astaxanthin from yeast affect on increasing the red color rate of male guppy

สาร สาร astaxanthin astaxanthin จากจากยี�สต์มี�ผลต์�อการเร�งส�แดงยี�สต์มี�ผลต์�อการเร�งส�แดงของปลาหางนกยี�งเพศผ��ของปลาหางนกยี�งเพศผ��

นายชลรวี� หาญล�ายวีงนายชลรวี� หาญล�ายวีงนายวีงศกร เหมพั�นธ์�นายวีงศกร เหมพั�นธ์�นายอธ์�ษฐ์� ช�ตวีรากรนายอธ์�ษฐ์� ช�ตวีรากร

โรงเร�ยนมห�ดลวี�ทยาน�สรณ์�โรงเร�ยนมห�ดลวี�ทยาน�สรณ์�

อาจารยีที่��ปร�กษาในการอาจารยีที่��ปร�กษาในการที่!าโครงงานที่!าโครงงาน

อาจารย�ท�"ปร$กษา อาจารย�ท�"ปร$กษา : : อาจารย�อาร�ย� ส�กย�%มอาจารย�อาร�ย� ส�กย�%ม

ท�"มาและควีามส�าค�ญท�"มาและควีามส�าค�ญ ปลาหางนกย)งปลาหางนกย)ง

ช*"อทางวี�ทยาศาสตร� : Poecilia reticulata

ปลาต�วีผู้),ม�ขนาด 3 -5 เซนต�เมตร Family : Poecidae

ที่��มีาและความีส!าค&ญ ที่��มีาและความีส!าค&ญ ((ต์�อต์�อ))

ส�ส�นของปลาส�ส�นของปลา

Phaffia rhodozymaPhaffia rhodozyma

ที่��มีาและความีส!าค&ญ ที่��มีาและความีส!าค&ญ((ต์�อต์�อ))

ท�"มาและควีามส�าค�ญ ท�"มาและควีามส�าค�ญ ((ต/อต/อ)) สาร สาร astaxanthinastaxanthin

ว&ต์ถุ)ประสงคว&ต์ถุ)ประสงค ศ$กษาสาร ศ$กษาสาร astaxanthin astaxanthin ในย�สต� ในย�สต� Phaffia Phaffia

rhodozymarhodozyma ม�ม�ผู้ลต/อการเร/งส�ในปลาหางนกย)งเพัศผู้),ผู้ลต/อการเร/งส�ในปลาหางนกย)งเพัศผู้),

อ)ปกรณ์และสารเคมี�อ)ปกรณ์และสารเคมี�ชื่,�อสารเคมี�ชื่,�อสารเคมี� บร.ษ&ที่ผ��ผล.ต์บร.ษ&ที่ผ��ผล.ต์GlucoseGlucoseชื่,�ออ)ปกรณ์ชื่,�ออ)ปกรณ์ บร.ษ&ที่ผ��ผล.ต์บร.ษ&ที่ผ��ผล.ต์ขวีดเล�%ยงเซลล�ขนาด ขวีดเล�%ยงเซลล�ขนาด 250 250 ม�ลล�ล�ตรม�ลล�ล�ตร

™NUNCLON ™NUNCLON DDDDDDDDDD DDDDDD DDDDDDD DDDDDD(250 ) DDDDDD DDDDDDD DDDDDD(250 )

หลอดป2" นเหวี�"ยงขนาด หลอดป2" นเหวี�"ยงขนาด 1010 ม�ลล�ล�ตรม�ลล�ล�ตร ® ... ® ... (Oak Ridge Centrifuge tube (Oak Ridge Centrifuge tube11 0ml) 0ml)

อาหารปลาอาหารปลา ไฮเกรดไฮเกรด

อ)ปกรณ์และสารเคมี� อ)ปกรณ์และสารเคมี� ((ต์�อต์�อ))ชื่น.ดเคร,�องมี,อชื่น.ดเคร,�องมี,อ บร.ษ&ที่ผ��ผล.ต์บร.ษ&ที่ผ��ผล.ต์กล,องถ่/ายภาพัด�จ�ตอลจากม*อถ่*อกล,องถ่/ายภาพัด�จ�ตอลจากม*อถ่*อ NOKIANOKIA(Nokia N70)(Nokia N70)เคร*"องน$"งควีามด�นฆ่/าเช*%อจ�ลเช*%อจ�ลล�นทร�ย�เคร*"องน$"งควีามด�นฆ่/าเช*%อจ�ลเช*%อจ�ลล�นทร�ย� HIRAYAMA, HIRAYAMA,

JAPANJAPAN (Autoclave)(Autoclave)เคร*"องป2" นเหวี�"ยงเคร*"องป2" นเหวี�"ยง CECILCECIL(C(Centrifugeentrifuge)) ต),ปลอดเช*%อต),ปลอดเช*%อ SCIENCETECH COMPANYSCIENCETECH COMPANY(Incubator)(Incubator)Incubator ShakerIncubator Shaker PANAPOLY TECHPANAPOLY TECH

ว.ธี�ที่!าการที่ดลองว.ธี�ที่!าการที่ดลอง การเพัาะเล�%ยงย�สต� การเพัาะเล�%ยงย�สต� Phaffia Phaffia rhodozymarhodozyma ท�าอาหารเล�%ยงเช*%อส)ตร PDB

น�าย�สต�ปร�มาณ์ 1 ม�ลล�ล�ตร ไปเล�%ยงในขวีดร)ปชมพั) /ขนาด 250 ม�ลล�ล�ตร ซ$"งม�ประมาณ์อาหารเล�%ยงเช*%อส)ตรPDB อย)/

150 ม�ลล�ล�ตร

ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ((ต์�อต์�อ))

น�าไปเพัาะเล�%ยงใน SHAKER ควีามเร8วี 150 รอบต/อนาท� อ�ณ์หภ)ม�ไวี,ท�" 30

องศาเซลเซ�ยส เป:นเวีลา 7 วี�น

ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ((ต์�อต์�อ)) การการสก�ดย�สต�สก�ดย�สต�

น�าย�สต�ท�"อย)/ในอาหารเล�%ยงเช*%อส)ตร PDBใส/หลอดป2" นเหวี�"ยง 10 ม�ลล�ล�ตร

น�าไปป2" นเหวี�"ยงด,วียควีามเร8วี 3000 รอบต/อนาท� เป:นเวีลา 15 นาท� แล,วีร�นอาหาร

เล�%ยงเช*%อท�%ง

น�าสารละลายย�สต�ท�"ได,ไปป2" นเหวี�"ยงด,วียควีามเร8วี 3000 รอบต/อนาท� เป:นเวีลา

15 นาท� ร�นเก8บเฉพัาะส/วีนท�"เป:นย�สต� จนได,ย�สต�ปร�มาณ์ตามท�"ต,องการ

ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ((ต์�อต์�อ)) การผู้ล�ตอาหารซ$"งม�ส/วีนผู้สมของ การผู้ล�ตอาหารซ$"งม�ส/วีนผู้สมของ

astaxanthin astaxanthin น�าอาหารปลาส�าเร8จร)ปชน�ดเม8ดเล8ก มาคล�กก�บสารละลาย ย�สต� ปร�มาณ์ 50, 100 และ 200 ม�ลล�กร�มต/อก�โลกร�ม

น�าไปอบแห,งด,วียเตาอบ อ�ณ์หภ)ม� 60 องศาเซลเซ�ยส เป:นเวีลา 24 ช�"วีโมง เก8บ

ไวี,ในท�"อ�ณ์หภ)ม�ห,อง แห,ง และม*ด

ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ((ต์�อต์�อ)) การเล�%ยงปลาหางนกย)งการเล�%ยงปลาหางนกย)ง

เล�%ยงปลาหางนกย)งจ�านวีน 180 ต�วีท�"ม�ส�ใกล,เค�ยงก�น ในถ่�งเล�%ยงจ�านวีน 12 ถ่�ง แต/ละบ/อจะม�ปลาจ�านวีนบ/อละ 15 ต�วี

ก�าหนดบ/อท�" 1 เป:นบ/อควีบค�ม บ/อท�" 2, 3 และ 4 ให,อาหารท�"ม�ส/วีนผู้สมของ astaxanthin 50, 100 และ 200

ม�ลล�กร�มต/อก�โลกร�มตามล�าด�บ จ�านวีน 3 ซ�%า เป:นระยะเวีลา 21 วี�น

ท�าการบ�นท$กผู้ลของส�ปลาหางนกย)งท�กๆ 7 วี�น

ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ((ต์�อต์�อ)) การบ�นท$กส�การบ�นท$กส�

บ�นท$กภาพัปลาหางนกย)งท�ละต�วี เพั*"อน�าไปวี�เคราะห�ส�โดยใช,โปรแกรม MVH PC

image V.8

น�าค/า %R, %G และ%B มาเปล�"ยนเป:นค/า R G B เพั*"อเข,าส)ตรค�านวีณ์ค/าเบ�"ยงเบนส�แดง ER2G2B22

วี�เคราะห�ค/า E วี/าม�ค/าเบ�"ยงเบนไปจากส�แดง R 255 G0 B0 เท/าไร

ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ว.ธี�ที่!าการที่ดลอง ((ต์�อต์�อ)) การบ�นท$กส�การบ�นท$กส� วี�ธ์�การค�านวีณ์หาค/าเบ�"ยงเบนจากส�แดง วี�ธ์�การค�านวีณ์หาค/าเบ�"ยงเบนจากส�แดง ((E)) จากสมการ จากสมการ ER2G2B22

R = (R สาร – R standard) R สาร = %R x 255

G = (G สาร – G standard) G สาร = %G x 255

B = (B สาร – B standard) B สาร = %B x 255

R standard = R ของส�แดง = 255

G standard = G ของส�แดง = 0

B standard = B ของส�แดง = 0

ผลการที่ดลองผลการที่ดลองผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งช�ดควีบค�ม ช�ดควีบค�ม (( ไม/ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� ไม/ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� Phaffia Phaffia

rhodozymarhodozyma ))อ�ตราการตาย อ�ตราการตาย 0.33 0.33 ต�วีต/อวี�นต�วีต/อวี�น


rhodozymarhodozyma ))

วี�นท�" 1

ผลการที่ดลองผลการที่ดลองผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งช�ดท�" ช�ดท�" 11(( ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� Phaffia Phaffia

rhodozymarhodozyma 50 50 ม�ลล�กร�มต/อก�โลกร�มม�ลล�กร�มต/อก�โลกร�ม))

อ�ตราการตาย อ�ตราการตาย 0.43 0.43 ต�วีต/อวี�นต�วีต/อวี�น

ผลการที่ดลองผลการที่ดลองผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งช�ดท�"ช�ดท�" 2 2 (( ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� Phaffia Phaffia


อ�ตราการตาย อ�ตราการตาย 0.57 0.57 ต�วีต/อวี�นต�วีต/อวี�น

ผลการที่ดลองผลการที่ดลองผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งช�ดท�" ช�ดท�" 33 (( ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� Phaffia Phaffia


อ�ตราการตาย อ�ตราการตาย 3 3 ต�วีต/อวี�นต�วีต/อวี�น

ผลการที่ดลองผลการที่ดลองผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งผู้ลการวี�ดควีามเข,มส�ของปลาหางยกย)งช�ดท�" ช�ดท�" 33 (( ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� ม�ส/วีนผู้สมของย�สต� Phaffia rhodozymaPhaffia rhodozyma

200 200 ม�ลล�กร�มต/อก�โลกร�มม�ลล�กร�มต/อก�โลกร�ม))


ผลการที่ดลองผลการที่ดลอง ผู้ลการวี�ดค/าควีามเบ�"ยงเบนจากส�แดง ผู้ลการวี�ดค/าควีามเบ�"ยงเบนจากส�แดง ((E ) ) จากจาก

ตารางเปร�ยบเท�ยบค/าเบ�"ยงเบนของส�ปลาหางนกตารางเปร�ยบเท�ยบค/าเบ�"ยงเบนของส�ปลาหางนกย)งท�%ง ย)งท�%ง 4 4 คร�%งของ คร�%งของ 4 4 ช�ดการทดลองช�ดการทดลอง

ตารางเปร�ยบเท�ยบค/าเบ�"ยงเบนของส�ปลาหางนกย)งท�%ง 4 คร�%งของ 4 ช�ดการทดลอง

ผลการที่ดลอง ผลการที่ดลอง กราฟเปร�ยบเท�ยบค/า กราฟเปร�ยบเท�ยบค/า E ของช�ดควีบค�ม ช�ดท�" ของช�ดควีบค�ม ช�ดท�" 1 1

และ และ 22 ท�%ง ท�%ง 4 4 คร�%งคร�%ง

160

165

170

175

180

185

1st Qtr 2nd Qtr 3rd Qtr 4th Qtr

ควบค)มี ชื่) ดที่�� 1

ชื่) ดที่�� 2

กราฟ แสดงค�าการเปล��ยีนแปลงของค�าเบ��ยีงเบนแต์�ละชื่)ดการที่ดลองในคร&1งที่�� 1, 2, 3 และ

4

สร)ปและว.เคราะหผลการที่ดลองสร)ปและว.เคราะหผลการที่ดลอง สาร สาร astaxanthin astaxanthin สามารถ่เร/งส�แดงปลาหางสามารถ่เร/งส�แดงปลาหาง

นกย)งเพัศผู้),ได, โดยควีามเข,มข,น โดยสาร นกย)งเพัศผู้),ได, โดยควีามเข,มข,น โดยสาร astaxanthin astaxanthin ท�"มากข$%นจะสามารถ่เร/งส�แดงได,ด�ท�"มากข$%นจะสามารถ่เร/งส�แดงได,ด�ข$%นข$%น

เอกสารอ�างอ.งเอกสารอ�างอ.งการใชื่�สารแอสต์าแซนที่.นจากยี�สต์ Phaffia rhodozyma ก&บก)�งก)ลาด!า Penaeus monodon

Fabricius. [ออนไลน�]. ได,จาก http://shrimpbase.fish.ku.ac.th/display_abs_t.php?id=176ส�ดสายชล หอมทอง. 2541. การผล.ต์ Astaxanthin จากสาหร�ายี Haematococus sp.

ปร�ญญา วี�ทยาศาสตร� มหาบ�ญฑิ�ต (จ�ลช�วีวี�ทยา) สาขาจ�ลช�วีวี�ทยา ภาควี�ชา จ�ลช�วีวี�ทยา มหาวี�ทยาล�ยเกษตรศาสตร�สภาวะที่��เหมีาะสมีในการผล.ต์ Astaxanthin ของยี�สต์ Phaffia Rhodozyma [ออนไลน�]. ได,จาก

http://www.kmutt.ac.th/rippc/biomass.htmผลการที่บของแหล�งแสงที่��มี�ผลต์�อการผล.ต์แอสต์าแซนที่.นโดยีใชื่� Phaffia rhodozyma [ออนไลน�].

ได,จาก http://www.scisoc.or.th/stt/33/sec_b/paper/stt33_B4_B0019.pdfEffect of Feeding Methods on the Astaxanthin Production by in fed-batch Process Phaffia

Rhodozyma [On-line]. Available: http://www.scielo.br/pdf/babt/v48n3/24762.pdf

เอกสารอ�างอ.ง เอกสารอ�างอ.ง ((ต์�อต์�อ))Andrewes et al.1976. (3R,3’R)-Astaxanthin From The Yeast Phaffia rhodozyma,

Phytochemistry 15:1009-1011Gio-Bin Lim, Sang-Yun Lee, Eun-Kyu Lee, Seung-Joo Haam and Woo-Sik Kim. (2002).

Separation of Astaxanthin from red yeast Phaffia Rhodozyma by supereritical carbon dioxide extraction. Biochemical Engineering Journal, 11: 181-187.Guppy [On-line]. Available: http://www.petco.com/caresheets/fish/Guppy.pdfVerlhac V,N’Doye A, Gabaudan J, Troutaud D, Deschaux P. 1991. Vitamin nutrition and fish

immunity: influence of antioxidant vitamins (C and E) on immune response of rainbow trout. En Kaushik SJ, Luquet P (Eds.) Fish Nutrition in Practic. INRA. Paris, Francia. pp. 167-177EricA.Johnson. Phaffia rhodozyma : colorful odyssey. Microbiol(2003) 6:169-174.

astaxanthin from yeast affect on increasing the red color rate of male guppy

Lifestyle

phaffia rhodozyma

phaffia rhodozyma

phaffia rhodozyma

phaffia rhodozyma

astaxanthin

standard

http

line