artículo trichoderma ssmp
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BIOCONTROL DE Fusarium spp. EN EL CULTIVO DE TOMATE DE MESA CON Trichoderma spp.
BIOCONTROL OF Fusarium spp. ON TOMATO WITH Trichoderma spp.
Sarango Flores Stalin1, Palta Zhanay María2, Solano Castillo Tulio3*, Espinosa González Oswaldo4
Resumen
Se seleccionaron tres aislamientos de Trichoderma spp.: LC2, SB1 y ET2, provenientes de la parroquia El
Tambo, cantón Catamayo, provincia Loja. Entre las concentraciones de Trichoderma spp. (9 × 105, 106, 108 y 2 × 108
conidios/ml) probadas en cultivos duales con Fusarium spp. no hubo diferencias significativas. En plantas de tomate
en macetas, los tratamientos: C-TY1 DE (151,03 g de follaje) y LC2 SD (11,80 g de raíz) registraron los valores más
altos de peso seco con respecto al Testigo (follaje: 63,13 g; raíces: 4,60 g). Los tratamientos: MA DE, TB DE, LC2 DE,
SB1 DE y MA SD, alcanzaron 100 % de germinación en macetas; en semilleros, se destacó el tratamiento MA (91,84
%). La incidencia de Fusarium spp., no tuvo diferencias significativas entre tratamientos, tanto en macetas como en
campo abierto; sin embargo, en macetas los tratamientos: LC2 DE y MA SD tuvieron 25 % de incidencia; y, en
campo abierto, los tratamientos ET2 y MC alcanzaron 57,14 y 53,57 %, respectivamente. El porcentaje de
mortalidad de plantas entre los tratamientos a base de Trichoderma spp., Tricobiol y Benomil, en condiciones de
campo, no tuvieron diferencias significativas, pero el tratamiento C-TM4 registró el más bajo de 13,39 %; Tricobiol
obtuvo 20,54 % y Benomil 17,86 %. La producción de frutos más alta la obtuvo el tratamiento C-TM4 (113,08
kg/parcela); entre los tratamientos Tricobiol y Benomil no existió diferencias significativas.
Palabras clave: biocontrol, concentraciones, Trichoderma spp., Fusarium spp., tomate.
Abstract
There were selected three isolates of Trichoderma spp.: LC2, SB1 and ET2 from El Tambo town, Loja
province, Ecuador. Among Trichoderma spp. concentrations (9 × 105, 106, 108 and 2 × 108 conidia/ml) tested in dual
cultures with Fusarium spp. there was not significant differences. In tomato on plantpots, the treatments: C-TY1 DE
(151,03 g of foliage) and LC2 SD (11,80 g of root) registered values higher respect to control treatment (foliage:
63,13 g; roots: 4,60 g). The treatments: MA DE, TB DE, LC2 DE, SB1 DE and MA SD, reached 100 % in plantpots and
in germination trays, MA treatment got 91,84 %. Fusarium spp. incidence, did not get significant differences among
treatments both plantpots and field conditions. However, in plantplots the treatments: LC2 DE and MA registered
25 % of incidence; and in field conditions, treatments ET2 and MC reached 57,14 and 53,57 %, respectively. Plants
mortality percent among treatments based on Trichoderma spp., Tricobiol and Benomil, in field conditions, there
were not significant differences, but treatment C-TM4 registered lower value (13,39 %); Tricobiol got 20,54 % and
Benomil 17,86 %. Fruits production of C-TM4 treatment registered higher value (113,08 kg/plot); between Tricobiol
and Benomil treatments there was not significant differences.
Key words: biocontrol, concentrations, Trichoderma spp., Fusarium spp., tomato.
1 Tesista investigador Universidad Nacional de Loja (UNL) [email protected] 2 Tesista investigadora Universidad Nacional de Loja (UNL) [email protected] 3 Coordinación de Investigaciones del Área Agropecuaria y de Recursos Naturales Renovables, UNL, ciudad Guillermo Falconí, Loja, ECUADOR [email protected] 4 Laboratorio de Sanidad Vegetal, UNL, ciudad Guillermo Falconí, Loja, ECUADOR
* Autor para correspondencia.
2
Introducción
Los marchitamientos vasculares y pudriciones
radiculares causados por Fusarium spp., son
enfermedades de mayor incidencia en el tomate
Solanum lycopersicum L. (Blancard 1990, Nuez
2001). El control biológico es una alternativa al
control químico; sin embargo, su aplicación a los
patógenos del suelo no ha trascendido de los
laboratorios e invernaderos de investigación y
experimentación, a pesar de que la mayoría de
antagonistas provienen del suelo, lo cual
garantiza su sobrevivencia en este medio
(Solano 1994).
El hongo Trichoderma spp., es un agente
biocontrolador de hongos patógenos como:
Fusarium spp., Rhizoctonia spp., Pythium spp.,
Sclerotium spp., Sclerotinia spp., Phythophthora
spp. en cultivos hortícolas y ornamentales;
además incrementa el crecimiento y desarrollo
de varios cultivos por el complejo enzimático
que se origina en la rizósfera de las plantas
(Rincón et al. 1992, Pérez 2001, Cupull et al.
2003).
En el mercado existen productos a base de
Trichoderma spp.; no obstante, el uso de cepas
comerciales presenta dificultades con su
persistencia en el suelo. Por ello, se debe
considerar aislamientos nativos que están mejor
adaptados a las condiciones edafoclimáticas de
la zona; es recomendable usar mezclas de cepas
antagonistas, a fin de controlar la acción de las
poblaciones patogénicas (González et al. 1999b,
Universidad del Zulia 2001, Infante et al. 2009).
En general, son conocidos cuatro mecanismos
de acción de Trichoderma spp.: La antibiosis,
consiste en la producción y liberación de
metabolitos específicos y no específicos o
antibióticos (Molina 2006, Kaewchai et al.
2009). Trichoderma spp. produce sustancias
antifungosas y antibacteriales como: 6-pentil-α-
pirona (6-PAP), trichordermina, dermadina,
suzukacilina, alameticina, trichotoxina,
acetaldehído, viridina, viridiol, gliovirina,
gliotoxina y ácido heptelídico; así como las
enzimas β-1,3 glucanasa, quitinasa y celulasa;
éstas facilitan la habilidad del antagonista para
atacar las paredes celulares de un amplio rango
de patógenos (Deacon 2006, Molina 2006).
La competencia de Trichoderma spp. puede
dividirse en: competencia saprófita por
nutrientes en el suelo y la rizósfera; y,
competencia por sitios de infección en la raíz
(colonización de la rizosfera) (Kaewchai 2009).
El micoparasitismo incluye las siguientes etapas:
1) el crecimiento quimiotrófico del antagonista
hacia el hospedero; 2) reconocimiento del
hospedero por el micoparásito; 3) adhesión; 4)
excreción de enzimas extracelulares; 5) lisis y
beneficio del hospedero (Fernández-Larrea
2001, Kaewchai 2009, Infante et al. 2009,
Omann y Zeilinger 2010).
La inducción de resistencia a las plantas por
Trichoderma spp., puede ser el resultado de un
incremento de la concentración de metabolitos
y enzimas relacionadas con los mecanismos de
defensa como fenil-alanina amonio-liasa (PAL) y
sintasa chalcona (CHS), las cuales están
implicadas en la biosíntesis de fitoalexinas,
quitinasas y glucanasas, que inhiben el
desarrollo de patógenos (Bourguignon 2008,
Kaewchai 2009, Morales 2009).
La presente investigación se orientó a conocer la
eficacia del control biológico de Fusarium spp.
en tomate con aislamientos y cepas nativas de
Trichoderma spp. en condiciones de laboratorio,
semicontroladas y campo abierto. De los
resultados obtenidos se puede inferir que la
cepa C-TM4, los aislamientos: SB1 y ET2, la
3
mezcla de cepas y la mezcla aislamientos de
Trichoderma spp., pueden ser utilizados como
estrategia de control de Fusarium spp.
Materiales y Métodos
Aislamiento de Trichoderma spp.
Se aisló Trichoderma spp. de muestras de suelo
de la rizosfera de tomate provenientes de los
sectores del cantón Catamayo: San Francisco, El
Tambo, La Capilla, San Bernabé y La Era; y, de la
parroquia Taquil del cantón Loja. Se hizo una
suspensión homogénea con 2 g de suelo de cada
muestra en 200 ml de agua destilada estéril, de
la cual se tomó 2 ml y se mezcló con 20 ml de
medio de cultivo PDA en caja petri, de esta
mezcla se obtuvo entre 15 a 20 discos de 9 mm
de diámetro, que se colocaron sobre medio PDA
en otra caja petri y se incubó a 25 ± 1 °C hasta
obtener crecimiento de las colonias de
Trichoderma spp. La identificación de
Trichoderma spp. se realizó en base a las
características culturales y morfológicas macro y
microscópicas, mediante las claves taxonómicas
de Barnett (1960) y de Rifai (1969), citada por
Ludeña y Regalado (2004).
Aislamiento de Fusarium spp.
Se sembró en medio de cultivo PDA, entre tres y
cuatro segmentos de tejidos de raíces y cuello
de tomate de 0,05 cm2, desinfectados en una
solución de alcohol y luego en hipoclorito de
Sodio; se incubó a 25 ± 1 °C hasta observar
crecimiento de colonias. La identificación de
Fusarium spp. se hizo con la utilización de la
clave taxonómica de Leslie et al. (2006)
mediante la caracterización de colonias y
observaciones microscópicas.
Las pruebas de patogenicidad de Fusarium spp.,
se realizaron en plantas de tomate de uno y dos
meses de edad; en las cuales se inyectó en dos
hojas desarrolladas y en el cuello 0,2 ml de una
suspensión conidial de Fusarium spp. (107
conidios/ml) de cada aislamiento encontrado,
además se inoculó el sustrato con 100 ml de la
suspensión. Se hicieron observaciones de
síntomas durante 7 d a partir de la inoculación.
Al séptimo día se realizaron observaciones en
las raíces y se hizo un reaislamiento.
Selección de aislamientos de Trichoderma spp.
Se hicieron cultivos duales en cajas petri usando
discos de 9 mm de diámetro de cada uno de los
aislamientos de Trichoderma spp. frente a un
disco de 9 mm de Fusarium spp. ubicado a
aproximadamente 50 mm. Se incubó a 25 ± 1 °C.
Se midió el crecimiento radial diario de
Trichoderma con una regla milimetrada durante
7 días; se evaluó la clase de antagonismo
mediante la clave de Bell et al. (1982) (Cuadro 1)
y, se determinó el tipo de parasitismo mediante
la clave de Rivas (1994) (Cuadro 2). Se utilizó un
diseño completamente aleatorizado con 13
tratamientos y cinco repeticiones. La unidad
experimental estuvo constituida por cada
cultivo dual en caja petri.
Cuadro 1. Escala de antagonismo en cultivos duales, según
Bell et al. (1982), citada por Pérez (2001).
Clase Nominación
1 Trichoderma spp. crece completamente sobre la colonia
del patógeno y cubre la superficie del medio de cultivo.
2 Trichoderma spp. crece al menos sobre las dos terceras
partes de la superficie del medio de cultivo.
3
Trichoderma spp. y el patógeno cubren
aproximadamente la mitad de la superficie del medio de
cultivo.
4
El patógeno crece al menos en las dos terceras partes
del medio de cultivo limitando el crecimiento de
Trichoderma spp.
5 El patógeno crece sobre la colonia de Trichoderma spp.
ocupando toda la superficie del medio de cultivo.
4
Cuadro 2. Clave de identificación visual (reacción
antagonista-patógeno) del tipo de parasitismo (Rivas 1994,
citado por Ludeña y Regalado 2004).
Tipo Determinante
A Las hifas de los dos hongos forman un relieve en la zona
de contacto (antagonismo físico).
B Las hifas dan origen al fenómeno de lisis en la zona de
contacto (antagonismo químico).
C
Las hifas del antagonista recubren las del patógeno
entrelazando o entrecruzándose con éstos y ocupando
el espacio vital (antagonismo hiperparasitario).
D
Las hifas de los dos hongos no alcanzan a tomar
contacto, dando origen a un espacio vacío (antagonismo
físico-químico).
E Las hifas de los hongos dan origen a comportamientos
variables (antagonismo variable).
Pruebas de antagonismo in vitro de
Trichoderma spp. en varias concentraciones
Se prepararon suspensiones conidiales de las
cepas del Laboratorio de Sanidad Vegetal de la
Universidad Nacional de Loja UNL (2004): C-TM4
(T. harzianum) y C-TY1 (T. koningii); un
aislamiento de Trichoderma sp. de
AGROCALIDAD-Loja (AC); y, los tres mejores
aislamientos seleccionados: LC2, SB1 y ET2. Las
concentraciones probadas fueron: 2 × 108; 108;
106; 9 × 105 conidios/ml en cultivos duales con
Fusarium spp. (2 × 108 conidios/ml).
La suspensión conidial, tanto de Trichoderma
como de Fusarium, se preparó mediante lavado
de inóculo con agua destilada estéril, mezclada
con 0,2 ml de dispersante Tween 80. De esa
suspensión, se tomó una muestra y se utilizó la
cámara de Neubauer para realizar el conteo de
conidios y calcular la concentración mediante la
ecuación presentada por French y Hebert
(1982): con/ml = suma 8 cs × 31 250. Donde:
con/ml: concentración conidios/ml; suma 8 cs:
sumatoria de ocho cuadrados secundarios (cs);
31 250: constante utilizada cuando se hace el
conteo de esporas en ocho cs.
Los cultivos duales estuvieron constituidos por
una gota de 0,02 ml de Trichoderma spp., por
cada tratamiento, equidistantemente a 50 mm
de una gota de 0,02 ml de Fusarium spp. sobre
medio PDA en caja petri.
Se midió el crecimiento radial diario de
Trichoderma spp. con una regla milimetrada por
7 d; la clase de antagonismo según la escala de
Bell et al. (1982) y, el tipo de parasitismo de
acuerdo a la clave de Rivas (1994). Se utilizó un
diseño experimental completamente al azar con
24 tratamientos y cuatro repeticiones dispuesto
en un esquema bifactorial 6 × 4 (Trichoderma
spp. × concentraciones). La unidad experimental
estuvo constituida por cada una de las cajas
petri que contenían los cultivos duales.
Pruebas de biocontrol de Fusarium spp. con
Trichoderma spp. en condiciones
semicontroladas
Se probaron los tres aislamientos seleccionados:
LC2, SB1 y ET2; las cepas del Lab. San. Vegetal-
UNL: C-TM4 (T. harzianum) y C-TY1 (T. koningii);
el aislamiento de Trichoderma sp. de
AGROCALIDAD-Loja (AC); mezcla de los tres
mejores aislamientos seleccionados (MA);
mezcla de cepas del Lab. San. Veg. UNL y
aislamiento AGROCALIDAD-Loja (MC); un testigo
comercial biológico (TB: Tricobiol); un testigo
químico: (Benomil); y, un Testigo absoluto. Se
probaron en sustrato desinfectado (DE) con
agua hirviendo (95 °C) y en sustrato sin
desinfectar (SD). Ambos sustratos fueron
inoculados con Fusarium spp. (5 × 107
conidios/ml), a razón de 20 ml por cada hoyo. Se
utilizó la concentración de Trichoderma spp. de
9 × 105 conidios/ml.
Se sembraron en forma directa cuatro semillas
de tomate var. Acerado en una maceta de 15 l
de capacidad con sustrato 1:1:2 (suelo agrícola:
arena de mina: humus); a los 20 d se dejó una
plántula por maceta. Las semillas de los
5
tratamientos a base de Trichoderma spp. fueron
remojadas por 10 min en la suspensión conidial
de los respectivos tratamientos y además se
colocó 20 ml de la suspensión conidial al suelo
por cada hoyo. Se aplicó 20 ml del producto
químico y del biológico en cada hoyo a la dosis
de 1 g de producto/l de agua.
Se realizó la evaluación de: porcentaje de
germinación a los 14 d después de la siembra; y
a los 98 d después de la siembra, se evaluó:
porcentaje de incidencia de Fusarium spp.
(amarillamiento de hojas bajeras); peso seco
foliar y peso seco radicular (g). Se utilizó un
diseño experimental completamente al azar con
20 tratamientos y cuatro repeticiones. La unidad
experimental estuvo constituida por cada
maceta que contenía una planta.
Pruebas de biocontrol de Fusarium spp. con
Trichoderma spp. en condiciones de campo
Se estableció un cultivo de tomate var. Acerado
en la parroquia El Tambo, cantón Catamayo,
sector La Loma vía a El Verdum. Se probaron los
aislamientos de Trichoderma spp.: SB1, LC2,
ET2, AC; las cepas: C-TM4 y C-TY1; el
aislamiento de AGROCALIDAD (AC); mezcla de
aislamientos (MA); mezcla de cepas y
aislamento AGROCALIDAD (MC); Tricobiol; y,
Benomil.
Se inoculó cada hoyo con 20 ml de Fusarium
spp. (107 conidios/ml) y se adicionó en el hoyo
de trasplante, aproximadamente 5 g del
sustrato de arroz en donde se masificó
Fusarium.
Se hizo un semillero en bandejas germinadoras
con sustrato desinfectado. Las semillas fueron
sumergidas, según el tratamiento respectivo, en
la suspensión conidial de Trichoderma spp. (9 ×
105 conidios/ml) y Tricobiol durante 10 min. En
el caso del Testigo y Benomil se las sumergió en
agua corriente. Luego de la siembra se adicionó
en cada celda, 2 ml de Trichoderma spp.,
Tricobiol y Benomil, según cada tratamiento. La
solución de Tricobiol y Benomil se preparó en
dosis de 1 g de producto/litro de agua.
Para trasplantar, se hizo una inmersión de las
plántulas durante 10 min en la suspensión
conidial de Trichoderma spp. (9 × 105
conidios/ml), de acuerdo a los respectivos
tratamientos; a las plántulas de los tratamientos
Benomil y Tricobiol, se hizo una inmersión en la
solución respectiva a la dosis de 1 g de
producto/l de agua. Luego del trasplante, se
aplicó en cada hoyo 20 ml de Trichoderma spp.,
Benomil y Tricobiol, según cada tratamiento.
A los 45 d después del trasplante, se aplicó
nuevamente Trichoderma spp., Tricobiol y
Benomil en una cantidad de 40 ml por cada
planta, cerca del cuello en la misma
concentración y dosis empleadas al trasplante.
Se evaluó la germinación a los 14 d después de
la siembra, incidencia de Fusarium spp.,
mortalidad de plantas y producción de frutos. Se
utilizó un diseño experimental en bloques al
azar con 11 tratamientos y cuatro réplicas. La
unidad experimental estuvo constituida por 28
plantas en una parcela de 15,48 m2.
En todos los ensayos, el análisis de varianza y la
separación de medias con la prueba de Duncan
al 5 % de significancia, se realizó con la
utilización del software MSTAT-C 2.10 y
Microsoft Office Excel 2007.
Resultados
Selección de aislamientos
Se capturó Trichoderma spp. en todas las
muestras de suelo, excepto en la muestra
6
número 1 del sitio San Francisco y en la muestra
2 del sitio San Bernabé, en las cuales se
encontró colonias correspondientes al género
Penicillium. Además se obtuvo dos aislamientos
de Trichoderma spp. de raíces de tomate de los
sectores San Francisco y La Era: 46 (SF3) y 5455
(LE1) (Figura 1).
Figura 1. Aislamientos de Trichoderma spp. capturados de
suelo y raíces de tomate procedentes de la parroquia El Tambo, cantón Catamayo.
Se aisló Fusarium spp. en dos de las muestras de
tomate del sector San Francisco (40 y 46) y en
una muestra del sector La Era (5455). Según las
características macro y microscópicas de las
colonias aisladas y su posterior comparación con
la clave taxonómica de Leslie et al. (2006), se
determinó F. oxysporum en los casos: 40 y 5455;
y, F. solani en el caso 46 (Figura 2). Estos
aislamientos dieron resultados positivos en las
pruebas de patogenicidad realizadas.
Se seleccionaron los aislamientos LC2 (0,844
cm/d), SB1 (0,841 cm/d) y ET2 (0,836 cm/d), por
registrar los valores más altos de crecimiento
radial diario, antagonismo Clase 2 (cubrimiento
mayor a 75 % del medio de cultivo) y
parasitismo Tipo C (hiperparasitismo) (Figura 3).
Figura 2. Estructuras fungosas de Fusarium spp. aislado de raíces de tomate provenientes de la parroquia El Tambo.
Figura 3. Crecimiento radial diario (cm/d) de Trichoderma
spp. y orden de mérito según la prueba de Duncan (p<0,05).
Los aislamientos de Trichoderma spp. SF3 y 46
(SF3), presentaron la Clase 1 de antagonismo
(100 % de cubrimiento de la colonia de
Fusarium spp. y del medio de cultivo). El Tipo C
de parasitismo fue evidente en 12 aislamientos
de Trichoderma spp., el aislamiento LE1
presentó el Tipo B (antagonismo químico o lisis
en la zona de contacto antagonista-patógeno)
(Figura 4).
0,8
44
a
0,8
41
a
0,8
36
a
0,8
33
a
0,8
33
a
0,8
30
a
0,8
19
a
0,8
13
a
0,8
04
a
0,7
90
a
0,7
87
a
0,6
27
b
0,5
53
b
0,000
0,100
0,200
0,300
0,400
0,500
0,600
0,700
0,800
0,900
LC2
SB1
ET2
46
(SF
3)
54
55
(LE
1)
Taq
uil
LE2
LC1
SF3
LE1
ET1
SF2
b
SF2
aCre
cim
ien
to r
adia
l dia
rio
(cm
/d)
7
Figura 4. Cultivos duales de Trichoderma vs. Fusarium.
Eficacia de concentraciones de Trichoderma
spp. en el antagonismo de Fusarium spp.
El análisis de varianza de la variable crecimiento
radial diario (cm/d), indicó que las
concentraciones probadas de Trichoderma spp.,
en el rango de 9 × 105 a 2 × 108 conidios/ml son
iguales estadísticamente al 5 % de significancia.
Sin embargo, la concentración 9 × 105 con/ml
alcanzó el valor más alto de crecimiento radial
diario (0,859 cm/d) (Figura 5).
Todos los tratamientos de Trichoderma spp.
presentaron la Clase 2 de antagonismo y el Tipo
C de parasitismo (Figura 6).
Eficacia de Trichoderma spp. en la regulación
de Fusarium spp. en tomate en condiciones
semicontroladas
Los tratamientos: MA DE, TB DE, LC2 DE, SB1 DE
y MA SD, tuvieron 100 % de germinación y el
tratamiento Testigo 50 %. El porcentaje de
incidencia de Fusarium spp., no presentó
diferencia estadística al 95 % de confianza entre
los tratamientos; sin embargo, el tratamiento
Testigo presentó el 100 % de incidencia de
Fusarium spp. mientras LC2 DE y MA SD
registraron el 25 %. En el peso seco foliar, se
destacó el tratamiento C-TY1 DE (151,03 g),
aunque los tratamientos: C-TM4 DE, SB1 SD, LC2
SD, también superaron los 100,0 g de peso seco.
En el peso seco radicular, el tratamiento LC2 SD
registró el valor más alto (11,8 g) (Cuadro 4).
Figura 5. Crecimiento radial diario (cm/d) de Trichoderma
spp. en cuatro concentraciones diferentes.
Figura 6. Cultivos duales de Trichoderma spp. con
Fusarium spp. en cuatro concentraciones diferentes.
0,859
0,849
0,844 0,842
0,830
0,835
0,840
0,845
0,850
0,855
0,860
0,865
9,00E+05 2,00E+08 1,00E+08 1,00E+06
Cre
cim
ien
to r
ad
ial d
iari
o (
cm/d
)
Concentración (conidios/ml)
8
Eficacia de Trichoderma spp. en condiciones de
campo
El porcentaje de germinación, resultó
estadísticamente diferente entre tratamientos;
el tratamiento MA y C-TY1 superaron el 88 % y
no difieren estadísticamente entre sí según la
prueba de Duncan (p<0,05); el tratamiento
Testigo alcanzó 72,79 %. El porcentaje de
incidencia de Fusarium spp., no tuvo diferencias
significativas al 5 % entre tratamientos, sin
embargo el tratamiento MC tuvo 53,57 %, en
comparación con el Testigo (74 %).
El porcentaje de mortalidad de plantas tuvo
diferencias significativas entre tratamientos al
nivel del 5 %. De acuerdo a la prueba de Duncan
(p<0,05), el tratamiento Testigo (41,07 %) y LC2
(28,57 %), obtuvieron los valores más altos de
mortalidad y son diferentes estadísticamente
entre sí. Los tratamientos restantes de
Trichoderma spp., Tricobiol y Benomil, no
presentaron diferencias significativas entre sí.
En la variable producción de frutos, se evidenció
diferencias significativas entre tratamientos. Los
tratamientos C-TM4 y MC superaron los 100
kg/parc. (64 599 kg/ha), mientras que el Testigo
llegó a 84,21 kg/parc. (54 399 kg/ha) (Cuadro 4).
Discusión
Se encontró Trichoderma spp. en 83 % de las
muestras de suelo procesadas, lo que concuerda
con los resultados de Ludeña y Regalado (2004)
quienes encontraron Trichoderma spp. en 64 %
de muestras de suelo del cantón Catamayo.
Estos resultados confirman que Trichoderma
spp., por su naturaleza cosmopolita, puede
encontrarse en un amplio rango de sustratos y
los parámetros ambientales juegan un rol
importante en su dispersión y proliferación
(Bourguignon 2008). Se encontró Trichoderma
spp. en raíces, debido a que las hifas de
Trichoderma spp. pueden penetrarlas sin causar
daño (Harman 2006).
De los 13 aislamientos de Trichoderma spp.
encontrados, 85 % tuvo aproximadamente 0,8
cm/d de crecimiento radial. Todos los
aislamientos presentaron alto grado de
antagonismo en cultivos duales, por ubicarse en
las Clases 1 y 2 de antagonismo y por el
hiperparasitismo a Fusarium spp. Estos valores
son similares a los obtenidos por Ludeña y
Regalado (2004) y por González y Villavicencio
(2008), quienes registraron una velocidad de
crecimiento promedio de 0,82 cm/d en cepas de
Trichoderma spp. del cantón Catamayo. El alto
grado de antagonismo que presentó
Trichoderma spp. coincide con los resultados de
los autores antes citados y los de Michel (2001),
Suárez et al. (2008), Paredes-Escalante (2009),
Michel et al. (2009), Fernández y Suárez (2009).
Esto se debe a que la competencia por espacio y
nutrientes de Trichoderma spp. es muy alta por
su naturaleza saprofítica; el hiperparasitismo de
Trichoderma spp. le permite aprovecharse de
los componentes de la pared celular de
Fusarium spp. mediante la secreción de enzimas
(Deacon 2006, Kaewchai 2009).
Los resultados indican que las concentraciones
utilizadas (9 × 105, 106, 108 y 2 × 108
conidios/ml) ejercieron biocontrol a Fusarium
spp.; éstas no difirieron estadísticamente entre
sí, sin embargo el crecimiento radial diario más
alto lo obtuvo la menor concentración (9 × 105
conidios/ml). Lo cual se asemeja a los resultados
de González et al. (2004), González-Cárdenas et
al. (2005) y Jaimes et al. (2009), quienes
encontraron que las concentraciones 105 y 106
conidios/ml fueron más efectivas para el control
de Fusarium spp. Según Yedidia et al. (2000),
citados por Howell (2003) y Adams (1990),
9
Cuadro 3. Porcentaje de germinación, porcentaje de incidencia de Fusarium spp., peso seco (g) foliar y radicular de plantas de
tomate en macetas y orden de mérito de las medias según la prueba de Duncan (p< 0,05).
No. Tratamiento Germinación (%) Incidencia Fusarium (%) PS follaje (g) PS raíces (g)
1 C-TM4 SD 68,75 cde 75,00 a 75,60 def 7,45 cdef
2 C-TM4 DE 62,50 de 75,00 a 120,00 b 7,63 cde
3 C-TY1 SD 87,50 abc 50,00 a 65,58 eg 8,83 bc
4 C-TY1 DE 81,25 abcd 75,00 a 151,03 a 8,73 bc
5 AC SD 93,75 ab 50,00 a 77,18 def 5,90 efg
6 AC DE 81,25 abcd 50,00 a 86,30 cdef 5,43 fg
7 LC2 SD 68,75 cde 50,00 a 100,88 bc 11,80 a
8 LC2 DE 100,00 a 25,00 a 67,25 ef 8,35 bc
9 SB1 SD 68,75 cde 50,00 a 115,48 b 8,90 bc
10 SB1 DE 100,00 a 75,00 a 75,78 def 7,23 cdef
11 ET2 SD 81,25 abcd 75,00 a 71,78 def 7,15 cdef
12 ET2 DE 75,00 bcd 50,00 a 66,80 ef 7,48 cdef
13 MC SD 81,25 abcd 75,00 a 70,75 def 5,80 efg
14 MC DE 75,00 bcd 50,00 a 86,53 cd 8,08 bcd
15 MA SD 100,00 a 25,00 a 88,15 cd 9,90 b
16 MA DE 100,00 a 50,00 a 73,00 def 6,13 defg
17 TB SD 75,00 bcd 75,00 a 79,00 def 7,20 cdef
18 TB DE 100,00 a 50,00 a 91,18 cd 6,95 cdef
19 Benomil 93,75 ab 50,00 a 70,90 def 6,15 defg
20 Testigo 50,00 e 100,00 a 63,13 f 4,60 g
Cuadro 4. Germinación, incidencia de Fusarium spp., mortalidad de plantas y producción de tomate en condiciones de campo.
No. Tratamiento Germinación
(%)
Incidencia
Fusarium
(%)
%
mortalidad
plantas
Producción
kg/parc.
1 C-TM4 76,19 ef 72,32 a 13,39 d 113,08 a
2 C-TY1 88,44 a 58,93 a 18,75 cd 91,12 bc
3 AC 78,23 de 60,71 a 19,64 cd 91,29 bc
4 LC2 82,99 bcd 58,04 a 28,57 b 85,38 bc
5 SB1 86,39 bc 58,93 a 16,07 cd 95,84 bc
6 ET2 80,95 cde 57,14 a 16,07 cd 95,01 bc
7 MC 78,91 de 53,57 a 14,29 cd 103,27 ab
8 MA 91,84 a 65,18 a 16,96 cd 92,86 bc
9 TB 78,91 de 62,50 a 20,54 c 87,12 bc
10 Benomil 86,39 bc 56,25 a 17,86 cd 92,18 bc
11 Testigo 72,79 f 74,11 a 41,07 a 84,21 c
10
citado por Etebarian (2006) el biocontrol por
Trichoderma spp. puede darse desde 105
esporas/ml.
El porcentaje de germinación en macetas fue
superior en los tratamientos a base de
Trichoderma spp.: MA (mezcla de aislamientos),
MC (mezcla de cepas) y TB (Tricobiol), los cuales
registraron entre 75 y 100 %, tanto en sustrato
desinfectado (DE) como sin desinfectar (SD). El
tratamiento químico Benomil también alcanzó
un alto porcentaje de germinación (93,75 %). La
mezcla de aislamientos (MA) fue el tratamiento
más efectivo en la germinación de semillas en
macetas y semilleros (97 % en promedio). El
producto comercial Tricobiol (TB) superó el 75 %
y el químico Benomil el 85 % en ambos ensayos.
Estos valores concuerdan con Cubillos-Hinojosa
et al. (2009), cuyo estudio reveló que T.
harzianum estimuló la germinación de semillas
de maracuyá hasta el 93 %; así también, Guilcapi
(2009) consiguió el 98 % de emergencia de
plántulas de café tratadas con T. harzianum y T.
viride; y, Cupull et al. (2003) obtuvieron el 68 %
de germinación de semillas de café inoculadas
con T. viride. Esto se debe principalmente a que
este Trichoderma spp. secreta metabolitos
como el 6PAP, que actúan como reguladores del
crecimiento. Además, la inhibición de
fitopatógenos puede permitir que el proceso de
la germinación se cumpla sin contratiempos al
mejorar el metabolismo de la plántula para su
emergencia (Harman 2006, Bourguignon 2008,
Vinale et al. 2008).
El porcentaje de incidencia de Fusarium spp. en
tomate, tanto en macetas como en campo, no
tuvo diferencias significativas entre
tratamientos. La incidencia de Fusarium spp. en
los tratamientos de los ensayos en macetas y a
campo abierto, un tanto discrepa de los valores
obtenidos en varios trabajos realizados,
probablemente debido a la concentración
utilizada y al número de aplicaciones de
Trichoderma spp. Cifuentes (2001), logró
obtener 29,9 % de incidencia de F. solani en
plantas de tomate con la aplicación de T.
harzianum (109 conidios/ml), 60,5 % con el
producto comercial Trichodex y 65,5 % con
benomilo; Martínez-Medina et al. (2008)
encontraron que se redujo la incidencia y
severidad de la fusariosis del melón hasta 50 %
en comparación con el testigo; y, Jaimes et al.
(2009) consiguieron reducir la incidencia de
Fusarium oxysporum en tomate a 35 % con
cinco aplicaciones de Trichoderma spp. (106
conidios/ml).
No obstante, en los dos bioensayos,
Trichoderma spp. redujo la incidencia de
Fusarium spp.: entre 25 y 75 % en macetas y
entre 2 y 28 % en campo abierto, con respecto
al Testigo. La eficacia en la incidencia de
Fusarium spp. de las mezclas de aislamientos y
cepas fue inverso en macetas y en campo. Esto
es posible por la variación de factores
ambientales que juegan un rol importante en la
actividad biocontroladora de las especies de
Trichoderma, además de por sí tiene una alta
variabilidad antagonista (Bourguignon 2008).
En cuanto al peso seco, todos los tratamientos
de Trichoderma spp. superan los 65 g de peso
seco del follaje y los 5 g de peso seco radicular,
lo cual concuerda con Cupull et al. (2003),
quienes observaron incremento de la masa seca
foliar de plántulas de café con la aplicación de T.
viride. Fernández et al. (2006) también
comprobaron que la biomasa seca total de
plantas de tomate incrementó con un producto
comercial de T. harzianum. Por su parte,
Cifuentes (2001) no encontró diferencias
significativas entre el porcentaje de materia
seca de la raíz de plantas de tomate, pero sí en
11
la materia seca foliar en la cual se destacó la
aplicación de una cepa nativa de Trichoderma
spp. en el incremento del porcentaje de materia
seca. Naseby et al. (2000) obtuvieron
incremento de número de raíces en arveja con
la aplicación de Trichoderma spp.
Trichoderma spp. logró incrementar el peso
seco de las plantas, debido a la mayor cantidad
de nutrientes asimilados. El tratamiento químico
Benomil no contribuyó a la ganancia de peso. El
empleo de Trichoderma spp. ejerce influencia
sobre el crecimiento vegetativo, puesto que la
colonización de la rizósfera por parte de
Trichoderma spp., contribuye a estimular la
nutrición de la planta e incrementar su
metabolismo (González et al. 1999a, Harman
2006, Bourguignon 2008).
La mortalidad de plantas tuvo diferencias
significativas entre tratamientos. La máxima
mortalidad de los tratamientos a base de
Trichoderma spp. alcanzó 28,57 % (LC2) y la más
baja 13,39 % (C-TM4); la mezcla de aislamientos
tuvo el 17 %, la mezcla de cepas el 14 %, el
producto Tricobiol registró 21 % y Benomil 18 %.
Estos resultados concuerdan con los obtenidos
por Ludeña y Regalado (2004), quienes
registraron entre 17,5 a 30 % de mortalidad de
plantas de tomate bajo invernadero. González y
Villavicencio (2008) también obtuvieron
resultados similares que variaron entre 5 y 32 %
de mortalidad de plantas de pimiento, 13 % con
la mezcla de siete cepas y 5 % con el producto
Tricobiol, en condiciones de campo abierto.
Los tratamientos a base de Trichoderma spp.
indujeron resistencia a las plantas contra el
ataque de Fusarium spp. A pesar de que existió
infección del patógeno, Trichoderma spp. limitó
la mortalidad de las plantas. Es probable que la
segunda aplicación de Trichoderma spp. al inicio
de la floración haya influido en el control de
Fusarium spp., puesto que la floración y
fructificación del cultivo, son las fases
fenológicas donde la enfermedad se desarrolla y
es más severa (Smith et al. 1988, Rodríguez
2001, Herrera 2005). La segunda aplicación
pudo contribuir a que Trichoderma spp.,
incremente su colonización en el sistema
radicular e inducir mecanismos de defensa
como la biosíntesis de compuestos (fitoalexinas,
quitinasas y glucanasas) que inhiben el
desarrollo de patógenos. Además, la mezcla de
cepas antagonistas puede incrementar la acción
controladora de las poblaciones patogénicas, ya
que la producción de metabolitos secundarios o
de factores inhibidores depende más del
aislamiento que de la propia especie; siendo los
aislamientos nativos son los más eficaces
(Universidad del Zulia 2001, Harman 2006,
Bourguignon 2008, Infante et al. 2009, Kaewchai
2009, Morales 2009).
La producción en el cultivo de tomate se
incrementó en los tratamientos a base de
Trichoderma spp. (14 %) en comparación con el
Testigo. El incremento de la producción con la
aplicación de Trichoderma spp. ha sido
investigado en varios cultivos como lechuga,
cebolla, tomate y pimiento, los resultados han
mostrado incrementos de hasta 300 % en
comparación con el testigo (Vinale et al. 2008).
Esto se debe a la capacidad de Trichoderma spp.
de estimular la absorción de nutrientes en la
planta; Trichoderma spp. permite que fosfatos,
micronutrientes y otros minerales, útiles para el
metabolismo, sean asimilables por la planta
(Harman 2006, Vinale et al. 2008, Kaewchai
2009).
Conclusiones
Los aislamientos de Trichoderma spp. en
cultivos duales con Fusarium spp. mostraron
un alto grado de antagonismo expresado
12
por el rápido crecimiento que cubrió más
del 75 % (en 168 h) del medio de cultivo y
por el hiperparasitismo evidenciado.
No existió diferencias significativas entre las
concentraciones de 9 × 105 y 2 × 108
conidios de Trichoderma spp. /ml ya que se
observó el mismo efecto antagónico para
Fusarium spp. en cultivos duales.
La aplicación de una suspensión conidial de
Trichoderma spp. en la concentración de 9 ×
105 conidios/ml a semillas de tomate en
macetas estimuló la germinación e
incrementó el peso seco de las plantas.
En condiciones de campo, con dos
momentos de aplicación de Trichoderma
spp. a la concentración de 9 × 105
conidios/ml, se redujo la incidencia de
Fusarium spp. y la mortalidad de plantas.
Los mejores niveles de eficacia para el
control de Fusarium spp., en base a
mortalidad de plantas y producción de
frutos, se obtuvo con la cepa C-TM4, los
aislamientos: SB1 y ET2, la mezcla de cepas
y la mezcla aislamientos de Trichoderma
spp., en condiciones de campo.
No existieron diferencias significativas entre
el tratamiento químico a base de benomilo
(Benomil) y el producto comercial a base de
Trichoderma spp. (Tricobiol) para el control
de Fusarium spp., los mismos que tuvieron
niveles de eficacia inferiores a los
aislamientos y cepas nativas de Trichoderma
spp.
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