1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/vetmed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m...
TRANSCRIPT
1 / 3
Table of Contents
No. Title Page
1 Production and Specificity Testing of Monoclonal Antibodies to Bovine ZonnaPellucida 3 Deglycosylated (Mab-bZP3dG) for Woman ImmunocontraceptiveVaccine
1 - 4
2 Potency of Crude Spirulina on Protein Efficiency Ratio in Laying Hen 5 - 8
3 H-Y antisera Preparation and X Chromosomal Receptor Tracer as SexDetermination Prototype
9 - 14
4 Erythrocyte's Form Changes in Dog's Blood Smear Before and After the StorageUsing Citrate Phosphate Dextrose
15 - 18
5 Avian Influenza H5N1 Vaccine Candidate for Chicken from East Java Isolate Virus 19 - 24
6 Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801Terhadap Penurunan Sensasi Nyeri Inflamasi pada Mencit Putih (MusMusculus) Strain Balb/C
25 - 36
7 Exploration Cellulolytic of Bacterium of Rumen Liquid Beef Cattle As Inoculum ofWaste Agriculture
37 - 42
8 Respon hMG Toward Ovarium Development In Goat 43 - 48
9 Identification Of Pregnancy Associated Glycoprotein (PAG) From Milk Of PregnantDairy Cattle
49 - 52
10 The Role Of Soil As A Helminths Transmitter Around The Habitas of Babirusa 53 - 56
11 Potency of Brown Seaweed (Sargassum duplicatum Bory) Ethanol and EthylAcetic Fraction to Malondialdehyde Concentration Decreasing and HistologicalRetriveal of IBD (Inflammatory Bowel Disease) Rat Small Intestinal Jejunum
57 - 64
12 Blood Glucose and Total Blood Protein Profile in Sheep Provided With Lactic AcidBacteria and Yeast on King Grass and Rice Straw
65 - 70
13 Effect Of Pegagan (Centella Asiatica) Extract in Ovariectomized Wistar-strainRattus norvegicus On Epithelial Proliferation Of Vaginal Wall
71 - 76
14 Excessive Dose Of Vitamine A On Skeletal Development In The Mice Embryos 77 - 80
2 / 3
Vol. 4 - No. 1 / 2011-02TOC : 6, and page : 25 - 36
Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801 Terhadap Penurunan Sensasi NyeriInflamasi pada Mencit Putih (Mus Musculus) Strain Balb/C
Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801 Terhadap Penurunan Sensasi NyeriInflamasi pada Mencit Putih (Mus Musculus) Strain Balb/C
Author :Susilo, Imam | .Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran Universitas AirlanggaGondo, Lisa | .Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas AirlanggaAji, Rahmad |Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas AirlanggaBambang S.Z | .Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas AirlanggaKhotib, Junaidi | .Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
Abstract
Chronic pain, such as inflammatory pain, is difficult to manage. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA) receptor is a key moleculeinvolved in the pain pathway and sensitization. The present study was design to investigate the efficacyof a novel potentnon-competitive NMDA receptor antagonist, MK-801, in relieving inflammatory pain in mice. A model of inflammatory painstate was induced by intraplantar injection of Complete Freund's Adjuvant (CFA). NMDA receptor antagonist MK-801 wasadministered intrathecally once a day for 7 consecutive days at 0.01, 0.10, 1.00, 10.00, or 20.00 nmol doses a week afterCFA injection. Thermal hyperalgesia was measured on days 0, 1, 3, 5, 7,8, 10, 12, 14, and 21 after CFA injection bywarm plate. Paw thickness at the ipsilateral site was also measured on days 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, and 21after CFA injection. Histology of the spinal cord tissue was examined by lightmicroscope following haematoxylline-eosinstaining. The results showed that MK-801 given at 0.01-20.00 nmoldosage significantly increased mice's latency onthermal stimulation compared with placebo (p<0.001). Pawthickness was also significantly decreased to compare withplacebo after intrathecal injection of MK-801 at 0.01, 1.00and 10.00 nmol dosage (p<0,001; p=0,005; p=0,015respectively). Whereas MK-801 administration at 0.01, 1.00, and20.00 nmol could decrease the inflamatory cellsinfiltration and recover the dorsal horn histology compare with placebo. Taken together, these results show that NMDAreceptor antagonist, MK-801, is effective in relieving the inflammatory pain.
Keyword : Chronic, Pain, Inflammatory, Pain, MK-801, NMDA, receptor, .,
Daftar Pustaka :1. Lipton, S., A., (2004). Failures and Successes of NMDA Receptor Antagonists: Molecular Basis for the Use of Open-Channel Blockers like Memantine in the Treatment of Acute and Chronic Neurologic Insults. United States : J. Am. Soc.Exp. Neuro Therapeutics, 1 :101-110.2. Kocaeli, H., E. Korfali, H. Öztürk, N. Kahveci dan S. Yılmazlar, (2005). MK-801 Improves Neurological andHistological Outcomes after Spinal Cord Ischemia Induced by Transient Aortic Cross-Clipping in Rats. United States :Surgical Neurology, 64 (2) : S22-S26.3. Alilain, W. J. dan H. G. Goshgarian, (2007). MK-801 Upregulates NR2A Protein Levels and Induces FunctionalRecovery of the Ipsilateral Hemidiaphragm Following Acute C2 Hemisection in Adult Rats. United States : The Journal ofSpinal Cord Medicine. 30 (4) : 346-354
Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
3 / 3
Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801 Terhadap Penurunan Sensasi Nyeri Inflamasi pada Mencit Putih (Mus Musculus) Strain Balb/C
1 2 2 2 2Imam Susilo , Lisa Gondo , Rahmad Aji , Bambang SZ , Junaidi Khotib
1Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Unair2 Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi, Unair
Kampus A. Jl. Mayjen Prof. Dr. Moestopo 48 Surabaya 60131 Telp : 031-5020251, Fax. 031-5022472
Email :
Abstract
Chronic pain, such as inflammatory pain, is difficult to manage. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA) receptor is a key molecule involved in the pain pathway and sensitization. The present study was design to investigate the efficacy of a novel potent non-competitive NMDA receptor antagonist, MK-801, in relieving inflammatory pain in mice. A model of inflammatory pain state was induced by intraplantar injection of Complete Freund's Adjuvant (CFA). NMDA receptor antagonist MK-801 was administered intrathecally once a day for 7 consecutive days at 0.01, 0.10, 1.00, 10.00, or 20.00 nmol doses a week after CFA injection. Thermal hyperalgesia was measured on days 0, 1, 3, 5, 7, 8, 10, 12, 14, and 21 after CFA injection by warm plate. Paw thickness at the ipsilateral site was also measured on days 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, and 21 after CFA injection. Histology of the spinal cord tissue was examined by light microscope following haematoxylline-eosin staining. The results showed that MK-801 given at 0.01-20.00 nmol dosage significantly increased mice's latency on thermal stimulation compared with placebo (p<0.001). Paw thickness was also significantly decreased to compare with placebo after intrathecal injection of MK-801 at 0.01, 1.00 and 10.00 nmol dosage (p<0,001; p=0,005; p=0,015 respectively). Whereas MK-801 administration at 0.01, 1.00, and 20.00 nmol could decrease the inflmammatory cells infiltration and recover the dorsal horn histology compare with placebo. Taken together, these results show that NMDA receptor antagonist, MK-801, is effective in relieving the inflammatory pain.
Keywords : Chronic pain, Inflammatory pain, MK-801, NMDA receptor
Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011
Pendahuluan
Nyeri merupakan pengalaman sensoris dan
emosional yang tidak menyenangkan yang
berhubungan dengan kerusakan jaringan aktual
maupun potensial (Le Bars et al., 2001; Roach, 2003;
Lynch & Watson, 2006; D'Mello & Dickenson, 2008;
O'Neil, 2008), termasuk proses inflamasi (Woolf,
2004). Rasa nyeri ini dapat menurunkan kualitas
hidup penderita yang saat ini menjadi problem
signifikan dimana 80% individu di dunia
mengeluhkan rasa nyeri (O'Neil, 2008). Di Indonesia
sendiri, 25-50% penderita usia lanjut mengalami
sensasi nyeri yang berdampak negatif bagi kualitas
hidup (Kartini, 2007). Nyeri juga memberikan
dampak signifikan terhadap keadaan finansial.
Menurut
anggaran untuk mengatasi nyeri
punggung bawah mencapai US$ 50 hingga 100
triliun per tahun (O'Neil, 2008). Oleh karena itu,
diperlukan manajemen terapi yang memadai untuk
mengontrol nyeri (Page et al., 2002; Woolf, 2004).
Persepsi nyeri inflamasi muncul melalui
rangkaian jalur penghantaran nyeri baik ascending
maupun descending pathway. Mediator inflamasi
yang muncul setelah kerusakan jaringan seperti nerve
The National Institute for Occupational
Safety and Health,
growth factor (NGF), bradikinin, dan prostaglandin
E berperan sebagai stimulus nyeri dan akan 2
mengaktivasi terminal perifer reseptor nyeri
(Brenner, 2002; Woolf, 2004). Transmisi stimulus
nyeri menuju dorsal horn korda spinalis melibatkan
serabut saraf Aδ dan C melalui jalur ascending (Page
et al., 2002; Woolf, 2004; D'Mello & Dickenson,
2008). Penghantaran selanjutnya, melibatkan
reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA). Reseptor
NMDA termasuk dalam golongan reseptor ionotropik
dengan kanal ion yang bersifat spesifik terhadap ion
logam bervalensi 2 dan beberapa molekul protein
kecil. Terdapat tiga subunit reseptor NMDA yaitu
NR1, NR2, dan NR3. Subtipe NR2B dan NR2D
diduga berperan penting pada sensasi nyeri (Petrenko
et al., 2003; Paoletti & Neyton, 2007). Aktivasi 2+ reseptor NMDA menyebabkan efluks Mg dan
2+ 2+influks Ca . Masuknya ion Ca mengaktifkan
berbagai protein pada jalur signaling intraseluler
yang terlibat dalam penghantaran informasi nyeri
(D'Mello & Dickenson, 2008). Remodeling akson
dan upregulasi fungsi reseptor NMDA seringkali
dihubungkan dengan sensitisasi sentral berupa
hiperalgesia dan alodinia (Petrenko et al., 2003;
Flossos, 2004).
25
Beberapa kelas obat yang selama ini
digunakan untuk mengatasi nyeri seperti Non-
Steroidal Anti-Inflammatory Drugs (NSAIDs),
analgesik non-opioid, maupun analgesik opioid
belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik
(Carr & Goudas, 1999; Roach, 2003). Studi
mengenai terapi nyeri kronik non-malignan oleh
Jovey et al. (2003) menyatakan bahwa opioid hanya
mampu menurunkan rasa nyeri sebesar 50%.
Disamping itu, manfaat klinis berbagai anti-nyeri
tersebut seringkali dibatasi oleh efek sampingnya
seperti pendarahan saluran cerna, hepatotoksisitas,
toleransi, bahkan ketergantungan. Oleh karena itu,
perlu dikembangkan alternatif strategi terapi baru
yang dapat mengatasi nyeri kronik. Antagonis
reseptor NMDA berpotensi digunakan sebagai
alternatif strategi terapi nyeri kronik mengingat
reseptor NMDA pada jaringan korda spinalis
merupakan gerbang utama yang berperan pada
penghantaran nyeri (Dickenson, 2002; Petrenko et al,
2003). Beberapa antagonis reseptor NMDA saat ini
telah digunakan secara klinis, antara lain ketamin,
memantin, amantadin, dan dekstrometorfan (Sang,
2000). Namun afinitas dan potensinya yang rendah
dalam mengantagonisas i reseptor NMDA
membuatnya kurang efektif guna mengatasi nyeri
kronik (Paoletti & Neyton, 2007; Parsons et al.,
2007).
Antagonis reseptor NMDA poten yang saat
ini sedang dikembangkan adalah MK-801, atau juga
dikenal sebagai dizocilpine. MK-801 merupakan
antagonis nonkompetitif reseptor NMDA yang
memiliki afinitas tinggi terhadap reseptor NMDA
dan lebih selektif dalam menghambat subtipe NR2A
dan NR2B (Paoletti & Neyton, 2007). Penelitian
yang dilakukan oleh Dravid et al. (2007)
menunjukkan potensi MK-801 yang tinggi dalam
mengantagonisasi reseptor NMDA dengan IC 50
sebesar 0,009 µM terhadap NR1/NR2B dan 0,015
µM terhadap NR1/NR2A. MK-801 bekerja dengan 2+menghambat influks Ca saat aktivasi reseptor
NMDA oleh glutamat (Köhr, 2007; Paoletti &
Neyton, 2007). Melalui reseptor tersebut, MK-801
diduga mampu mengatasi seizure, iskemia, toleransi
terhadap morfin (Vezzani et al., 1989; Kocaeli et al.,
2005; Yoon et al., 2005; Torres et al., 2009).
Penelitian ini ditujukan untuk mengetahui pengaruh
pemberian MK-801 pada penurunan nyeri inflamasi
kronik akibat induksi oleh complete Freund's
adjuvant (CFA). Injeksi CFA menimbulkan nyeri
inflamasi ireversibel yang lebih mirip dengan
patofisiologi karena inflamasi muncul melalui reaksi
i m u n d a l a m t u b u h t e r h a d a p k o m p o n e n
lipopolisakarida dinding sel bakteri dalam CFA 2(Anonim , 2008). Pengaruh pemberian MK-801
terhadap penurunan sensasi nyeri inflamasi diamati
dengan mengukur ketahanan hewan coba terhadap
stimulus panas (warm plate), tebal plantar hewan
coba, dan pengamatan terhadap histologi jaringan
spinal cord menggunakan metode histokimia dengan
pewarnaan hematoxyllin-eosin.
Materi dan Metode Penelitian
Bahan Penelitian
Bahan kimia yang digunakan dalam
penelitian ini adalah antagonis reseptor NMDA MK-
801 (Sigma), Complete Freund's Adjuvant p.a
(Sigma), Paraformaldehid 37%b/v (Bratachem),
K HPO .3H O (Bratachem), KH PO (Bratachem), 2 4 2 2 4
eter (E. Merck), normal Saline Steril (Otsuka) dan
alkohol 70% (Bratachem).
Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian
ini adalah Hot/Cold plate 35100 (Ugo Basile),
cryostat, mikroskop cahaya beserta kamera
(Olympus), neraca analitik (Sartorius), jangka
sorong, micro syringe (Hamilton), jarum suntik 30 G
(BD PrecisionGlide™ Needle), jarum Suntik 24 G
(Terumo) dan alat gelas.
Subyek Penelitian
Pada penelitian ini digunakan subyek
mencit putih (Mus musculus) strain Balb/c
(Laboratorium Hewan, Fakultas Farmasi Universitas
Airlangga), jantan, usia 2-3 bulan, dengan berat
badan 20-25 gram, sehat, tidak ada kelainan yang
tampak pada bagian tubuh.
Pembagian Kelompok Penelitian
Penelitian eksperimental ini dilakukan pada
49 ekor mencit jantan strain Balb/C yang telah
memenuhi persyaratan sebagai subyek penelitian.
Mencit kemudian dikelompokkan secara random
dalam 7 kelompok (1 kelompok kontrol negatif
(sham), 1 kelompok kontrol positif dan 5 kelompok
perlakuan), masing-masing terdiri dari 7 ekor mencit.
Mencit ditempatkan dalam kandang dengan otemperatur ruangan 27±1 C. Selama penelitian
kebutuhan makanan dan minuman dijaga dalam
jumlah yang cukup. Mencit diadaptasikan dengan
lingkungan selama satu minggu sebelum penelitian
dilaksanakan.
Pengaruh Pemberian Antagonis ......
26
Pembuatan Model Inflamasi
Mencit pada kelompok inflamasi, diinduksi
nyeri inflamasi dengan injeksi intraplantar CFA.
Mencit dianestesi dengan pemberian eter dan
ditempatkan pada papan bedah dengan posisi
terlentang, injeksi dilakukan pada intraplantar
tungkai kaki sebelah kanan dengan mengunakan CFA
40 L. Keadaan inflamasi didapatkan pada hari
pertama dan akan mencapai puncaknya pada hari
ketujuh. Pada kelompok sham diberikan injeksi
normal saline sebagai pengganti CFA.
Pembuatan Larutan MK-801
M K - 8 0 1 d i l a r u t k a n d a l a m 2 5 %
DMSO/Water For Injection (25%DMSO/WFI)
sehingga didapatkan konsentrasi 30,00 nmol/4µl.
Larutan MK-801 dengan konsentrasi 0,01; 0,10;
1,00; 10,00 dan 20,00 nmol/4µl dibuat dengan cara
mengencerkan larutan induk konsentrasi 30,0
nmol/4µl melalui pengenceran bertingkat.
Pemberian larutan MK-801
Larutan MK-801 diinjeksikan secara
intratekal mengikuti prosedur Hylden dan Wilcox
(1980). Jarum disisipkan pada ruang antar tulang
belakang diantara lumbal 5 dan lumbal 6 dari korda
spinalis, bila jarum sudah masuk ke column spinalis
dengan cepat ekor mencit akan menunjukan gerakan
flick. MK-801 diinjeksikan pada hari ke-7, 8, 9, 10,
11, 12 dan 13 sesudah dilakukan induksi CFA.
Injeksi MK-801 dilakukan sekali sehari dengan
volume 4 μL menggunakan microsyringe. Kelompok
sham dan kontrol positif hanya diberikan 25%
DMSO/WFI sebanyak 4μl dengan frekuensi
pemberian mengikuti kelompok perlakuan.
Evaluasi Tebal Plantar
Evaluasi tebal plantar dilakukan dengan
menggunakan jangka sorong. Pengukuran tebal
plantar dilakukan pada hari ke-1 sampai 21 setelah
injeksi intraplantar CFA dan injeksi intraplantar
normal saline. Nilai baseline ditentukan sebelum
injeksi (hari ke-0).
Evaluasi Hiperalgesia
Evaluasi respon nyeri yang dilihat
berdasarkan pengamatan visual terhadap perilaku-
perilaku yaitu mendekatkan kedua tungkai ke depan,
menjilat tungkai ke depan, gerakan meliuk, berusaha
m e l o m p a t k e l u a r a r e a w a r m p l a t e d a n
menghentakkan tungkai belakang. Pada pengujian
waktu ketahanan terhadap stimulasi panas, mencit
ditempatkan pada warm plate yang diatur pada suhu o48±0,5 C kemudian penghitung waktu segera
diaktifkan. Pengujian waktu ketahanan terhadap
stimulus panas dilakukan pada hari ke-0, 1, 3, 5, 7, 8,
10, 12, 14 dan 21 pada semua kelompok. Nilai
baseline ditentukan terlebih dahulu sebelum injeksi
dilakukan pada hari ke-0.
Histokimia Jaringan Spinal Cord
Mencit dimatikan dengan menggunakan
eter, kemudian hewan coba dibedah untuk diambil
spinal cord yang terdapat di dalam tulang belakang.
Jaringan spinal cord yang telah diambil kemudian
difiksasi dalam phosphate buffered formalin (PBF)
4% dengan pH 7,4. Setelah itu jaringan spinal cord
dicuci dengan xylene, direndam dalam parafin dan
dipotong melintang pada bagian lumbar dengan
mikrotom setebal 4-5 µm. Pewarnaan hematoxyllin-
eosin pada jaringan spinal cord diawali dengan
deparafinasi dengan cara mengalirkan aquadest pada
potongan jaringan. Potongan jaringan dialiri air
kemudian ditempatkan dalam hematoxyllin selama 5
menit, setelah itu dibilas dengan air mengalir.
Potongan tersebut kemudian direndam dalam litium
karbonat dan dibilas dengan air mengalir. Setelah itu
potongan diletakkan di dalam asam alkohol 1%
untuk beberapa detik sebelum dibilas kembali
dengan air mengalir dan direndam dalam eosin
selama 5 menit. Hasil yang tampak adalah inti sel
saraf dan ribosom pada spinal cord berwarna biru
kehitaman, sedangkan komponen protein berwarna
merah muda (Copenhaver et al.,1978).
Analisis Hasil
Rerata waktu ketahanan mencit terhadap
stimulus panas dan tebal plantar tiap kelompok
dibandingkan dengan kelompok sham dan inflamasi
pada hari ke-0 sampai 21. Data dianalisis dengan uji
statistik two way ANOVA. Jika ada perbedaan yang
bermakna (p<0,05), analisis statistik dilanjutkan
dengan Least Significant Different (LSD). Hasil
pewarnaan jaringan diamati di bawah mikroskop
cahaya, dengan membandingkan kelompok inflamasi
yang mendapat MK-801 pada berbagai dosis dengan
kelompok sham dan kelompok inflamasi untuk
mengetahui adanya sel-sel inflamatori pada jaringan
dan perubahan histologi pada dorsal horn. Analisis
dilakukan secara kualitatif terhadap hasil pengamatan
mikroskop.
Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011
27
Hasil dan Pembahasan
Model Inflamasi
Model inflamasi pada penelitian ini
diperoleh dengan menginduksi hewan coba (mencit)
menggunakan CFA melalui rute injeksi intraplantar.
Sebelum dilakukan injeksi intraplantar CFA, terlebih
dahulu dilakukan pengukuran baseline waktu
ketahanan mencit terhadap stimulus panas dengan
menggunakan warm plate dan tebal plantar mencit,
yang dicatat sebagai hari ke-0. Kemudian dilakukan
pembagian hewan coba dalam dua kelompok yaitu
kelompok sham (n=10) yang mendapat injeksi
normal saline dan kelompok CFA (n=46) yang
mendapatkan injeksi intraplantar CFA pada kaki
kanan (ipsilateral). Keberhasilan model inflamasi
ditandai dengan adanya penurunan waktu ketahanan
hewan coba (mencit) terhadap stimulus panas seperti
yang terlihat pada tabel 1 dan peningkatan tebal
plantar hewan coba (mencit) yang tampak pada tabel
2.
Pengaruh Pemberian MK-801 pada Mencit yang
Mengalami Nyeri Inflamasi
Injeksi larutan MK-801 diberikan melalui
rute intratekal pada hari ke-7 setelah injeksi CFA,
dimana pada hari ke-7 hewan coba telah mengalami
inflamasi. MK-801 diberikan pada 5 dosis yang
berbeda pada 5 kelompok hewan coba yaitu 0,01;
0,10; 1,0; 10,00; dan 20,00 nmol. Injeksi intratekal
MK-801 dilakukan sehari sekali selama 7 hari,
dimulai pada hari ke-7 hingga hari ke-13. Untuk
mengetahui pengaruh pemberian antagonis non-
kompetititf reseptor NMDA dalam menurunkan nyeri
inflamasi mencit, maka dilakukan pengukuran
terhadap parameter waktu ketahanan mencit terhadap
stimulus panas dengan uji menggunakan warm plate
(Tabel 1) dan parameter tebal plantar mencit (Tabel
2). Pengukuran kedua parameter ini dilakukan pada
hari ke-8, 10, 12, dan 14 yang mulai dilakukan pada
jam yang sama.
Pengaruh Pemberian Antagonis ......
28
Kelompok Treatment
Waktu Ketahanan Mencit terhadap Stimulus Panaspada hari ke- (detik±S.E.M)
8 10 12 14
Sham
(n=10)
Plasebo
(25% DMSO/WFI)
11,72
3
±0,6 11,40±0,4
9
10,62±0,4
9
11,35±0,6
0
CFA(n=46)
Plasebo
(25% DMSO/WFI)4,27±0,88 4,59±0,66 5,67±0,85 6,66±0,74
MK-801 0,01 nmol 8,87±1,5410,79±1,3
4
14,26±1,2
7
14,04±0,7
8
MK-801 0,01 nmol 8,04±1,32 9,73±0,9012,55±1,3
4
12,56±1,4
9
MK-801 0,01 nmol 9,04±0,7910,89±0,9
0
12,30±1,0
4
14,51±1,4
3
MK-801 10,00
nmol6,34±0,74 9,04±1,04
10,20±1,1
7
10,57±1,1
3
MK-801 10,00
nmol8,76±1,40 8,51±1,20 9,58±1,12
11,50±0,9
5
Tabel 1. Pengaruh Pemberian MK-801 pada Waktu Ketahanan Mencit Terhadap Stimulus Panas
Dari Tabel 1 dapat dilihat bahwa pemberian
MK-801 dengan dosis 0,01; 0,10; 1,00; 10,00; dan
20,00 nmol dapat menurunkan nyeri inflamasi pada
mencit yang sebelumnya telah mengalami
hiperalgesia setelah injeksi intraplantar CFA. Hal ini
tampak dari peningkatan waktu ketahanan mencit
pada kelompok perlakuan terhadap stimulus panas
dari hari ke-8 hingga hari ke-14 setelah diberikan
injeksi intratekal MK-801. Analisis statistik dengan
metode two way ANOVA menunjukkan adanya
perbedaan bermakna antara kelompok hewan coba
yang mendapatkan injeksi intratekal MK-801 dengan
dosis 0,01 nmol (F = 80,920; p<0,001); 0,10 nmol (1,12)
(F = 51,889; p<0,001); 1,00 nmol(F = 92,340; (1,12) (1,13)
29
Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011
p<0,001); 10,00 nmol(F = 33,202; p<0,001); dan (1,12)
2 0 , 0 0 n m o l ( F = 3 7 , 0 4 9 ; p < 0 , 0 0 1 )( 1 , 1 2 )
masing-masing terhadap kelompok yang mengalami
inflamasi.
Kelompok Treatment
Waktu Ketahanan Mencit terhadap Stimulus Panaspada hari ke- (cm±S.E.M)
8 10 12 14
Sham
(n=10)
Plasebo
(25% DMSO/WFI)0,2016±0,0014 0,2158±0,0057 0,2114±0,0041 0,2142±0,0044
CFA(n=46)
Plasebo
(25% DMSO/WFI)0,4094±0,0172 0,3757±0,0176 0,3574±0,0100 0,3194±0,0120
MK-801 0,01 nmol 0,3517±0,0165 0,3274±0,0196 0,2989±0,0104 0,2794±0,0079
MK-801 0,01 nmol 0,3900±0,0243 0,3500±0,0254 0,3469±0,0292 0,3146±0,0230
MK-801 0,01 nmol 0,3869±0,0083 0,3571±0,0052 0,3234±0,0092 0,2980±0,0062
MK-801 10,00
nmol0,3936±0,0185 0,3437±0,0140 0,3171±0,0208 0,2927±0,0148
MK-801 10,00
nmol0,3843±0,0114 0,3700±0,0142 0,3250±0,0093 0,3063±0,0127
Tabel 2. Pengaruh Pemberian MK-801 pada Tebal Plantar Mencit
Sedangkan Tabel 2 terlihat bahwa dari hari
ke-8 hingga hari ke-14, terjadi penurunan tebal
plantar pada hewan coba yang mendapatkan injeksi
intratekal MK-801. Hal ini menunjukkan adanya
perbaikan pada kondisi nyeri inflamasi pada hewan
coba. Hasil analisis statistik dengan two way ANOVA
menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna
antara kelompok hewan coba yang mendapatkan
injeksi intratekal MK-801 dengan dosis 0,01 nmol
(F = 24,986; p<0,001); 1,00 nmol (F = 8,742; (1,12) (1,12)
p=0,005); dan 10,00 nmol (F = 6,396; p=0,015), (1,13)
masing-masing, terhadap kelompok yang mengalami
inflamasi. Namun pemberian injeksi intratekal MK-
801 dosis 0,10 nmol (F = 1,058; p=0.309) dan (1,12)
20,00 nmol (F = 3,970; p=0,052) tidak (1 ,12)
menyebabkan penurunan tebal plantar yang
bermakna jika dibandingkan dengan kelompok yang
mengalami inflamasi.
Uji statistik dengan metode one way ANOVA
dilakukan terhadap parameter waktu ketahanan
mencit terhadap stimulus panas dan tebal plantar
mencit antar kelompok pada masing-masing hari ke-
8, ke-10, ke-12, dan ke-14. Uji ini dilakukan untuk
mengetahui ada atau tidaknya perbedaan bermakna
antar kelompok pada parameter-parameter tersebut.
Hasil analisis pada parameter waktu ketahanan
terhadap stimulus panas menunjukkan bahwa
terdapat perbedaan bermakna antar kelompok hewan
coba yang telah mengalami inflamasi pada hari ke-8
(F =2,73; p=0,034), hari ke-10 (F =5,11; (5,37) (5,36)
p=0,001), hari ke-12 (F =7,04; p<0,001), dan hari (5,35)
ke-14 (F =6,61; p<0,001). Namun hasil analisis (5,34)
one way ANOVA terhadap parameter tebal plantar
mencit menunjukkan tidak adanya perbedaan
bermakna antar kelompok pada hari ke-8
(F =1,255; p=0,304), hari ke-10 (F =1,033; (5,37) (5,36)
p=0,413), hari ke-12 (F =1,580; p=0,191), maupun (5,35)
hari ke-14 (F =1,169; p=0,344). Oleh karena itu (5,34)
hanya analisis statistik pada parameter waktu
ketahanan mencit terhadap stimulus panas yang
dilanjutkan dengan metode uji LSD untuk
mengetahui kelompok hewan coba yang memberikan
perbedaan bermakna.
Pengaruh Pemberian MK-801 terhadap Histologi
Jaringan Spinal Cord
Pengaruh penginjeksian larutan MK-801
yang diberikan melalui rute intratekal pada hari ke-7
Keterangan:
: Sel Inflamatoris
: Nukleus
: Pembuluh Darah
Gambar 1. Dorsal Horn Jaringan Spinal Cord
Mencit pada Kelompok Sham (A),
Kelompok Inflamasi (B), Kelompok
C FA + M K - 8 0 1 0 , 0 1 n m o l ( C ) ,
Kelompok CFA+MK-801 1,0 nmol (D),
dan Kelompok CFA+MK-801 20,0 nmol
(E) dengan Perbesaran 400x
Keterangan:
: Sel Inflamatoris
: Nukleus
Gambar 1. White Matter Jaringan Spinal Cord
Mencit pada Kelompok Sham (A),
Kelompok Inflamasi (B), Kelompok
C FA + M K - 8 0 1 0 , 0 1 n m o l ( C ) ,
Kelompok CFA+MK-801 1,0 nmol (D),
dan Kelompok CFA+MK-801 20,0 nmol
(E) dengan Perbesaran 400x
setelah injeksi CFA diamati pula melalui histologi
jaringan spinal cord. Pengamatan secara mikroskopis
jaringan spinal cord dilakukan setelah jaringan
diwarnai dengan hematoxyllin-eosin. Untuk
mengetahui pengaruh pemberian MK-801 dalam
menurunkan nyeri inflamasi, dilakukan pengamatan
terhadap adanya sel-sel inflamatoris di white matter
spinal cord dan perubahan histologi pada dorsal horn
spinal cord. Hasil pengamatan jaringan spinal cord
seperti pada gambar 1 dan 2.
Pada gambar 1 terlihat bahwa pada white
matter spinal cord hewan coba yang mengalami
inflamasi (B) terdapat peningkatan infiltrasi sel-sel
inflamatori dibandingkan kelompok sham (A). Pada
kelompok hewan coba yang mendapat injeksi MK-
801 dosis 0,01; 1,00; dan 20,00 nmol terdapat
penurunan infiltrasi sel-sel inflamatori jika
dibandingkan dengan kelompok yang mengalami
inflamasi (C, D, dan E). Adanya penurunan infiltrasi
sel-sel inflamatoris menunjukkan adanya perbaikan
dari kondisi inflamasi pada hewan coba dengan
pemberian MK-801.
Perubahan pada area dorsal horn dari
spinal cord juga diamati mengingat area ini sebagai
pusat penghantaran nyeri. Pada dorsal horn spinal
cord pada hewan coba yang mendapat injeksi MK-
801 dosis 0,01 nmol (C), nukleolus tampak tidak
berbeda jelas dengan nukleus. Infiltrasi sel-sel
inflamatoris terlihat lebih sedikit daripada kelompok
inflamasi (B) di area dorsal horn spinal cord dan
jaringan interstitial tampak lebih rapat jika
dibandingkan dengan kondisi inflamasi, selain itu
pembuluh darah yang tampak lebih sedikit jika
dibandingkan dengan kelompok inflamasi (B). Pada
hewan coba yang mendapat injeksi MK-801 dengan
dosis 1,00 nmol (D) tampak bahwa infiltrasi sel-sel
inflamatoris pada daerah dorsal horn spinal cord
semakin berkurang jika dibandingkan dengan
kelompok inflamasi. Tampak nukleolus yang
semakin tidak prominent dan jaringan interstitial
yang tampak lebih rapat jika dibandingkan dengan
kelompok inflamasi (B). Pembuluh darah tampak
sangat sedikit pada kelompok yang mendapat injeksi
MK-801 1,00 nmol. Sedangkan pada pemberian MK-
801 dengan dosis 20,00 nmol (E), tampak infiltrasi
sel-sel inflamatori lebih sedikit pada daerah dorsal
horn spinal cord jika dibandingkan dengan kelompok
inflamasi. Nukleolus tampak tidak prominent jika
A
B
C
D
E
A
B
C
D
E
Pengaruh Pemberian Antagonis ......
30
dibandingkan dengan kelompok inflamasi, namun
kondisi nukleolus tidak berbeda jauh jika
dibandingkan dengan kelompok yang mendapat MK-
801 0,01 atau 1,00 nmol. Jaringan interstitial tampak
lebih rapat serta pembuluh darah yang tampak lebih
sedikit daripada kelompok inflamasi. Terjadinya
penurunan infiltrasi sel-sel inflamatoris pada white
matter spinal cord dan perbaikan histologi dorsal
horn spinal cord mendekati histologi pada kelompok
sham menunjukkan adanya penurunan kondisi nyeri
inflamasi pada kelompok hewan coba yang
mendapatkan injeksi MK-801.
Reseptor NMDA telah diketahui memiliki
peranan penting dalam penghantaran rasa nyeri dan
sensitisasi nyeri (Petrenko et al., 2003). Secara klinis,
antagonis reseptor NMDA seperti ketamin,
memantin, amantadin, dan dekstrometorfan telah
digunakan untuk mengatasi kondisi nyeri kronik
(Sang, 2000; Shu et al., 2008). Namun manfaat terapi
tersebut terbatasi oleh afinitas dan potensi yang
rendah sehingga kurang efektif dalam pengatasan
nyeri kronik, sehingga dibutuhkan antagonis reseptor
NMDA yang lebih poten dan selektif (Paoletti &
Neyton, 2007; Parsons et al., 2007). Salah satu
an t agon i s r e sep to r NMDA yang s edang
dikembangkan adalah MK-801. Studi secara in vitro
melalui receptor binding assay telah menunjukkan
bahwa MK-801 merupakan antagonis nonkompetitif
reseptor NMDA yang sangat poten (Dravid et al.,
2007). Oleh karena itu pada penelitian in vivo ini
dilakukan pengamatan terhadap pengaruh pemberian
MK-801 pada kondisi nyeri kronik, yaitu nyeri
inflamasi. Parameter yang diamati meliputi waktu
ketahanan terhadap stimulus panas, tebal plantar, dan
histologi jaringan spinal cord. Hewan coba yang
dipilih pada penelitian ini adalah mencit karena
merupakan subyek penelitian yang memiliki
kemiripan sistem fisiologis terkait penghantaran
nyeri antara manusia dan mencit, serta karakter
perkembangbiakkannya yang cepat.
Pada penelitian ini digunakan CFA karena
mampu menyebabkan inflamasi pada hewan coba
dengan jangka waktu yang cukup panjang yaitu 21
hari dengan model inflamasi yang menyerupai
kondisi in vivo sehingga lebih alami. Kondisi
inflamasi muncul 24 jam setelah pemberian CFA
yang ditandai dengan peningkatan tebal plantar
secara bermakna (p<0,001) dan penurunan yang
bermakna pada parameter waktu ketahanan hewan
coba terhadap stimulus panas (p<0,001) jika
dibandingkan dengan kelompok sham yaitu
kelompok yang diberikan injeksi normal saline (NS).
Penurunan waktu ketahanan hewan coba terhadap
stimulus panas menunjukkan tejadinya hiperalgesia
yang merupakan tanda berkembangnya nyeri kronik.
Sedangkan peningkatan tebal plantar menunjukkan
munculnya inflamasi pada hewan coba. Penurunan
waktu ketahanan hewan coba terhadap stimulus
panas dan peningkatan tebal plantar mencit mencapai
maksimum pada hari ke-7 setelah penginjeksian
CFA. Lipopolisakarida dari Mycobacterium
tuberculosis yang telah mati dalam CFA
bertanggungjawab atas terjadinya inflamasi pada
hewan coba melalui aktivasi monosit (Calder, 2006).
CFA menginduksi inflamasi secara lebih alami
melalui rangkaian pengaktifan sistem imun, terutama
interleukin-1β, yang kemudian menyebabkan
upregulasi NGF sehingga terjadi hipersensitivitas
terhadap nyeri (Garabedian et al . , 1995).
Hiperalgesia yang terjadi setelah injeksi CFA juga
dikarenakan adanya peningkatan reaktivitas reseptor
NMDA dimana terjadi pergeseran hiperpolarisasi
pada potensial aktivasi reseptor NMDA (Guo &
Huang, 2001). Hal ini juga didukung dengan studi
oleh Yang et al. (2009) menunjukkan bahwa injeksi
CFA menyebabkan peningkatan reaktivitas subunit
NR1 reseptor NMDA dan peningkatan densitas
subtipe NR2B reseptor NMDA.
Stimulasi nyeri yang bersifat persisten oleh
CFA akan menyebabkan adaptasi atau homeostasis
intraseluler sel saraf. Sel saraf pada otak dan spinal
cord akan mengalami plastisitas melalui upregulasi
jenis dan jumlah reseptor dan bertanggungjawab
pada penghantaran nyeri (Suroto, 2006; Khotib &
Zulkarnain, 2007). Di samping itu juga terjadi
remodelling sel saraf dengan pertumbuhan dendrit
(sprouting) dan percabangan pada akson terminal,
sehingga terjadi peningkatan synaptogenesis. Hal
tersebut mengakibatkan peningkatan ikatan glutamat
pada reseptor NMDA dan memperparah terjadinya
sensitisasi sentral. (Khotib & Zulkarnain, 2007).
Perubahan-perubahan tersebut merupakan awal
terjadinya nyeri kronik (Suroto, 2006).
Pada hari ke-7 setelah injeksi CFA, setelah
hewan coba mengalami inflamasi, diberikan MK-801
dengan 5 dosis yang berbeda melalui injeksi
intratekal pada 5 kelompok hewan coba yang
berbeda, sedangkan injeksi plasebo (25%
DMSO/WFI) diberikan secara intratekal pada
kelompok sham dan kelompok yang mengalami
inflamasi. Plasebo yang diberikan pada hewan coba
merupakan solvent yang digunakan untuk melarutkan
MK-801. Solvent ini dipilih karena MK-801
memiliki kelarutan yang besar pada DMSO
31
Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011
(>20mg/mL), sedangkan konsentrasi 25% DMSO
dipilih karena dapat melarutkan MK-801 dan aman
bagi hewan coba karena tidak menimbulkan 3toksisitas (Brobyn, 1975; Anonim , 2010). Selain itu,
konsentrasi DMSO yang digunakan pada penelitian
ini belum mencapai konsentrasi yang dapat
menimbulkan efek analgesik-antiinflamasi (70%
DMSO) (Jacob & Herschler, 1985). Dosis MK-801
yang diberikan adalah 0,01; 0,10; 1,00; 10,00; dan
20,00 nmol melalui rute injeksi intratekal. Dosis
p e m b e r i a n M K - 8 0 1 d i t e n t u k a n d e n g a n
memperhatikan dosis toksik dari MK-801. Penelitian
menunjukkan bahwa dosis MK-801 yang melebihi
30,00 nmol dapat menimbulkan efek samping
psikotomimetik (Zhang et al.,2005). Oleh karena itu
pada penelitian ini ditetapkan dosis tertinggi adalah
20,00 nmol yang lebih kecil dari dosis toksik,
sedangkan dosis pemberian lainnya yang lebih kecil
didapatkan dengan pengenceran bertingkat. Pada
penelitian ini MK-801 diberikan melalui rute
intratekal dikarenakan Gate Control Theory of Pain
menyebutkan bahwa dorsal horn pada spinal cord
merupakan gerbang utama penghantaran nyeri dari
perifer menuju sistem saraf pusat (Dickenson, 2002;
Flossos, 2004). Oleh karena itu, pemberian MK-801
melalui rute intratekal bertujuan agar obat dapat
langsung bekerja pada dorsal horn pada spinal cord
dan memberikan efek penghambatan terhadap
penghantaran rangsangan nyeri dengan lebih cepat.
Injeksi intratekal, baik plasebo (25% DMSO/WFI)
maupun MK-801, diberikan selama 7 hari dengan
frekuensi pemberian satu kali injeksi setiap hari.
Hasil pengamatan terhadap parameter
waktu ketahanan terhadap stimulus panas
menunjukkan bahwa terdapat perbaikan pada kondisi
inflamasi pada kelompok hewan coba yang telah
diberikan injeksi intratekal MK-801. Hal ini ditandai
dengan peningkatan secara bermakna waktu
ketahanan hewan coba terhadap stimulus panas pada
semua kelompok dosis MK-801 jika dibandingkan
dengan kelompok yang mengalami inflamasi
(p<0,001). Pada penelitian ini dilakukan uji statistik
untuk mengetahui pengaruh pemberian MK-801 dari
hari ke hari selama 7 hari pemberian. Hasil
menunjukkan bahwa peningkatan bermakna pada
parameter waktu ketahanan hewan coba terhadap
stimulus panas mulai terjadi pada hari ke-8 di semua
kelompok dosis kecuali dosis 10 nmol, jika
dibandingkan terhadap kelompok yang mengalami
inflamasi. Hal ini dimungkinkan karena adanya
faktor psikis yang juga mempengaruhi respon hewan
coba terhadap stimulus nyeri yang tidak teramati
pada penelitian ini (Woolf, 2004). Peningkatan
bermakna juga terjadi pada hari berikutnya yaitu hari
ke 10, hari ke-12, dan hari ke-14 seperti terlihat pada
tabel 1. Kemampuan MK-801 dalam mengatasi nyeri
kronik dikarenakan adanya penghambatan pada
penghantaran stimulus nyeri di gerbang utama
penghantaran nyeri tepatnya pada reseptor NMDA di
dorsa l horn pada sp ina l cord . MK-801
mengantagonisasi reseptor NMDA secara
nonkompetitif pada PCP binding site dari reseptor
NMDA sehingga akan menghambat pemasukkan ion 2+Ca , dan akibatnya, berbagai jalur signaling
intraseluler meliputi aktivasi Nitric Oxide Synthase
(NOS) , Protein Kinase C (PKC), dan Calmodulin
Dependent Kinase II (CaMKII) akan terhambat
sehingga perjalanan stimulus nyeri dan sensitisasi
nyeri dapat dihambat (Hudspith et al., 2003; Lipton,
2004).
Pada hari ke-14, setelah diberikan injeksi
intratekal MK-801 sebanyak 7 kali, terlihat bahwa
waktu ketahanan terhadap stimulus panas meningkat
pada semua kelompok hewan coba yang diberikan
injeksi intratekal MK-801 dengan 5 dosis berbeda.
Namun peningkatan waktu ketahanan terhadap
stimulus panas pada dosis MK-801 10,00 dan 20,00
nmol tidak lebih tinggi jika dibandingkan dengan
dosis MK-801 0,01; 0,10; dan 1,00 nmol. Hal ini
terlihat dari nilai waktu ketahanan terhadap stimulus
panas dimana dosis MK-801 0,01 nmol mampu
meningkatkan waktu ketahanan terhadap stimulus
panas menjadi 14,04 detik; dosis MK-801 0,10 nmol
mampu meningkatkan waktu ketahanan terhadap
stimulus panas menjadi 12,56 detik; dosis MK-801
1,00 nmol mampu meningkatkan waktu ketahanan
terhadap stimulus panas menjadi 14,51 detik; dosis
MK-801 10,00 nmol mampu meningkatkan waktu
ketahanan terhadap stimulus panas menjadi 10,57
detik; dan dosis MK-801 20,00 nmol mampu
meningkatkan waktu ketahanan terhadap stimulus
panas menjadi 11,50 detik. Sedangkan waktu
ketahanan terhadap stimulus panas pada kelompok
yang mengalami inflamasi pada hari ke-14 adalah
6,66 detik. Selain itu, terlihat dari nilai signifikansi
masing-masing dosis MK-801 terhadap kelompok
yang mengalami inflamasi (p<0,001 untuk MK-801
dosis 0,01 nmol; p=0,001 untuk MK-801 dosis 0,01
nmol; p<0,001 untuk MK-801 dosis 1 nmol; p=0,022
untuk MK-801 dosis 10 nmol; p=0,006 untuk MK-
801 dosis 20 nmol). Berbeda dengan penelitian oleh
Mao et al. (1992), dari hasil pada penelitian terlihat
bahwa pemberian injeksi intratekal MK-801 tidak
menunjukkan dose dependent manner. Hal ini
Pengaruh Pemberian Antagonis ......
32
dimungkinkan karena faktor perbedaan jenis strain
hewan coba penelitian yang digunakan, faktor
perbedaan kondisi lingkungan yang mempengaruhi
seperti suara dan suhu. Selain itu, efek samping dari
MK-801 dosis tinggi yang diakibatkan upregulasi
reseptor NMDA subtipe NR2A dapat mengganggu
pengamatan respon motoris pada saat uji nosiseptif
(Jones, 2003; Alilain & Goshgarian, 2007).
Pengamatan pada parameter tebal plantar
menunjukkan bahwa dosis MK-801 0,01; 1,00; dan
10,00 nmol memberikan penurunan tebal plantar
secara bermakna jika dibandingkan dengan
kelompok yang mengalami inflamasi (p<0,001 untuk
dosis 0,01 nmol; p=0,005 untuk dosis 1,00 nmol; dan
p=0,015 untuk dosis 10,00 nmol), sedangkan pada
pemberian MK-801 dosis 0,10 dan 20,00 nmol tidak
terjadi penurunan tebal plantar secara bermakna jika
dibandingkan dengan kelompok yang mengalami
inflamasi (p=0,309 untuk dosis 0,10 nmol; dan
p=0,052 untuk dosis 20,00 nmol). Hasil yang
f luktuat i f pada pengukuran tebal plantar
dimungkinkan karena kompleksnya patofisiologi
inflamasi, sedangkan MK-801 memiliki mekanisme
aksi antagonisasi pada reseptor NMDA yang hanya
salah satu faktor dalam patofisiologi inflamasi.
Spinal cord merupakan jaringan yang
penting bagi integrasi dan pemrosesan informasi
nosiseptif (Petrenko et al., 2003). Untuk mempelajari
perubahan jaringan spinal cord, terutama pada daerah
dorsal horn dan white matter, maka dilakukan
pengamatan jaringan spinal cord yang telah diwarna
dengan pewarnaan hematoxyllin-eosin. Jaringan
spinal cord yang diwarna dengan pewarna ini akan
memberikan warna merah muda pada sitoplasma
sedangkan nukleus akan memberikan warna biru tua
(Snell, 1984). Dengan perbesaran 400X, pada white
matter dari spinal cord kelompok inflamasi terlihat
adanya infiltrasi sel-sel inflamatoris yang lebih
banyak daripada kelompok sham . Sel-sel
inflamatoris yang menginfiltrasi spinal cord
berbentuk bulat kecil dan dengan pewarnaan
hematoxyllin-eosin tampak berwarna biru gelap
hampir kehitaman. Adanya inflamasi setelah injeksi
CFA menyebabkan terjadinya infiltrasi monosit pada
kondisi kronik (Hausmann, 2003). Pada kelompok
sham yang diberikan injeksi NS intraplantar, tetap
terdapat infiltrasi sel inflamatoris walaupun lebih
sedikit jika dibandingkan dengan kelompok
inflamasi. Hal ini dikarenakan adanya kerusakan
jaringan pada saat dilakukan injeksi intraplantar NS.
Selain itu, pada dorsal horn spinal cord kelompok
inflamasi teramati bahwa nukleolus tampak lebih
prominent jika dibandingkan dengan kelompok
sham. Hal ini disebabkan karena adanya peningkatan
aktivitas neuron saat terjadi inflamasi akibat induksi
CFA, dimana neuron harus terus melepaskan dan
menerima neurotransmitter glutamat (Snell, 1984).
Pada area dorsal horn juga dapat terlihat jaringan
interstitial yang lebih renggang dan pembesaran
pembuluh darah jika dibandingkan dengan kelompok
sham. Hal ini disebabkan adanya dilatasi pembuluh
darah dan peningkatan permeabilitas pembuluh darah
yang menyebabkan pembuluh darah terlihat jelas
dengan pewarnaan hematoxyllin-eosin, serta adanya
perembesan se rum dar i pembuluh darah
menyebabkan ja r ingan in te rs t i t i a l makin
merenggang. Vasodilatasi dan peningkatan
permeabilitas pembuluh darah merupakan akibat dari
munculnya prostaglandin E di sistem saraf pusat 2
(Suroto, 2006).
Pengamatan jaringan spinal cord dilakukan
pada kelompok hewan coba yang mendapat injeksi
intratekal MK-801 dosis 0,01; 1,0; dan 20,0 nmol.
Pengamatan secara mikroskopis menunjukkan
adanya perbaikan pada kondisi jaringan spinal cord
hewan coba. Pada white matter spinal cord hewan
coba yang mengalami inflamasi, terdapat infiltrasi
sel-sel inflamatori. Pada kelompok hewan coba yang
mendapat injeksi MK-801 dosis 0,01; 1,0; dan 20,0
nmol terdapat penurunan infiltrasi sel-sel
inflamatoris jika dibandingkan dengan kelompok
yang mengalami inflamasi. Pada area dorsal horn
dari spinal cord juga terlihat bahwa adanya
penurunan jumlah sel-sel inflamatoris yang
menginfiltrasi daerah dorsal horn spinal cord jika
dibandingkan dengan kelompok yang mengalami
inflamasi. Nukleolus tampak tidak berbeda jauh
dengan nukleus atau tampak semakin tidak
prominent jika dibandingkan dengan kelompok
inflamasi. Selain itu, jaringan interstitial tampak
lebih rapat jika dibandingkan dengan kelompok
inflamasi dan pembuluh darah yang tampak telah
berkurang. Penurunan infiltrasi sel-sel inflamatoris
pada white matter spinal cord dan perbaikan
histologi neuron dan jaringan interstitial di dorsal
horn spinal cord menunjukkan penurunan kondisi
nyeri inflamasi pada kelompok hewan coba yang
mendapatkan MK-801 sebab MK-801 akan
menghambat aktivasi Mitogen Activated Protein
Kinase (MAPK) yang selanjutnya menghambat
transkripsi gen dan menurunkan sintesis COX-2
(Twyman, 1998).
33
Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011
Daftar Pustaka
Alilain, W. J. dan H. G. Goshgarian. 2007. MK-801
Upregulates NR2A Protein Levels and
Induces Functional Recovery of the
Ipsilateral Hemidiaphragm Following Acute
C2 Hemisection in Adult Rats. The Journal
of Spinal Cord Medicine. 30 (4) : 346-354.
Anonim. 2010, (+)-MK-801 Hydrogen Maleate,
http://www.sigmaaldrich.com/, diakses
tanggal 15 Agustus 2010.
Brenner, G. J., 2002. Neuronal Basis of Pain. Dalam:
Ballantyne, J., Fishman, S., dan Abdi, S.
(Eds). The Massachusetts General Hospital
Handbook of Pain Management. Edisi ke-2,
Philadelphia: Lippincott Williams and
Wilkins Publisher. 7.
Brobyn, R. D., 1975. The Human Toxicology of
Dimethyl Sulfoxide. http://www.dmso.org/
diakses tanggal 15 Agustus 2010.
Calder, P. C., 2006. n-3 Polyunsaturated Fatty Acids,
Inflammation, and Inflammatory Diseases.
American Journal of Clinical Nutrition, 83
:1505S-1519S.
Carr, D. B., dan L. C.Goudas. 1999. Accute pain.
Lancet, 353 : 2051-2058.
Copenhaver, W., D.E..Kelly dan R.L.Wood. 1978.
Bailey's Textbook of Histology, Asian
Edition. Edisi ke-17, Baltimore: The
Williams and Wilkins Company, 350-351.
Dickenson, A. H., 2002. Editorial I, Gate Control
Theory of Pain Stands the Test of Time.
British J. Anaesthesia, 88 (6) :1-3.
D'Mello, R., dan A.H. Dickenson. 2008. Spinal Cord
Mechanisms of Pain. British Journal of
Anaesthesia, 100 (4) :1-9.
Dravid, S. M., Erreger, K., Yuan, H., Nicholson, K.,
Le, P., Lyuboslavsky, P., Almonte, A.,
Murray, E., Mosley, C., Barber, J., French,
A., Balster, R., Murray, T. F., dan Traynelis,
S. F., 2007. Subunit-Specific Mechanisms
and Proton Sensitivity of NMDA Receptor
Channel Block. Journal of Physiology, 581
(1) :107–128.
Flossos, A., 2004. Αn Introduction to the
Neurobiology of Pain. The Greek E-Journal
of Perioperative Medicine, 2 : 2-10.
Garabedian, B., S., Poole, S., Allchorne, A., Winter,
J., dan Woolf, C., J., 1995. Contribution of
Interleukin- 1β to the Inflammation-
Induced Increase in Nerve Growth Factor
Levels and Inflammatory Hyperalgesia.
British J. Pharmacology, 115 :1265-1275.
Guo, H., dan L.Y.M.Huang. 2001. Alteration in the
Voltage Dependence of NMDA Receptor
Channels in Rat Dorsal Horn Neurones
Following Peripheral Inflammation. J.
Physiology, 537 (1) :115-123.
Hausmann , O . N. , 2003 . Pos t - t r aumat ic
Inflammation following Spinal Cord Injury.
Spinal Cord, 41 : 369-378.
Hudspith, M.J., P.J.Siddall and R. Munglani. 2003.
Physiology of Pain, Philadelphia: Lippicott-
Raven Publisher. 267-285.
Jacob, S. W., dan Herschler, R., 1985. Pharmacology
of DMSO. http://www. dmso.org/, diakses
tanggal 15 Agustus 2010.
Jones, J. M. M., 2003. Effects of MK-801 on Opioid
Antinociception: an Examination of
Morphine, U50,488H and SNC80 in Male
and Female Rats. Wahington: Washington
State University.
Kartini, 2007. Hubungan Nyeri dengan Gangguan
Aktivitas Interpersonal pada Individu Usia
50 Tahun Keatas di Kabupaten Purworejo.
Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada.
Khotib, J., dan B.S.Zulkarnain. 2007. Penggunaan
Analgetika pada Berbagai Bidang Terapi.
Proceeding Seminar Nasional Farmasi
K l i n i k : I m p l e m e n t a s i P e l a y a n a n
Kefarmasian dalam Tatanan Klinik dan
Update Farmakoterapi. 82-94.
Kocaeli, H., E. Korfali, H. Öztürk, N. Kahveci dan
S.Yılmazlar. 2005. MK-801 Improves
Neurological and Histological Outcomes
after Spinal Cord Ischemia Induced by
Transient Aortic Cross-Clipping in Rats.
Surgical Neurology, 64 (2) : S22-S26.
Köhr, G. 2007. NMDA Receptor Antagonists: Tools
in Neuroscience with Promise for treating
CNS Pathologies. J. Physiology, 581 (1) :
hal.1-2.
Le Bars, D., Gozariu, M., dan Cadden, S. W., 2001.
A n i m a l M o d e l s o f N o c i c e p t i o n .
Pharmacological Reviews, Vol. 53, No. 4,
hal. 593-652.
Lipton, S., A., 2004. Failures and Successes of
NMDA Receptor Antagonists: Molecular
Basis for the Use of Open-Channel
Blockers like Memantine in the Treatment
of Acute and Chronic Neurologic Insults. J.
Am. Soc. Exp. Neuro Therapeutics, 1 :101-
110.
Lynch, M., dan Watson, C. P. N, 2006. The
Pharmacotherapy of Chronic Pain: A
Pengaruh Pemberian Antagonis ......
34
35
Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011
Review. Pain Research and Management,
11 (1) :1-28.
O'Neil, C. K., 2008. Pain Management. Dalam:
Marie A. Chisholms-Burns, Barbara G.
Wells, Terry Schwinghammer, Patrick M.
Malone, Jill M. Kolesar, John C.
Rotschafer, Joseph T. DiPiro (Eds.).
Pharmacotherapy Principles & Practice.
Edisi ke-7, New York: McGraw-Hill
Medical Publishing Division. 1089-1104.
Page, C., M. Curtis, M. Suter, M.Walker dan B.
Hoffmann. 2002. Integrated Pharmacology.
Edisi ke-2, London: Mosby. 272-280.
Paoletti, P., dan Neyton, J., 2007. NMDA Receptor
Subunits: Function and Pharmacology.
Current Opinion in Pharmacology on line,
Vol. 1 , hal. 1-23.
Parsons, C. G., A. Stöffler dan W. Danysz. 2007.
Memantine: a NMDA Receptor Antagonist
that Improves Memory by Restoration of
Homeostasis in the Glutamatergic System -
too little activation is bad, too much is even
worse. Neuropharmacology. 53:. 699-723.
Petrenko, A. B., T. Yamakura, H. Baba dan K.
Shimoji. 2003. The Role of N-Methyl-D-
Aspartate (NMDA) Receptors in Pain: A
Review. Anesthesia and Analgesia. 97 :.
1108-1116.
R o a c h , S . , 2 0 0 3 . I n t r o d u c t o r y C l i n i c a l
Pharmacology. Edisi ke-7, Philadelphia:
Lippincott Williams snd Wilkins. 150-179.
Sang, C. N., 2002. NMDA-Receptor Antagonists in
Neuropathic Pain: Experimental Methods to
Clinical Trials. J. Pain and Symptom
Management. 19 (1) : 21-25.
Shu, H., M. Hayashida, W. Huang, K. An, S. Chiba,
K. Hanaoka dan H. Arita. 2008. The
Comparison of Effects Processed Aconiti
Tuber, U50488H and MK-801 on the
Antinociceptive Tolerance to Morphine. J.
Ethnopharmacology. 117 :158-165.
Snell, R., S., 1984. Clinical and Functional Histology
for Medical Students. Edisi ke-1, Boston:
Little, Brown and Company, hal. 272-274.
Suroto, 2006. Aspek Neurobiologi Nyeri dan
In f lamas i . Da lam: Leksmono. P. ,
Mohammad Saiful Islam, dan Yudha
Haryono (Eds.). Kumpulan Makalah
Pertemuan Ilmiah Nasional II Perhimpunan
Dokter Spesialis Saraf Indonesia. Surabaya:
Airlangga University Press. 51-66.
Torres, F. V., M. Filho, C. Antunes, E. Kalinine, E.,
Antoniolli, L.V.C. Portela, R.O. Souza dan
A.B.L. Tort. 2009. Electrophysiological
Effects of Guanosine and MK-801 in a
Quinolinic Acid-Induced Seizure Model.
Experimental Neurology. 221 (2): 296-
306.
Twyman, R. M. 1998. Advance Molecular Biology:
A Concise Reference. New Delhi: Viva
Books Private Limited. 423-442.
Vezzani, A., R. Serafini, M.A. Stasi, S. Caccia, I.
Conti, I., R.V. Tridico dan R.Samanin.
1989. Kinetics of MK-801 and its effect on
quinolinic acid-induced seizures and
neurotoxicity in rats. J.Pharm and Exp
Therap. 249 (1) : 278-283.
Woolf, C. J., 2004. Pain: Moving from Symptom
Control toward Mechanism-Specific
Pharmacologic Management. Annals of
Internal Medicine. 140 :441-451.
Yang, X., H.B. Yang, Q.J. Xie, X.H. Liu dan X.H.
Hu. 2009. Peripheral inflammation
increased the synaptic expression of NMDA
receptors in spinal dorsal horn. Pain.
purchase 144 (1) : 162-169.
Yoon, M. H., H.B. Bae dan J.I. Choi. 2005.
Antinociceptive Interactions between
Intrathecal Gabapentin and MK801 or
NBQX in Rat Formalin Test. J. Korean
Medical Sci. 20 :307-312.
Zhang, R. X., L. Wang, X. Wang, K. Ren, B.M.
B e r m a n d a n L . L a o . 2 0 0 5 .
Electroacupuncture Combined with MK-
801 Prolongs Anti-hyperalgesia in Rats
w i t h P e r i p h e r a l I n f l a m m a t i o n .
Pharmacology, Biochemistry, and Behavior.
81 :146-151.
Pengaruh Pemberian Antagonis ......
36