1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/vetmed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m...

15
1 / 3

Upload: others

Post on 08-Mar-2020

3 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

1 / 3

Page 2: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Table of Contents

No. Title Page

1 Production and Specificity Testing of Monoclonal Antibodies to Bovine ZonnaPellucida 3 Deglycosylated (Mab-bZP3dG) for Woman ImmunocontraceptiveVaccine

1 - 4

2 Potency of Crude Spirulina on Protein Efficiency Ratio in Laying Hen 5 - 8

3 H-Y antisera Preparation and X Chromosomal Receptor Tracer as SexDetermination Prototype

9 - 14

4 Erythrocyte's Form Changes in Dog's Blood Smear Before and After the StorageUsing Citrate Phosphate Dextrose

15 - 18

5 Avian Influenza H5N1 Vaccine Candidate for Chicken from East Java Isolate Virus 19 - 24

6 Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801Terhadap Penurunan Sensasi Nyeri Inflamasi pada Mencit Putih (MusMusculus) Strain Balb/C

25 - 36

7 Exploration Cellulolytic of Bacterium of Rumen Liquid Beef Cattle As Inoculum ofWaste Agriculture

37 - 42

8 Respon hMG Toward Ovarium Development In Goat 43 - 48

9 Identification Of Pregnancy Associated Glycoprotein (PAG) From Milk Of PregnantDairy Cattle

49 - 52

10 The Role Of Soil As A Helminths Transmitter Around The Habitas of Babirusa 53 - 56

11 Potency of Brown Seaweed (Sargassum duplicatum Bory) Ethanol and EthylAcetic Fraction to Malondialdehyde Concentration Decreasing and HistologicalRetriveal of IBD (Inflammatory Bowel Disease) Rat Small Intestinal Jejunum

57 - 64

12 Blood Glucose and Total Blood Protein Profile in Sheep Provided With Lactic AcidBacteria and Yeast on King Grass and Rice Straw

65 - 70

13 Effect Of Pegagan (Centella Asiatica) Extract in Ovariectomized Wistar-strainRattus norvegicus On Epithelial Proliferation Of Vaginal Wall

71 - 76

14 Excessive Dose Of Vitamine A On Skeletal Development In The Mice Embryos 77 - 80

2 / 3

Page 3: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Vol. 4 - No. 1 / 2011-02TOC : 6, and page : 25 - 36

Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801 Terhadap Penurunan Sensasi NyeriInflamasi pada Mencit Putih (Mus Musculus) Strain Balb/C

Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801 Terhadap Penurunan Sensasi NyeriInflamasi pada Mencit Putih (Mus Musculus) Strain Balb/C

Author :Susilo, Imam | .Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran Universitas AirlanggaGondo, Lisa | .Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas AirlanggaAji, Rahmad |Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas AirlanggaBambang S.Z | .Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas AirlanggaKhotib, Junaidi | .Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga

Abstract

Chronic pain, such as inflammatory pain, is difficult to manage. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA) receptor is a key moleculeinvolved in the pain pathway and sensitization. The present study was design to investigate the efficacyof a novel potentnon-competitive NMDA receptor antagonist, MK-801, in relieving inflammatory pain in mice. A model of inflammatory painstate was induced by intraplantar injection of Complete Freund's Adjuvant (CFA). NMDA receptor antagonist MK-801 wasadministered intrathecally once a day for 7 consecutive days at 0.01, 0.10, 1.00, 10.00, or 20.00 nmol doses a week afterCFA injection. Thermal hyperalgesia was measured on days 0, 1, 3, 5, 7,8, 10, 12, 14, and 21 after CFA injection bywarm plate. Paw thickness at the ipsilateral site was also measured on days 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, and 21after CFA injection. Histology of the spinal cord tissue was examined by lightmicroscope following haematoxylline-eosinstaining. The results showed that MK-801 given at 0.01-20.00 nmoldosage significantly increased mice's latency onthermal stimulation compared with placebo (p<0.001). Pawthickness was also significantly decreased to compare withplacebo after intrathecal injection of MK-801 at 0.01, 1.00and 10.00 nmol dosage (p<0,001; p=0,005; p=0,015respectively). Whereas MK-801 administration at 0.01, 1.00, and20.00 nmol could decrease the inflamatory cellsinfiltration and recover the dorsal horn histology compare with placebo. Taken together, these results show that NMDAreceptor antagonist, MK-801, is effective in relieving the inflammatory pain.

Keyword : Chronic, Pain, Inflammatory, Pain, MK-801, NMDA, receptor, .,

Daftar Pustaka :1. Lipton, S., A., (2004). Failures and Successes of NMDA Receptor Antagonists: Molecular Basis for the Use of Open-Channel Blockers like Memantine in the Treatment of Acute and Chronic Neurologic Insults. United States : J. Am. Soc.Exp. Neuro Therapeutics, 1 :101-110.2. Kocaeli, H., E. Korfali, H. Öztürk, N. Kahveci dan S. Yılmazlar, (2005). MK-801 Improves Neurological andHistological Outcomes after Spinal Cord Ischemia Induced by Transient Aortic Cross-Clipping in Rats. United States :Surgical Neurology, 64 (2) : S22-S26.3. Alilain, W. J. dan H. G. Goshgarian, (2007). MK-801 Upregulates NR2A Protein Levels and Induces FunctionalRecovery of the Ipsilateral Hemidiaphragm Following Acute C2 Hemisection in Adult Rats. United States : The Journal ofSpinal Cord Medicine. 30 (4) : 346-354

Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)

3 / 3

Page 4: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801 Terhadap Penurunan Sensasi Nyeri Inflamasi pada Mencit Putih (Mus Musculus) Strain Balb/C

1 2 2 2 2Imam Susilo , Lisa Gondo , Rahmad Aji , Bambang SZ , Junaidi Khotib

1Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Unair2 Departemen Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi, Unair

Kampus A. Jl. Mayjen Prof. Dr. Moestopo 48 Surabaya 60131 Telp : 031-5020251, Fax. 031-5022472

Email :

Abstract

Chronic pain, such as inflammatory pain, is difficult to manage. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA) receptor is a key molecule involved in the pain pathway and sensitization. The present study was design to investigate the efficacy of a novel potent non-competitive NMDA receptor antagonist, MK-801, in relieving inflammatory pain in mice. A model of inflammatory pain state was induced by intraplantar injection of Complete Freund's Adjuvant (CFA). NMDA receptor antagonist MK-801 was administered intrathecally once a day for 7 consecutive days at 0.01, 0.10, 1.00, 10.00, or 20.00 nmol doses a week after CFA injection. Thermal hyperalgesia was measured on days 0, 1, 3, 5, 7, 8, 10, 12, 14, and 21 after CFA injection by warm plate. Paw thickness at the ipsilateral site was also measured on days 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, and 21 after CFA injection. Histology of the spinal cord tissue was examined by light microscope following haematoxylline-eosin staining. The results showed that MK-801 given at 0.01-20.00 nmol dosage significantly increased mice's latency on thermal stimulation compared with placebo (p<0.001). Paw thickness was also significantly decreased to compare with placebo after intrathecal injection of MK-801 at 0.01, 1.00 and 10.00 nmol dosage (p<0,001; p=0,005; p=0,015 respectively). Whereas MK-801 administration at 0.01, 1.00, and 20.00 nmol could decrease the inflmammatory cells infiltration and recover the dorsal horn histology compare with placebo. Taken together, these results show that NMDA receptor antagonist, MK-801, is effective in relieving the inflammatory pain.

Keywords : Chronic pain, Inflammatory pain, MK-801, NMDA receptor

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

Pendahuluan

Nyeri merupakan pengalaman sensoris dan

emosional yang tidak menyenangkan yang

berhubungan dengan kerusakan jaringan aktual

maupun potensial (Le Bars et al., 2001; Roach, 2003;

Lynch & Watson, 2006; D'Mello & Dickenson, 2008;

O'Neil, 2008), termasuk proses inflamasi (Woolf,

2004). Rasa nyeri ini dapat menurunkan kualitas

hidup penderita yang saat ini menjadi problem

signifikan dimana 80% individu di dunia

mengeluhkan rasa nyeri (O'Neil, 2008). Di Indonesia

sendiri, 25-50% penderita usia lanjut mengalami

sensasi nyeri yang berdampak negatif bagi kualitas

hidup (Kartini, 2007). Nyeri juga memberikan

dampak signifikan terhadap keadaan finansial.

Menurut

anggaran untuk mengatasi nyeri

punggung bawah mencapai US$ 50 hingga 100

triliun per tahun (O'Neil, 2008). Oleh karena itu,

diperlukan manajemen terapi yang memadai untuk

mengontrol nyeri (Page et al., 2002; Woolf, 2004).

Persepsi nyeri inflamasi muncul melalui

rangkaian jalur penghantaran nyeri baik ascending

maupun descending pathway. Mediator inflamasi

yang muncul setelah kerusakan jaringan seperti nerve

The National Institute for Occupational

Safety and Health,

growth factor (NGF), bradikinin, dan prostaglandin

E berperan sebagai stimulus nyeri dan akan 2

mengaktivasi terminal perifer reseptor nyeri

(Brenner, 2002; Woolf, 2004). Transmisi stimulus

nyeri menuju dorsal horn korda spinalis melibatkan

serabut saraf Aδ dan C melalui jalur ascending (Page

et al., 2002; Woolf, 2004; D'Mello & Dickenson,

2008). Penghantaran selanjutnya, melibatkan

reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA). Reseptor

NMDA termasuk dalam golongan reseptor ionotropik

dengan kanal ion yang bersifat spesifik terhadap ion

logam bervalensi 2 dan beberapa molekul protein

kecil. Terdapat tiga subunit reseptor NMDA yaitu

NR1, NR2, dan NR3. Subtipe NR2B dan NR2D

diduga berperan penting pada sensasi nyeri (Petrenko

et al., 2003; Paoletti & Neyton, 2007). Aktivasi 2+ reseptor NMDA menyebabkan efluks Mg dan

2+ 2+influks Ca . Masuknya ion Ca mengaktifkan

berbagai protein pada jalur signaling intraseluler

yang terlibat dalam penghantaran informasi nyeri

(D'Mello & Dickenson, 2008). Remodeling akson

dan upregulasi fungsi reseptor NMDA seringkali

dihubungkan dengan sensitisasi sentral berupa

hiperalgesia dan alodinia (Petrenko et al., 2003;

Flossos, 2004).

25

Page 5: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Beberapa kelas obat yang selama ini

digunakan untuk mengatasi nyeri seperti Non-

Steroidal Anti-Inflammatory Drugs (NSAIDs),

analgesik non-opioid, maupun analgesik opioid

belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik

(Carr & Goudas, 1999; Roach, 2003). Studi

mengenai terapi nyeri kronik non-malignan oleh

Jovey et al. (2003) menyatakan bahwa opioid hanya

mampu menurunkan rasa nyeri sebesar 50%.

Disamping itu, manfaat klinis berbagai anti-nyeri

tersebut seringkali dibatasi oleh efek sampingnya

seperti pendarahan saluran cerna, hepatotoksisitas,

toleransi, bahkan ketergantungan. Oleh karena itu,

perlu dikembangkan alternatif strategi terapi baru

yang dapat mengatasi nyeri kronik. Antagonis

reseptor NMDA berpotensi digunakan sebagai

alternatif strategi terapi nyeri kronik mengingat

reseptor NMDA pada jaringan korda spinalis

merupakan gerbang utama yang berperan pada

penghantaran nyeri (Dickenson, 2002; Petrenko et al,

2003). Beberapa antagonis reseptor NMDA saat ini

telah digunakan secara klinis, antara lain ketamin,

memantin, amantadin, dan dekstrometorfan (Sang,

2000). Namun afinitas dan potensinya yang rendah

dalam mengantagonisas i reseptor NMDA

membuatnya kurang efektif guna mengatasi nyeri

kronik (Paoletti & Neyton, 2007; Parsons et al.,

2007).

Antagonis reseptor NMDA poten yang saat

ini sedang dikembangkan adalah MK-801, atau juga

dikenal sebagai dizocilpine. MK-801 merupakan

antagonis nonkompetitif reseptor NMDA yang

memiliki afinitas tinggi terhadap reseptor NMDA

dan lebih selektif dalam menghambat subtipe NR2A

dan NR2B (Paoletti & Neyton, 2007). Penelitian

yang dilakukan oleh Dravid et al. (2007)

menunjukkan potensi MK-801 yang tinggi dalam

mengantagonisasi reseptor NMDA dengan IC 50

sebesar 0,009 µM terhadap NR1/NR2B dan 0,015

µM terhadap NR1/NR2A. MK-801 bekerja dengan 2+menghambat influks Ca saat aktivasi reseptor

NMDA oleh glutamat (Köhr, 2007; Paoletti &

Neyton, 2007). Melalui reseptor tersebut, MK-801

diduga mampu mengatasi seizure, iskemia, toleransi

terhadap morfin (Vezzani et al., 1989; Kocaeli et al.,

2005; Yoon et al., 2005; Torres et al., 2009).

Penelitian ini ditujukan untuk mengetahui pengaruh

pemberian MK-801 pada penurunan nyeri inflamasi

kronik akibat induksi oleh complete Freund's

adjuvant (CFA). Injeksi CFA menimbulkan nyeri

inflamasi ireversibel yang lebih mirip dengan

patofisiologi karena inflamasi muncul melalui reaksi

i m u n d a l a m t u b u h t e r h a d a p k o m p o n e n

lipopolisakarida dinding sel bakteri dalam CFA 2(Anonim , 2008). Pengaruh pemberian MK-801

terhadap penurunan sensasi nyeri inflamasi diamati

dengan mengukur ketahanan hewan coba terhadap

stimulus panas (warm plate), tebal plantar hewan

coba, dan pengamatan terhadap histologi jaringan

spinal cord menggunakan metode histokimia dengan

pewarnaan hematoxyllin-eosin.

Materi dan Metode Penelitian

Bahan Penelitian

Bahan kimia yang digunakan dalam

penelitian ini adalah antagonis reseptor NMDA MK-

801 (Sigma), Complete Freund's Adjuvant p.a

(Sigma), Paraformaldehid 37%b/v (Bratachem),

K HPO .3H O (Bratachem), KH PO (Bratachem), 2 4 2 2 4

eter (E. Merck), normal Saline Steril (Otsuka) dan

alkohol 70% (Bratachem).

Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian

ini adalah Hot/Cold plate 35100 (Ugo Basile),

cryostat, mikroskop cahaya beserta kamera

(Olympus), neraca analitik (Sartorius), jangka

sorong, micro syringe (Hamilton), jarum suntik 30 G

(BD PrecisionGlide™ Needle), jarum Suntik 24 G

(Terumo) dan alat gelas.

Subyek Penelitian

Pada penelitian ini digunakan subyek

mencit putih (Mus musculus) strain Balb/c

(Laboratorium Hewan, Fakultas Farmasi Universitas

Airlangga), jantan, usia 2-3 bulan, dengan berat

badan 20-25 gram, sehat, tidak ada kelainan yang

tampak pada bagian tubuh.

Pembagian Kelompok Penelitian

Penelitian eksperimental ini dilakukan pada

49 ekor mencit jantan strain Balb/C yang telah

memenuhi persyaratan sebagai subyek penelitian.

Mencit kemudian dikelompokkan secara random

dalam 7 kelompok (1 kelompok kontrol negatif

(sham), 1 kelompok kontrol positif dan 5 kelompok

perlakuan), masing-masing terdiri dari 7 ekor mencit.

Mencit ditempatkan dalam kandang dengan otemperatur ruangan 27±1 C. Selama penelitian

kebutuhan makanan dan minuman dijaga dalam

jumlah yang cukup. Mencit diadaptasikan dengan

lingkungan selama satu minggu sebelum penelitian

dilaksanakan.

Pengaruh Pemberian Antagonis ......

26

Page 6: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Pembuatan Model Inflamasi

Mencit pada kelompok inflamasi, diinduksi

nyeri inflamasi dengan injeksi intraplantar CFA.

Mencit dianestesi dengan pemberian eter dan

ditempatkan pada papan bedah dengan posisi

terlentang, injeksi dilakukan pada intraplantar

tungkai kaki sebelah kanan dengan mengunakan CFA

40 L. Keadaan inflamasi didapatkan pada hari

pertama dan akan mencapai puncaknya pada hari

ketujuh. Pada kelompok sham diberikan injeksi

normal saline sebagai pengganti CFA.

Pembuatan Larutan MK-801

M K - 8 0 1 d i l a r u t k a n d a l a m 2 5 %

DMSO/Water For Injection (25%DMSO/WFI)

sehingga didapatkan konsentrasi 30,00 nmol/4µl.

Larutan MK-801 dengan konsentrasi 0,01; 0,10;

1,00; 10,00 dan 20,00 nmol/4µl dibuat dengan cara

mengencerkan larutan induk konsentrasi 30,0

nmol/4µl melalui pengenceran bertingkat.

Pemberian larutan MK-801

Larutan MK-801 diinjeksikan secara

intratekal mengikuti prosedur Hylden dan Wilcox

(1980). Jarum disisipkan pada ruang antar tulang

belakang diantara lumbal 5 dan lumbal 6 dari korda

spinalis, bila jarum sudah masuk ke column spinalis

dengan cepat ekor mencit akan menunjukan gerakan

flick. MK-801 diinjeksikan pada hari ke-7, 8, 9, 10,

11, 12 dan 13 sesudah dilakukan induksi CFA.

Injeksi MK-801 dilakukan sekali sehari dengan

volume 4 μL menggunakan microsyringe. Kelompok

sham dan kontrol positif hanya diberikan 25%

DMSO/WFI sebanyak 4μl dengan frekuensi

pemberian mengikuti kelompok perlakuan.

Evaluasi Tebal Plantar

Evaluasi tebal plantar dilakukan dengan

menggunakan jangka sorong. Pengukuran tebal

plantar dilakukan pada hari ke-1 sampai 21 setelah

injeksi intraplantar CFA dan injeksi intraplantar

normal saline. Nilai baseline ditentukan sebelum

injeksi (hari ke-0).

Evaluasi Hiperalgesia

Evaluasi respon nyeri yang dilihat

berdasarkan pengamatan visual terhadap perilaku-

perilaku yaitu mendekatkan kedua tungkai ke depan,

menjilat tungkai ke depan, gerakan meliuk, berusaha

m e l o m p a t k e l u a r a r e a w a r m p l a t e d a n

menghentakkan tungkai belakang. Pada pengujian

waktu ketahanan terhadap stimulasi panas, mencit

ditempatkan pada warm plate yang diatur pada suhu o48±0,5 C kemudian penghitung waktu segera

diaktifkan. Pengujian waktu ketahanan terhadap

stimulus panas dilakukan pada hari ke-0, 1, 3, 5, 7, 8,

10, 12, 14 dan 21 pada semua kelompok. Nilai

baseline ditentukan terlebih dahulu sebelum injeksi

dilakukan pada hari ke-0.

Histokimia Jaringan Spinal Cord

Mencit dimatikan dengan menggunakan

eter, kemudian hewan coba dibedah untuk diambil

spinal cord yang terdapat di dalam tulang belakang.

Jaringan spinal cord yang telah diambil kemudian

difiksasi dalam phosphate buffered formalin (PBF)

4% dengan pH 7,4. Setelah itu jaringan spinal cord

dicuci dengan xylene, direndam dalam parafin dan

dipotong melintang pada bagian lumbar dengan

mikrotom setebal 4-5 µm. Pewarnaan hematoxyllin-

eosin pada jaringan spinal cord diawali dengan

deparafinasi dengan cara mengalirkan aquadest pada

potongan jaringan. Potongan jaringan dialiri air

kemudian ditempatkan dalam hematoxyllin selama 5

menit, setelah itu dibilas dengan air mengalir.

Potongan tersebut kemudian direndam dalam litium

karbonat dan dibilas dengan air mengalir. Setelah itu

potongan diletakkan di dalam asam alkohol 1%

untuk beberapa detik sebelum dibilas kembali

dengan air mengalir dan direndam dalam eosin

selama 5 menit. Hasil yang tampak adalah inti sel

saraf dan ribosom pada spinal cord berwarna biru

kehitaman, sedangkan komponen protein berwarna

merah muda (Copenhaver et al.,1978).

Analisis Hasil

Rerata waktu ketahanan mencit terhadap

stimulus panas dan tebal plantar tiap kelompok

dibandingkan dengan kelompok sham dan inflamasi

pada hari ke-0 sampai 21. Data dianalisis dengan uji

statistik two way ANOVA. Jika ada perbedaan yang

bermakna (p<0,05), analisis statistik dilanjutkan

dengan Least Significant Different (LSD). Hasil

pewarnaan jaringan diamati di bawah mikroskop

cahaya, dengan membandingkan kelompok inflamasi

yang mendapat MK-801 pada berbagai dosis dengan

kelompok sham dan kelompok inflamasi untuk

mengetahui adanya sel-sel inflamatori pada jaringan

dan perubahan histologi pada dorsal horn. Analisis

dilakukan secara kualitatif terhadap hasil pengamatan

mikroskop.

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

27

Page 7: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Hasil dan Pembahasan

Model Inflamasi

Model inflamasi pada penelitian ini

diperoleh dengan menginduksi hewan coba (mencit)

menggunakan CFA melalui rute injeksi intraplantar.

Sebelum dilakukan injeksi intraplantar CFA, terlebih

dahulu dilakukan pengukuran baseline waktu

ketahanan mencit terhadap stimulus panas dengan

menggunakan warm plate dan tebal plantar mencit,

yang dicatat sebagai hari ke-0. Kemudian dilakukan

pembagian hewan coba dalam dua kelompok yaitu

kelompok sham (n=10) yang mendapat injeksi

normal saline dan kelompok CFA (n=46) yang

mendapatkan injeksi intraplantar CFA pada kaki

kanan (ipsilateral). Keberhasilan model inflamasi

ditandai dengan adanya penurunan waktu ketahanan

hewan coba (mencit) terhadap stimulus panas seperti

yang terlihat pada tabel 1 dan peningkatan tebal

plantar hewan coba (mencit) yang tampak pada tabel

2.

Pengaruh Pemberian MK-801 pada Mencit yang

Mengalami Nyeri Inflamasi

Injeksi larutan MK-801 diberikan melalui

rute intratekal pada hari ke-7 setelah injeksi CFA,

dimana pada hari ke-7 hewan coba telah mengalami

inflamasi. MK-801 diberikan pada 5 dosis yang

berbeda pada 5 kelompok hewan coba yaitu 0,01;

0,10; 1,0; 10,00; dan 20,00 nmol. Injeksi intratekal

MK-801 dilakukan sehari sekali selama 7 hari,

dimulai pada hari ke-7 hingga hari ke-13. Untuk

mengetahui pengaruh pemberian antagonis non-

kompetititf reseptor NMDA dalam menurunkan nyeri

inflamasi mencit, maka dilakukan pengukuran

terhadap parameter waktu ketahanan mencit terhadap

stimulus panas dengan uji menggunakan warm plate

(Tabel 1) dan parameter tebal plantar mencit (Tabel

2). Pengukuran kedua parameter ini dilakukan pada

hari ke-8, 10, 12, dan 14 yang mulai dilakukan pada

jam yang sama.

Pengaruh Pemberian Antagonis ......

28

Kelompok Treatment

Waktu Ketahanan Mencit terhadap Stimulus Panaspada hari ke- (detik±S.E.M)

8 10 12 14

Sham

(n=10)

Plasebo

(25% DMSO/WFI)

11,72

3

±0,6 11,40±0,4

9

10,62±0,4

9

11,35±0,6

0

CFA(n=46)

Plasebo

(25% DMSO/WFI)4,27±0,88 4,59±0,66 5,67±0,85 6,66±0,74

MK-801 0,01 nmol 8,87±1,5410,79±1,3

4

14,26±1,2

7

14,04±0,7

8

MK-801 0,01 nmol 8,04±1,32 9,73±0,9012,55±1,3

4

12,56±1,4

9

MK-801 0,01 nmol 9,04±0,7910,89±0,9

0

12,30±1,0

4

14,51±1,4

3

MK-801 10,00

nmol6,34±0,74 9,04±1,04

10,20±1,1

7

10,57±1,1

3

MK-801 10,00

nmol8,76±1,40 8,51±1,20 9,58±1,12

11,50±0,9

5

Tabel 1. Pengaruh Pemberian MK-801 pada Waktu Ketahanan Mencit Terhadap Stimulus Panas

Dari Tabel 1 dapat dilihat bahwa pemberian

MK-801 dengan dosis 0,01; 0,10; 1,00; 10,00; dan

20,00 nmol dapat menurunkan nyeri inflamasi pada

mencit yang sebelumnya telah mengalami

hiperalgesia setelah injeksi intraplantar CFA. Hal ini

tampak dari peningkatan waktu ketahanan mencit

pada kelompok perlakuan terhadap stimulus panas

dari hari ke-8 hingga hari ke-14 setelah diberikan

injeksi intratekal MK-801. Analisis statistik dengan

metode two way ANOVA menunjukkan adanya

perbedaan bermakna antara kelompok hewan coba

yang mendapatkan injeksi intratekal MK-801 dengan

dosis 0,01 nmol (F = 80,920; p<0,001); 0,10 nmol (1,12)

(F = 51,889; p<0,001); 1,00 nmol(F = 92,340; (1,12) (1,13)

Page 8: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

29

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

p<0,001); 10,00 nmol(F = 33,202; p<0,001); dan (1,12)

2 0 , 0 0 n m o l ( F = 3 7 , 0 4 9 ; p < 0 , 0 0 1 )( 1 , 1 2 )

masing-masing terhadap kelompok yang mengalami

inflamasi.

Kelompok Treatment

Waktu Ketahanan Mencit terhadap Stimulus Panaspada hari ke- (cm±S.E.M)

8 10 12 14

Sham

(n=10)

Plasebo

(25% DMSO/WFI)0,2016±0,0014 0,2158±0,0057 0,2114±0,0041 0,2142±0,0044

CFA(n=46)

Plasebo

(25% DMSO/WFI)0,4094±0,0172 0,3757±0,0176 0,3574±0,0100 0,3194±0,0120

MK-801 0,01 nmol 0,3517±0,0165 0,3274±0,0196 0,2989±0,0104 0,2794±0,0079

MK-801 0,01 nmol 0,3900±0,0243 0,3500±0,0254 0,3469±0,0292 0,3146±0,0230

MK-801 0,01 nmol 0,3869±0,0083 0,3571±0,0052 0,3234±0,0092 0,2980±0,0062

MK-801 10,00

nmol0,3936±0,0185 0,3437±0,0140 0,3171±0,0208 0,2927±0,0148

MK-801 10,00

nmol0,3843±0,0114 0,3700±0,0142 0,3250±0,0093 0,3063±0,0127

Tabel 2. Pengaruh Pemberian MK-801 pada Tebal Plantar Mencit

Sedangkan Tabel 2 terlihat bahwa dari hari

ke-8 hingga hari ke-14, terjadi penurunan tebal

plantar pada hewan coba yang mendapatkan injeksi

intratekal MK-801. Hal ini menunjukkan adanya

perbaikan pada kondisi nyeri inflamasi pada hewan

coba. Hasil analisis statistik dengan two way ANOVA

menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna

antara kelompok hewan coba yang mendapatkan

injeksi intratekal MK-801 dengan dosis 0,01 nmol

(F = 24,986; p<0,001); 1,00 nmol (F = 8,742; (1,12) (1,12)

p=0,005); dan 10,00 nmol (F = 6,396; p=0,015), (1,13)

masing-masing, terhadap kelompok yang mengalami

inflamasi. Namun pemberian injeksi intratekal MK-

801 dosis 0,10 nmol (F = 1,058; p=0.309) dan (1,12)

20,00 nmol (F = 3,970; p=0,052) tidak (1 ,12)

menyebabkan penurunan tebal plantar yang

bermakna jika dibandingkan dengan kelompok yang

mengalami inflamasi.

Uji statistik dengan metode one way ANOVA

dilakukan terhadap parameter waktu ketahanan

mencit terhadap stimulus panas dan tebal plantar

mencit antar kelompok pada masing-masing hari ke-

8, ke-10, ke-12, dan ke-14. Uji ini dilakukan untuk

mengetahui ada atau tidaknya perbedaan bermakna

antar kelompok pada parameter-parameter tersebut.

Hasil analisis pada parameter waktu ketahanan

terhadap stimulus panas menunjukkan bahwa

terdapat perbedaan bermakna antar kelompok hewan

coba yang telah mengalami inflamasi pada hari ke-8

(F =2,73; p=0,034), hari ke-10 (F =5,11; (5,37) (5,36)

p=0,001), hari ke-12 (F =7,04; p<0,001), dan hari (5,35)

ke-14 (F =6,61; p<0,001). Namun hasil analisis (5,34)

one way ANOVA terhadap parameter tebal plantar

mencit menunjukkan tidak adanya perbedaan

bermakna antar kelompok pada hari ke-8

(F =1,255; p=0,304), hari ke-10 (F =1,033; (5,37) (5,36)

p=0,413), hari ke-12 (F =1,580; p=0,191), maupun (5,35)

hari ke-14 (F =1,169; p=0,344). Oleh karena itu (5,34)

hanya analisis statistik pada parameter waktu

ketahanan mencit terhadap stimulus panas yang

dilanjutkan dengan metode uji LSD untuk

mengetahui kelompok hewan coba yang memberikan

perbedaan bermakna.

Pengaruh Pemberian MK-801 terhadap Histologi

Jaringan Spinal Cord

Pengaruh penginjeksian larutan MK-801

yang diberikan melalui rute intratekal pada hari ke-7

Page 9: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Keterangan:

: Sel Inflamatoris

: Nukleus

: Pembuluh Darah

Gambar 1. Dorsal Horn Jaringan Spinal Cord

Mencit pada Kelompok Sham (A),

Kelompok Inflamasi (B), Kelompok

C FA + M K - 8 0 1 0 , 0 1 n m o l ( C ) ,

Kelompok CFA+MK-801 1,0 nmol (D),

dan Kelompok CFA+MK-801 20,0 nmol

(E) dengan Perbesaran 400x

Keterangan:

: Sel Inflamatoris

: Nukleus

Gambar 1. White Matter Jaringan Spinal Cord

Mencit pada Kelompok Sham (A),

Kelompok Inflamasi (B), Kelompok

C FA + M K - 8 0 1 0 , 0 1 n m o l ( C ) ,

Kelompok CFA+MK-801 1,0 nmol (D),

dan Kelompok CFA+MK-801 20,0 nmol

(E) dengan Perbesaran 400x

setelah injeksi CFA diamati pula melalui histologi

jaringan spinal cord. Pengamatan secara mikroskopis

jaringan spinal cord dilakukan setelah jaringan

diwarnai dengan hematoxyllin-eosin. Untuk

mengetahui pengaruh pemberian MK-801 dalam

menurunkan nyeri inflamasi, dilakukan pengamatan

terhadap adanya sel-sel inflamatoris di white matter

spinal cord dan perubahan histologi pada dorsal horn

spinal cord. Hasil pengamatan jaringan spinal cord

seperti pada gambar 1 dan 2.

Pada gambar 1 terlihat bahwa pada white

matter spinal cord hewan coba yang mengalami

inflamasi (B) terdapat peningkatan infiltrasi sel-sel

inflamatori dibandingkan kelompok sham (A). Pada

kelompok hewan coba yang mendapat injeksi MK-

801 dosis 0,01; 1,00; dan 20,00 nmol terdapat

penurunan infiltrasi sel-sel inflamatori jika

dibandingkan dengan kelompok yang mengalami

inflamasi (C, D, dan E). Adanya penurunan infiltrasi

sel-sel inflamatoris menunjukkan adanya perbaikan

dari kondisi inflamasi pada hewan coba dengan

pemberian MK-801.

Perubahan pada area dorsal horn dari

spinal cord juga diamati mengingat area ini sebagai

pusat penghantaran nyeri. Pada dorsal horn spinal

cord pada hewan coba yang mendapat injeksi MK-

801 dosis 0,01 nmol (C), nukleolus tampak tidak

berbeda jelas dengan nukleus. Infiltrasi sel-sel

inflamatoris terlihat lebih sedikit daripada kelompok

inflamasi (B) di area dorsal horn spinal cord dan

jaringan interstitial tampak lebih rapat jika

dibandingkan dengan kondisi inflamasi, selain itu

pembuluh darah yang tampak lebih sedikit jika

dibandingkan dengan kelompok inflamasi (B). Pada

hewan coba yang mendapat injeksi MK-801 dengan

dosis 1,00 nmol (D) tampak bahwa infiltrasi sel-sel

inflamatoris pada daerah dorsal horn spinal cord

semakin berkurang jika dibandingkan dengan

kelompok inflamasi. Tampak nukleolus yang

semakin tidak prominent dan jaringan interstitial

yang tampak lebih rapat jika dibandingkan dengan

kelompok inflamasi (B). Pembuluh darah tampak

sangat sedikit pada kelompok yang mendapat injeksi

MK-801 1,00 nmol. Sedangkan pada pemberian MK-

801 dengan dosis 20,00 nmol (E), tampak infiltrasi

sel-sel inflamatori lebih sedikit pada daerah dorsal

horn spinal cord jika dibandingkan dengan kelompok

inflamasi. Nukleolus tampak tidak prominent jika

A

B

C

D

E

A

B

C

D

E

Pengaruh Pemberian Antagonis ......

30

Page 10: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

dibandingkan dengan kelompok inflamasi, namun

kondisi nukleolus tidak berbeda jauh jika

dibandingkan dengan kelompok yang mendapat MK-

801 0,01 atau 1,00 nmol. Jaringan interstitial tampak

lebih rapat serta pembuluh darah yang tampak lebih

sedikit daripada kelompok inflamasi. Terjadinya

penurunan infiltrasi sel-sel inflamatoris pada white

matter spinal cord dan perbaikan histologi dorsal

horn spinal cord mendekati histologi pada kelompok

sham menunjukkan adanya penurunan kondisi nyeri

inflamasi pada kelompok hewan coba yang

mendapatkan injeksi MK-801.

Reseptor NMDA telah diketahui memiliki

peranan penting dalam penghantaran rasa nyeri dan

sensitisasi nyeri (Petrenko et al., 2003). Secara klinis,

antagonis reseptor NMDA seperti ketamin,

memantin, amantadin, dan dekstrometorfan telah

digunakan untuk mengatasi kondisi nyeri kronik

(Sang, 2000; Shu et al., 2008). Namun manfaat terapi

tersebut terbatasi oleh afinitas dan potensi yang

rendah sehingga kurang efektif dalam pengatasan

nyeri kronik, sehingga dibutuhkan antagonis reseptor

NMDA yang lebih poten dan selektif (Paoletti &

Neyton, 2007; Parsons et al., 2007). Salah satu

an t agon i s r e sep to r NMDA yang s edang

dikembangkan adalah MK-801. Studi secara in vitro

melalui receptor binding assay telah menunjukkan

bahwa MK-801 merupakan antagonis nonkompetitif

reseptor NMDA yang sangat poten (Dravid et al.,

2007). Oleh karena itu pada penelitian in vivo ini

dilakukan pengamatan terhadap pengaruh pemberian

MK-801 pada kondisi nyeri kronik, yaitu nyeri

inflamasi. Parameter yang diamati meliputi waktu

ketahanan terhadap stimulus panas, tebal plantar, dan

histologi jaringan spinal cord. Hewan coba yang

dipilih pada penelitian ini adalah mencit karena

merupakan subyek penelitian yang memiliki

kemiripan sistem fisiologis terkait penghantaran

nyeri antara manusia dan mencit, serta karakter

perkembangbiakkannya yang cepat.

Pada penelitian ini digunakan CFA karena

mampu menyebabkan inflamasi pada hewan coba

dengan jangka waktu yang cukup panjang yaitu 21

hari dengan model inflamasi yang menyerupai

kondisi in vivo sehingga lebih alami. Kondisi

inflamasi muncul 24 jam setelah pemberian CFA

yang ditandai dengan peningkatan tebal plantar

secara bermakna (p<0,001) dan penurunan yang

bermakna pada parameter waktu ketahanan hewan

coba terhadap stimulus panas (p<0,001) jika

dibandingkan dengan kelompok sham yaitu

kelompok yang diberikan injeksi normal saline (NS).

Penurunan waktu ketahanan hewan coba terhadap

stimulus panas menunjukkan tejadinya hiperalgesia

yang merupakan tanda berkembangnya nyeri kronik.

Sedangkan peningkatan tebal plantar menunjukkan

munculnya inflamasi pada hewan coba. Penurunan

waktu ketahanan hewan coba terhadap stimulus

panas dan peningkatan tebal plantar mencit mencapai

maksimum pada hari ke-7 setelah penginjeksian

CFA. Lipopolisakarida dari Mycobacterium

tuberculosis yang telah mati dalam CFA

bertanggungjawab atas terjadinya inflamasi pada

hewan coba melalui aktivasi monosit (Calder, 2006).

CFA menginduksi inflamasi secara lebih alami

melalui rangkaian pengaktifan sistem imun, terutama

interleukin-1β, yang kemudian menyebabkan

upregulasi NGF sehingga terjadi hipersensitivitas

terhadap nyeri (Garabedian et al . , 1995).

Hiperalgesia yang terjadi setelah injeksi CFA juga

dikarenakan adanya peningkatan reaktivitas reseptor

NMDA dimana terjadi pergeseran hiperpolarisasi

pada potensial aktivasi reseptor NMDA (Guo &

Huang, 2001). Hal ini juga didukung dengan studi

oleh Yang et al. (2009) menunjukkan bahwa injeksi

CFA menyebabkan peningkatan reaktivitas subunit

NR1 reseptor NMDA dan peningkatan densitas

subtipe NR2B reseptor NMDA.

Stimulasi nyeri yang bersifat persisten oleh

CFA akan menyebabkan adaptasi atau homeostasis

intraseluler sel saraf. Sel saraf pada otak dan spinal

cord akan mengalami plastisitas melalui upregulasi

jenis dan jumlah reseptor dan bertanggungjawab

pada penghantaran nyeri (Suroto, 2006; Khotib &

Zulkarnain, 2007). Di samping itu juga terjadi

remodelling sel saraf dengan pertumbuhan dendrit

(sprouting) dan percabangan pada akson terminal,

sehingga terjadi peningkatan synaptogenesis. Hal

tersebut mengakibatkan peningkatan ikatan glutamat

pada reseptor NMDA dan memperparah terjadinya

sensitisasi sentral. (Khotib & Zulkarnain, 2007).

Perubahan-perubahan tersebut merupakan awal

terjadinya nyeri kronik (Suroto, 2006).

Pada hari ke-7 setelah injeksi CFA, setelah

hewan coba mengalami inflamasi, diberikan MK-801

dengan 5 dosis yang berbeda melalui injeksi

intratekal pada 5 kelompok hewan coba yang

berbeda, sedangkan injeksi plasebo (25%

DMSO/WFI) diberikan secara intratekal pada

kelompok sham dan kelompok yang mengalami

inflamasi. Plasebo yang diberikan pada hewan coba

merupakan solvent yang digunakan untuk melarutkan

MK-801. Solvent ini dipilih karena MK-801

memiliki kelarutan yang besar pada DMSO

31

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

Page 11: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

(>20mg/mL), sedangkan konsentrasi 25% DMSO

dipilih karena dapat melarutkan MK-801 dan aman

bagi hewan coba karena tidak menimbulkan 3toksisitas (Brobyn, 1975; Anonim , 2010). Selain itu,

konsentrasi DMSO yang digunakan pada penelitian

ini belum mencapai konsentrasi yang dapat

menimbulkan efek analgesik-antiinflamasi (70%

DMSO) (Jacob & Herschler, 1985). Dosis MK-801

yang diberikan adalah 0,01; 0,10; 1,00; 10,00; dan

20,00 nmol melalui rute injeksi intratekal. Dosis

p e m b e r i a n M K - 8 0 1 d i t e n t u k a n d e n g a n

memperhatikan dosis toksik dari MK-801. Penelitian

menunjukkan bahwa dosis MK-801 yang melebihi

30,00 nmol dapat menimbulkan efek samping

psikotomimetik (Zhang et al.,2005). Oleh karena itu

pada penelitian ini ditetapkan dosis tertinggi adalah

20,00 nmol yang lebih kecil dari dosis toksik,

sedangkan dosis pemberian lainnya yang lebih kecil

didapatkan dengan pengenceran bertingkat. Pada

penelitian ini MK-801 diberikan melalui rute

intratekal dikarenakan Gate Control Theory of Pain

menyebutkan bahwa dorsal horn pada spinal cord

merupakan gerbang utama penghantaran nyeri dari

perifer menuju sistem saraf pusat (Dickenson, 2002;

Flossos, 2004). Oleh karena itu, pemberian MK-801

melalui rute intratekal bertujuan agar obat dapat

langsung bekerja pada dorsal horn pada spinal cord

dan memberikan efek penghambatan terhadap

penghantaran rangsangan nyeri dengan lebih cepat.

Injeksi intratekal, baik plasebo (25% DMSO/WFI)

maupun MK-801, diberikan selama 7 hari dengan

frekuensi pemberian satu kali injeksi setiap hari.

Hasil pengamatan terhadap parameter

waktu ketahanan terhadap stimulus panas

menunjukkan bahwa terdapat perbaikan pada kondisi

inflamasi pada kelompok hewan coba yang telah

diberikan injeksi intratekal MK-801. Hal ini ditandai

dengan peningkatan secara bermakna waktu

ketahanan hewan coba terhadap stimulus panas pada

semua kelompok dosis MK-801 jika dibandingkan

dengan kelompok yang mengalami inflamasi

(p<0,001). Pada penelitian ini dilakukan uji statistik

untuk mengetahui pengaruh pemberian MK-801 dari

hari ke hari selama 7 hari pemberian. Hasil

menunjukkan bahwa peningkatan bermakna pada

parameter waktu ketahanan hewan coba terhadap

stimulus panas mulai terjadi pada hari ke-8 di semua

kelompok dosis kecuali dosis 10 nmol, jika

dibandingkan terhadap kelompok yang mengalami

inflamasi. Hal ini dimungkinkan karena adanya

faktor psikis yang juga mempengaruhi respon hewan

coba terhadap stimulus nyeri yang tidak teramati

pada penelitian ini (Woolf, 2004). Peningkatan

bermakna juga terjadi pada hari berikutnya yaitu hari

ke 10, hari ke-12, dan hari ke-14 seperti terlihat pada

tabel 1. Kemampuan MK-801 dalam mengatasi nyeri

kronik dikarenakan adanya penghambatan pada

penghantaran stimulus nyeri di gerbang utama

penghantaran nyeri tepatnya pada reseptor NMDA di

dorsa l horn pada sp ina l cord . MK-801

mengantagonisasi reseptor NMDA secara

nonkompetitif pada PCP binding site dari reseptor

NMDA sehingga akan menghambat pemasukkan ion 2+Ca , dan akibatnya, berbagai jalur signaling

intraseluler meliputi aktivasi Nitric Oxide Synthase

(NOS) , Protein Kinase C (PKC), dan Calmodulin

Dependent Kinase II (CaMKII) akan terhambat

sehingga perjalanan stimulus nyeri dan sensitisasi

nyeri dapat dihambat (Hudspith et al., 2003; Lipton,

2004).

Pada hari ke-14, setelah diberikan injeksi

intratekal MK-801 sebanyak 7 kali, terlihat bahwa

waktu ketahanan terhadap stimulus panas meningkat

pada semua kelompok hewan coba yang diberikan

injeksi intratekal MK-801 dengan 5 dosis berbeda.

Namun peningkatan waktu ketahanan terhadap

stimulus panas pada dosis MK-801 10,00 dan 20,00

nmol tidak lebih tinggi jika dibandingkan dengan

dosis MK-801 0,01; 0,10; dan 1,00 nmol. Hal ini

terlihat dari nilai waktu ketahanan terhadap stimulus

panas dimana dosis MK-801 0,01 nmol mampu

meningkatkan waktu ketahanan terhadap stimulus

panas menjadi 14,04 detik; dosis MK-801 0,10 nmol

mampu meningkatkan waktu ketahanan terhadap

stimulus panas menjadi 12,56 detik; dosis MK-801

1,00 nmol mampu meningkatkan waktu ketahanan

terhadap stimulus panas menjadi 14,51 detik; dosis

MK-801 10,00 nmol mampu meningkatkan waktu

ketahanan terhadap stimulus panas menjadi 10,57

detik; dan dosis MK-801 20,00 nmol mampu

meningkatkan waktu ketahanan terhadap stimulus

panas menjadi 11,50 detik. Sedangkan waktu

ketahanan terhadap stimulus panas pada kelompok

yang mengalami inflamasi pada hari ke-14 adalah

6,66 detik. Selain itu, terlihat dari nilai signifikansi

masing-masing dosis MK-801 terhadap kelompok

yang mengalami inflamasi (p<0,001 untuk MK-801

dosis 0,01 nmol; p=0,001 untuk MK-801 dosis 0,01

nmol; p<0,001 untuk MK-801 dosis 1 nmol; p=0,022

untuk MK-801 dosis 10 nmol; p=0,006 untuk MK-

801 dosis 20 nmol). Berbeda dengan penelitian oleh

Mao et al. (1992), dari hasil pada penelitian terlihat

bahwa pemberian injeksi intratekal MK-801 tidak

menunjukkan dose dependent manner. Hal ini

Pengaruh Pemberian Antagonis ......

32

Page 12: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

dimungkinkan karena faktor perbedaan jenis strain

hewan coba penelitian yang digunakan, faktor

perbedaan kondisi lingkungan yang mempengaruhi

seperti suara dan suhu. Selain itu, efek samping dari

MK-801 dosis tinggi yang diakibatkan upregulasi

reseptor NMDA subtipe NR2A dapat mengganggu

pengamatan respon motoris pada saat uji nosiseptif

(Jones, 2003; Alilain & Goshgarian, 2007).

Pengamatan pada parameter tebal plantar

menunjukkan bahwa dosis MK-801 0,01; 1,00; dan

10,00 nmol memberikan penurunan tebal plantar

secara bermakna jika dibandingkan dengan

kelompok yang mengalami inflamasi (p<0,001 untuk

dosis 0,01 nmol; p=0,005 untuk dosis 1,00 nmol; dan

p=0,015 untuk dosis 10,00 nmol), sedangkan pada

pemberian MK-801 dosis 0,10 dan 20,00 nmol tidak

terjadi penurunan tebal plantar secara bermakna jika

dibandingkan dengan kelompok yang mengalami

inflamasi (p=0,309 untuk dosis 0,10 nmol; dan

p=0,052 untuk dosis 20,00 nmol). Hasil yang

f luktuat i f pada pengukuran tebal plantar

dimungkinkan karena kompleksnya patofisiologi

inflamasi, sedangkan MK-801 memiliki mekanisme

aksi antagonisasi pada reseptor NMDA yang hanya

salah satu faktor dalam patofisiologi inflamasi.

Spinal cord merupakan jaringan yang

penting bagi integrasi dan pemrosesan informasi

nosiseptif (Petrenko et al., 2003). Untuk mempelajari

perubahan jaringan spinal cord, terutama pada daerah

dorsal horn dan white matter, maka dilakukan

pengamatan jaringan spinal cord yang telah diwarna

dengan pewarnaan hematoxyllin-eosin. Jaringan

spinal cord yang diwarna dengan pewarna ini akan

memberikan warna merah muda pada sitoplasma

sedangkan nukleus akan memberikan warna biru tua

(Snell, 1984). Dengan perbesaran 400X, pada white

matter dari spinal cord kelompok inflamasi terlihat

adanya infiltrasi sel-sel inflamatoris yang lebih

banyak daripada kelompok sham . Sel-sel

inflamatoris yang menginfiltrasi spinal cord

berbentuk bulat kecil dan dengan pewarnaan

hematoxyllin-eosin tampak berwarna biru gelap

hampir kehitaman. Adanya inflamasi setelah injeksi

CFA menyebabkan terjadinya infiltrasi monosit pada

kondisi kronik (Hausmann, 2003). Pada kelompok

sham yang diberikan injeksi NS intraplantar, tetap

terdapat infiltrasi sel inflamatoris walaupun lebih

sedikit jika dibandingkan dengan kelompok

inflamasi. Hal ini dikarenakan adanya kerusakan

jaringan pada saat dilakukan injeksi intraplantar NS.

Selain itu, pada dorsal horn spinal cord kelompok

inflamasi teramati bahwa nukleolus tampak lebih

prominent jika dibandingkan dengan kelompok

sham. Hal ini disebabkan karena adanya peningkatan

aktivitas neuron saat terjadi inflamasi akibat induksi

CFA, dimana neuron harus terus melepaskan dan

menerima neurotransmitter glutamat (Snell, 1984).

Pada area dorsal horn juga dapat terlihat jaringan

interstitial yang lebih renggang dan pembesaran

pembuluh darah jika dibandingkan dengan kelompok

sham. Hal ini disebabkan adanya dilatasi pembuluh

darah dan peningkatan permeabilitas pembuluh darah

yang menyebabkan pembuluh darah terlihat jelas

dengan pewarnaan hematoxyllin-eosin, serta adanya

perembesan se rum dar i pembuluh darah

menyebabkan ja r ingan in te rs t i t i a l makin

merenggang. Vasodilatasi dan peningkatan

permeabilitas pembuluh darah merupakan akibat dari

munculnya prostaglandin E di sistem saraf pusat 2

(Suroto, 2006).

Pengamatan jaringan spinal cord dilakukan

pada kelompok hewan coba yang mendapat injeksi

intratekal MK-801 dosis 0,01; 1,0; dan 20,0 nmol.

Pengamatan secara mikroskopis menunjukkan

adanya perbaikan pada kondisi jaringan spinal cord

hewan coba. Pada white matter spinal cord hewan

coba yang mengalami inflamasi, terdapat infiltrasi

sel-sel inflamatori. Pada kelompok hewan coba yang

mendapat injeksi MK-801 dosis 0,01; 1,0; dan 20,0

nmol terdapat penurunan infiltrasi sel-sel

inflamatoris jika dibandingkan dengan kelompok

yang mengalami inflamasi. Pada area dorsal horn

dari spinal cord juga terlihat bahwa adanya

penurunan jumlah sel-sel inflamatoris yang

menginfiltrasi daerah dorsal horn spinal cord jika

dibandingkan dengan kelompok yang mengalami

inflamasi. Nukleolus tampak tidak berbeda jauh

dengan nukleus atau tampak semakin tidak

prominent jika dibandingkan dengan kelompok

inflamasi. Selain itu, jaringan interstitial tampak

lebih rapat jika dibandingkan dengan kelompok

inflamasi dan pembuluh darah yang tampak telah

berkurang. Penurunan infiltrasi sel-sel inflamatoris

pada white matter spinal cord dan perbaikan

histologi neuron dan jaringan interstitial di dorsal

horn spinal cord menunjukkan penurunan kondisi

nyeri inflamasi pada kelompok hewan coba yang

mendapatkan MK-801 sebab MK-801 akan

menghambat aktivasi Mitogen Activated Protein

Kinase (MAPK) yang selanjutnya menghambat

transkripsi gen dan menurunkan sintesis COX-2

(Twyman, 1998).

33

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

Page 13: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Daftar Pustaka

Alilain, W. J. dan H. G. Goshgarian. 2007. MK-801

Upregulates NR2A Protein Levels and

Induces Functional Recovery of the

Ipsilateral Hemidiaphragm Following Acute

C2 Hemisection in Adult Rats. The Journal

of Spinal Cord Medicine. 30 (4) : 346-354.

Anonim. 2010, (+)-MK-801 Hydrogen Maleate,

http://www.sigmaaldrich.com/, diakses

tanggal 15 Agustus 2010.

Brenner, G. J., 2002. Neuronal Basis of Pain. Dalam:

Ballantyne, J., Fishman, S., dan Abdi, S.

(Eds). The Massachusetts General Hospital

Handbook of Pain Management. Edisi ke-2,

Philadelphia: Lippincott Williams and

Wilkins Publisher. 7.

Brobyn, R. D., 1975. The Human Toxicology of

Dimethyl Sulfoxide. http://www.dmso.org/

diakses tanggal 15 Agustus 2010.

Calder, P. C., 2006. n-3 Polyunsaturated Fatty Acids,

Inflammation, and Inflammatory Diseases.

American Journal of Clinical Nutrition, 83

:1505S-1519S.

Carr, D. B., dan L. C.Goudas. 1999. Accute pain.

Lancet, 353 : 2051-2058.

Copenhaver, W., D.E..Kelly dan R.L.Wood. 1978.

Bailey's Textbook of Histology, Asian

Edition. Edisi ke-17, Baltimore: The

Williams and Wilkins Company, 350-351.

Dickenson, A. H., 2002. Editorial I, Gate Control

Theory of Pain Stands the Test of Time.

British J. Anaesthesia, 88 (6) :1-3.

D'Mello, R., dan A.H. Dickenson. 2008. Spinal Cord

Mechanisms of Pain. British Journal of

Anaesthesia, 100 (4) :1-9.

Dravid, S. M., Erreger, K., Yuan, H., Nicholson, K.,

Le, P., Lyuboslavsky, P., Almonte, A.,

Murray, E., Mosley, C., Barber, J., French,

A., Balster, R., Murray, T. F., dan Traynelis,

S. F., 2007. Subunit-Specific Mechanisms

and Proton Sensitivity of NMDA Receptor

Channel Block. Journal of Physiology, 581

(1) :107–128.

Flossos, A., 2004. Αn Introduction to the

Neurobiology of Pain. The Greek E-Journal

of Perioperative Medicine, 2 : 2-10.

Garabedian, B., S., Poole, S., Allchorne, A., Winter,

J., dan Woolf, C., J., 1995. Contribution of

Interleukin- 1β to the Inflammation-

Induced Increase in Nerve Growth Factor

Levels and Inflammatory Hyperalgesia.

British J. Pharmacology, 115 :1265-1275.

Guo, H., dan L.Y.M.Huang. 2001. Alteration in the

Voltage Dependence of NMDA Receptor

Channels in Rat Dorsal Horn Neurones

Following Peripheral Inflammation. J.

Physiology, 537 (1) :115-123.

Hausmann , O . N. , 2003 . Pos t - t r aumat ic

Inflammation following Spinal Cord Injury.

Spinal Cord, 41 : 369-378.

Hudspith, M.J., P.J.Siddall and R. Munglani. 2003.

Physiology of Pain, Philadelphia: Lippicott-

Raven Publisher. 267-285.

Jacob, S. W., dan Herschler, R., 1985. Pharmacology

of DMSO. http://www. dmso.org/, diakses

tanggal 15 Agustus 2010.

Jones, J. M. M., 2003. Effects of MK-801 on Opioid

Antinociception: an Examination of

Morphine, U50,488H and SNC80 in Male

and Female Rats. Wahington: Washington

State University.

Kartini, 2007. Hubungan Nyeri dengan Gangguan

Aktivitas Interpersonal pada Individu Usia

50 Tahun Keatas di Kabupaten Purworejo.

Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada.

Khotib, J., dan B.S.Zulkarnain. 2007. Penggunaan

Analgetika pada Berbagai Bidang Terapi.

Proceeding Seminar Nasional Farmasi

K l i n i k : I m p l e m e n t a s i P e l a y a n a n

Kefarmasian dalam Tatanan Klinik dan

Update Farmakoterapi. 82-94.

Kocaeli, H., E. Korfali, H. Öztürk, N. Kahveci dan

S.Yılmazlar. 2005. MK-801 Improves

Neurological and Histological Outcomes

after Spinal Cord Ischemia Induced by

Transient Aortic Cross-Clipping in Rats.

Surgical Neurology, 64 (2) : S22-S26.

Köhr, G. 2007. NMDA Receptor Antagonists: Tools

in Neuroscience with Promise for treating

CNS Pathologies. J. Physiology, 581 (1) :

hal.1-2.

Le Bars, D., Gozariu, M., dan Cadden, S. W., 2001.

A n i m a l M o d e l s o f N o c i c e p t i o n .

Pharmacological Reviews, Vol. 53, No. 4,

hal. 593-652.

Lipton, S., A., 2004. Failures and Successes of

NMDA Receptor Antagonists: Molecular

Basis for the Use of Open-Channel

Blockers like Memantine in the Treatment

of Acute and Chronic Neurologic Insults. J.

Am. Soc. Exp. Neuro Therapeutics, 1 :101-

110.

Lynch, M., dan Watson, C. P. N, 2006. The

Pharmacotherapy of Chronic Pain: A

Pengaruh Pemberian Antagonis ......

34

Page 14: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

35

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

Review. Pain Research and Management,

11 (1) :1-28.

O'Neil, C. K., 2008. Pain Management. Dalam:

Marie A. Chisholms-Burns, Barbara G.

Wells, Terry Schwinghammer, Patrick M.

Malone, Jill M. Kolesar, John C.

Rotschafer, Joseph T. DiPiro (Eds.).

Pharmacotherapy Principles & Practice.

Edisi ke-7, New York: McGraw-Hill

Medical Publishing Division. 1089-1104.

Page, C., M. Curtis, M. Suter, M.Walker dan B.

Hoffmann. 2002. Integrated Pharmacology.

Edisi ke-2, London: Mosby. 272-280.

Paoletti, P., dan Neyton, J., 2007. NMDA Receptor

Subunits: Function and Pharmacology.

Current Opinion in Pharmacology on line,

Vol. 1 , hal. 1-23.

Parsons, C. G., A. Stöffler dan W. Danysz. 2007.

Memantine: a NMDA Receptor Antagonist

that Improves Memory by Restoration of

Homeostasis in the Glutamatergic System -

too little activation is bad, too much is even

worse. Neuropharmacology. 53:. 699-723.

Petrenko, A. B., T. Yamakura, H. Baba dan K.

Shimoji. 2003. The Role of N-Methyl-D-

Aspartate (NMDA) Receptors in Pain: A

Review. Anesthesia and Analgesia. 97 :.

1108-1116.

R o a c h , S . , 2 0 0 3 . I n t r o d u c t o r y C l i n i c a l

Pharmacology. Edisi ke-7, Philadelphia:

Lippincott Williams snd Wilkins. 150-179.

Sang, C. N., 2002. NMDA-Receptor Antagonists in

Neuropathic Pain: Experimental Methods to

Clinical Trials. J. Pain and Symptom

Management. 19 (1) : 21-25.

Shu, H., M. Hayashida, W. Huang, K. An, S. Chiba,

K. Hanaoka dan H. Arita. 2008. The

Comparison of Effects Processed Aconiti

Tuber, U50488H and MK-801 on the

Antinociceptive Tolerance to Morphine. J.

Ethnopharmacology. 117 :158-165.

Snell, R., S., 1984. Clinical and Functional Histology

for Medical Students. Edisi ke-1, Boston:

Little, Brown and Company, hal. 272-274.

Suroto, 2006. Aspek Neurobiologi Nyeri dan

In f lamas i . Da lam: Leksmono. P. ,

Mohammad Saiful Islam, dan Yudha

Haryono (Eds.). Kumpulan Makalah

Pertemuan Ilmiah Nasional II Perhimpunan

Dokter Spesialis Saraf Indonesia. Surabaya:

Airlangga University Press. 51-66.

Torres, F. V., M. Filho, C. Antunes, E. Kalinine, E.,

Antoniolli, L.V.C. Portela, R.O. Souza dan

A.B.L. Tort. 2009. Electrophysiological

Effects of Guanosine and MK-801 in a

Quinolinic Acid-Induced Seizure Model.

Experimental Neurology. 221 (2): 296-

306.

Twyman, R. M. 1998. Advance Molecular Biology:

A Concise Reference. New Delhi: Viva

Books Private Limited. 423-442.

Vezzani, A., R. Serafini, M.A. Stasi, S. Caccia, I.

Conti, I., R.V. Tridico dan R.Samanin.

1989. Kinetics of MK-801 and its effect on

quinolinic acid-induced seizures and

neurotoxicity in rats. J.Pharm and Exp

Therap. 249 (1) : 278-283.

Woolf, C. J., 2004. Pain: Moving from Symptom

Control toward Mechanism-Specific

Pharmacologic Management. Annals of

Internal Medicine. 140 :441-451.

Yang, X., H.B. Yang, Q.J. Xie, X.H. Liu dan X.H.

Hu. 2009. Peripheral inflammation

increased the synaptic expression of NMDA

receptors in spinal dorsal horn. Pain.

purchase 144 (1) : 162-169.

Yoon, M. H., H.B. Bae dan J.I. Choi. 2005.

Antinociceptive Interactions between

Intrathecal Gabapentin and MK801 or

NBQX in Rat Formalin Test. J. Korean

Medical Sci. 20 :307-312.

Page 15: 1 / 3journal.unair.ac.id/downloadfull/VetMed5852-5d7772825efullabstract.pdfanalgesik non-opioid, m aupun analgesik opioid belum memadai dalam mengurangi nyeri kronik (C arr & G o u

Zhang, R. X., L. Wang, X. Wang, K. Ren, B.M.

B e r m a n d a n L . L a o . 2 0 0 5 .

Electroacupuncture Combined with MK-

801 Prolongs Anti-hyperalgesia in Rats

w i t h P e r i p h e r a l I n f l a m m a t i o n .

Pharmacology, Biochemistry, and Behavior.

81 :146-151.

Pengaruh Pemberian Antagonis ......

36