilizadas

Mecanismos

de separação

Fase Normal• Pouco utilizado;

• É recomendado para compostos apolares;

• FM é apolar. Mistura de Hexano com outros solventes

mais polares;

• FE é polar, sílica pura ou ainda sílica modificada com

aminopropano, diol ou ciano;

• Compostos mais polares tendem a ficar mais retidos na

coluna;

• Mecanismo de separação: interação por ligações de

hidrogênio e interações do tipo dipolo-dipolo.

Estrutura inorgânica da sílica

Separação Cromatográfica em Fase Normal

• Modo de separação mais utilizado;• Fase móvel mistura de solvente orgânico com

água;• Geralmente utiliza-se MeOH, ACN e THF;• FE é apolar, ou seja hidrofóbica. Silicas

modificadas com grupos octil ou octadecil;• Também pode-se utilizar polímeros orgânicos;• Mecanismo de separação: compostos

hidrofóbicos tendem a ficar retidos.

Fase Reversa

Sílicas ModificadasTipo C8 e C18

Separação Cromatográfica em Fase Reversa

Cromatógrafo Líquido

Colunas• Tipos: depende do mecanismo de separação

• Tamanhos Variados

• Números de Pratos Teóricos:– É indicativo da eficiência da coluna;– Expresso por coluna ou por metro;

(Picos com formato Gaussiano)

Colunas• Resolução

• Fator de Cauda/Assimetria (T)

Detectores

• Detector Uv-Vis;

• Detector de Fluorescência;

• Detector de arranjo de diodos;

• Detector de Índice de Refração;

• Detectores eletroquímicos;

• Detectores de espalhamento de luz.

• Detector de arranjo de diodos (DAD/PDA):

• Detector de Índice de Refração

• Detectores de espalhamento de luz

Responde para qualquer substância desde que seja

menos volátil que a fase móvel

CG x LC