2013 review vma b
DESCRIPTION
ngvhTRANSCRIPT
Validasi Metode Analisa II
Disampaikan oleh:
Prof.Dr.Sudibyo Martono, M.S., Apt.pada
Seminar dan Workshop ISPE IndonesiaSurabaya, 26-27 Juni 2013
Akurasi
VMA-2013 [ B ] 2
3VMA-2013 [ B ]
Akurasi
Accuracy = Ketepatan
Ketepatan suatu metode analisis
adalah
kesesuaian antara hasil uj i yang diperoleh
dan
nilai sebenarnya yang diterima
4VMA-2013 [ B ]
Cara Evaluasi Accuracy
5VMA-2013 [ B ]
Penentuan Akurasi Metode Analisisdengan cara:
Pertama:
Dengan cara membandingkan hasil analisis metode yang divalidasi dengan hasil analisis yang diperoleh menggunakan metode baku (established reference method)
6VMA-2013 [ B ]
lanjutan…
Kedua:
Dengan menganalisis sampel yang diketahui konsentrasinya (cert if ied reference material, CRM) dan membandingkan hasil analisis terhadap nilai sebenarnya yang dinyatakan dalam CRM
7VMA-2013 [ B ]
Bila CRM Tidak Tersedia
Ketiga:
Tambahkan (spiking) zat baku dengan konsen-trasi yang diketahui (by weight or by volume) ke dalam, matrik* kemudian:
- lakukan ekstraksi analit injekkan ke
alat analisis dan hasil yang diperoleh
ditentukan rekoverinya (%)
Matrik * = …..???
8VMA-2013 [ B ]
Persyaratan Akurasi
Konsentrasi harus mencakup rentang zat yang dianalisis dan salah satunya adalah
konsentrasi yang dekat dengan nilai limit of quant itaion (LoQ)
Perkiraan rekoveri tergantung pada:
- matrik sampel
- prosedur penyiapan sampel, dan
- konsentrasi sampel
[ Lihat Tabel AOAC / HORWITZ ]
9VMA-2013 [ B ]
Akurasi
Misal: Tiga (3) macam konsentrasi yang mencakup
80, 100, dan 120 %
dari nilai kadar sampel
dan masing-masing konsentrasi direplikasi 3 kali
“ Accuracy should be reported as % recovery ”
10VMA-2013 [ B ]
Rekoveri
Rekoveri =Respon hasil ekstraksi
Respon zat baku*X 100 %
* : yang dilarutkan dalam pelarut murni
Perhatikan tata-cara penyiapan sampel
IlustrasiPresisi dan Akurasi
VMA-2013 [ B ] 11
Accuracy vs precision
What would you like to see ?
VMA-2013 [ B ] 12
Poor accuracyGood precision
Accuracy vs precision
VMA-2013 [ B ] 13
Accuracy vs precision
Poor precisionGood accuracy
VMA-2013 [ B ] 14
Totally hopeless! Poor precision Poor accuracy
What would you What would you call this?call this?
Accuracy vs precision
VMA-2013 [ B ] 15
Tingkatan dan Rentang Untuk
Menentukan Akuras i
VMA-2013 [ B ] 16
17VMA-2013 [ B ]
Akurasi
Ahuja dan Dong, 2005.
Bagaimana Menentukan Kriteria
Keberterimaan Akurasi[ Acceptance Criteria ]
???
VMA-2013 [ B ] 18
19VMA-2013 [ B ]
Kriteria Penerimaan
20VMA-2013 [ B ]
Accuracy and Precision
Snyder dkk., 2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography, Chpt. 12
21VMA-2013 [ B ]
Recovery Results for C.U.
LoBrutto and Patel, 2007
Linearitas
VMA-2013 [ B ] 22
23VMA-2013 [ B ]
Linearitas
Linearitas suatu metode analisis adalah:
kemampuan metode untuk
mendapatkan hasil uj i (respon)
yang
(secara langsung atau dengan bantuan perubahan matematik)
proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel pada suatu rentang tertentu
24VMA-2013 [ A ]
Linearitas
Dipersiapkan dengan:
minimum lima (5) level konsentrasi dengan
t iga ( 3 ) replikasi
VMA-2013 [ B ]
Kurva Baku [ 3 replikasi ]
25
Lakukan replikasi !
26VMA-2013 [ B ]
lanjutan…
Linearitas ditentukan dengan menganalisis:
t iga hingga enam kali penginjeksian dari
lima atau lebih konsentrasi zat standar
yang terletak antara
80 - 120 %
rentang
konsentrasi yang diperkirakan
27VMA-2013 [ B ]
Linearitas dapat disiapkan dengan cara:
1. Minimum 5 konsentrasi zat standar (dari
pengenceran larutan induk)
atau
2. Minimum 5 konsentrasi zat standar (dari
masing-masing penimbangan zat standar)
Mana yang direkomendasikan ?
Mengapa ?
28VMA-2013 [ B ]
lanjutan…
Linearity = Linieritas - hasil pengukuran menggunakan suatu
metode analisis yang berupa: abs, luas area, atau t inggi puncak menunjukkan proporsio-
nalitas dengan kadar zat yang dianalisis
Syarat:
Y = bX + a
Koefisien korelasi [ r ] 0,999≥
Kazakevich and LoBrutto, 2007, p.471-481; Ahuja and Rasmussen, 2007, p.292;
Snyder dkk., 1997, p. 691 dan Chan dkk., 2004, p.16.
29VMA-2013 [ B ]
30VMA-2013 [ B ]
Linearity Assay & C.U.
31VMA-2013 [ B ]
Low-Level Linearity
Rentang [ Range ]
VMA-2013 [ B ] 32
33VMA-2013 [ B ]
Rentang
Rentang suatu metode analisis adalah interval antara t ingkat paling atas dan paling bawah
yang sudah terbukt i dapat ditentukan dengan akurasi, presisi, dan linearitas menggunakan
metode sepert i yang ditulis
Rentang biasanya digambarkan/ dinyatakan dalam unit (%, ppm) yang diperoleh dengan
metode analit ik tersebut
34VMA-2013 [ B ]
Rentang Minimum
Jenis analisis Rentang [ % ]
PK. Kadar Obat atau Sediaan Obat
80 - 120
Keragaman kandungan 1- 130[ atau lebih lebar ]
Uji disolusi +/- 20
ICH, Q 2A and 2B, 2005 / ICH Q2 (R1)
Tingkatan dan Rentang Untuk
Menentukan Linearitas
VMA-2013 [ B ] 35
36VMA-2013 [ B ]
Linearitas
Ahuja dan Dong, 2005.
37VMA-2013 [ B ]
Linearitas
Ahuja dan Dong, 2005.
38VMA-2013 [ B ]
Range
Snyder dkk., 2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography, Chpt. 12
Limit of Detection [ LoD ]dan
Limit of Quantitation [ LoQ ]
VMA-2013 [ B ] 39
40VMA-2013 [ B ]
Limit of Detection [LoD]
LoD adalah konsentrasi analit terrendah dalam sampel yang masih dapat dideteksi tetapi
t idak diperlukan secara kuant itat if
Pada HPLC, LoD adalah jumlah zat yang diinjeksikan untuk menghasilkan t inggi puncak paling t idak 2 atau 3 kali t inggi
puncak baseline noise level
41VMA-2013 [ B ]
Limit of Quantitation
LoQ adalah jumlah zat minimum yang diinjeksikan untuk memberikan hasil
pengukur-an secara telit i
Pada HPLC, biasanya t inggi puncak 10 hingga 20 kali lebih t inggi dibanding baseline noise
Sejumlah sampel dengan konsentrasi analit menurun (semakin kecil) diinjeksikan 6 kali,
Hitunglah nilai RSD-nya
42VMA-2013 [ B ] Ermer and Miller, 2005, p.101
43VMA-2013 [ B ]
44VMA-2013 [ B ]
Paper penentuan LoD
Ermer and Miller, 2005, p.111
45VMA-2013 [ B ]
Penentuan LoD dan LoQ
Ermer and Miller, 2005, p.110
46VMA-2013 [ B ]
47VMA-2013 [ B ]
48VMA-2013 [ B ]
LoD dan LoQ
49VMA-2013 [ B ]
Limit of Detection
50VMA-2013 [ B ]
LoD PGE2
Robustness
VMA-2013 [ B ] 51
52VMA-2013 [ B ]
Robustness
Robustness adalah ukuran kinerja (performance) suatu metode analisis apabila
perubahan kecil yang disengaja diterapkan pada kondisi metode tersebut
Tujuan validasi parameter ini untuk mengiden-t if ikasi (bila ada) kondisi metode mana yang
paling krit is untuk menampilkan kinerja metode dengan baik
53VMA-2013 [ B ]
Parameter Robustness
Parameter Nominal Low value High value
Percent organic in mobile phase 25 20 30
Flow rate (mL/min) 1.0 0.8 1.2
Buffer pH 7.2 6.8 7.6
Buffer concentration (mM) 20 15 25
Column temperature (0C) 30 25 35
Detector wavelength (nm) 220 210 230
HPLC Column Different batches for same column type
54VMA-2013 [ B ]
Robustness [ isocratic ]
Snyder dkk., 2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography, Chpt. 12
55VMA-2013 [ B ]
Robustness [ gradient ]
Snyder dkk., 2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography, Chpt. 12
56VMA-2013 [ B ]
System Suitability
Ermer and Miller, 2005, p.351
57VMA-2013 [ B ]
System Suitability Test [ FDA ]
Snyder dkk., 2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography, Chpt. 12
58VMA-2013 [ B ]
Penyimpangan λ-maks
Ahuja and Rasmussen, 2007, HPLC Method Development for Pharmaceutical, Chpt. 9
59VMA-2013 [ B ]
Injector/Autosampler
Ahuja and Rasmussen, 2007, HPLC Method Development for Pharmaceutical, Chpt. 9
60VMA-2013 [ B ]
Temperatur Kolom
Ahuja and Rasmussen, 2007, HPLC Method Development for Pharmaceutical, Chpt. 9
61VMA-2013 [ B ]
Stability of Solution
Kazakevich and LoBrutto, 2007, p.485-486.
62VMA-2013 [ B ]
Method Adjustmentor
Method Modification
63VMA-2013 [ B ]
Perlukah
Metode Titrasi DiValidasi ???
VMA-2013 [ B ] 64
65TITRASI, 2012
VMA-2013 [ B ]
Validasi Metode Titrasi
2005
66
67VMA-2013 [ B ]
Volumetric solut ion do not differ from the prescribed strength by more than 10 per cent. The molarity of the volumetric solut ion is determined by an appropriate number of t it rat ions. The repeatability does not exceed 0.2 per cent (relat ive standard deviat ion).
Misal, akan dibuat larutan baku 0,1 N,
European Pharmacopoeia 6.0 2008 (p.514), 4.2.2
0,09 - 0,11 [ RSD ≤ 0,2 % ]
Yang diperbolehkan :
VMA-2013 [ B ]
Ermer and Miller, 2005, p.327
68
VMA-2013 [ B ] 69
VMA-2013 [ B ] 70
Terima KasihE-mail : [email protected]